背景:2型糖尿病已經(jīng)成為全球性危害人類健康的重要問題,其特征主要是胰島素抵抗和胰島素分泌相對(duì)不足。改善胰島素抵抗是延緩2型糖尿病進(jìn)程的重要手段。葛根芩連湯是傳統(tǒng)經(jīng)方,前期研究證實(shí)該方可以改善初診2型糖尿病患者的胰島素敏感性,但其作用機(jī)制尚不明了。目的:應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法聯(lián)合質(zhì)譜分析技術(shù)探討葛根芩連湯的化學(xué)組分及該方潛在的作用機(jī)制。本研究著眼于葛根芩連湯對(duì)肝臟胰島素抵抗的調(diào)節(jié)作用,從體內(nèi)體外研究葛根芩連湯通過(guò)miR-146b/SIRT1改善肝臟胰島素抵抗的作用,力求闡明葛根芩連湯從“肝”治療糖尿病。方法:(1)應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,結(jié)合生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)分析葛根芩連湯中草本來(lái)源藥物的化學(xué)組成及其潛在治療靶點(diǎn)與涉及的信號(hào)通路,從多角度綜合地分析葛根芩連湯的作用機(jī)制。(2)以高脂誘導(dǎo)的C57BL/6J胰島素抵抗小鼠為模型,用不同劑量的葛根芩連湯干預(yù),腹腔葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(IPGTT)及腹腔胰島素耐量實(shí)驗(yàn)(IPITT)評(píng)估胰島素抵抗?fàn)顟B(tài),Elisa法檢測(cè)小鼠血清中生化、胰島素水平,肝臟HE染色,蛋白印跡法結(jié)合qPCR檢測(cè)肝臟組織SIRT1/FoxO1信號(hào)通路中相關(guān)的蛋白及mRNA的表達(dá)。(3)以棕櫚酸...

【文章頁(yè)數(shù)】：139 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
上篇
    第一章 文獻(xiàn)研究
        1 傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對(duì)肝臟胰島素抵抗的認(rèn)識(shí)
            1.1 定義
            1.2 歷史沿革
            1.3 中醫(yī)對(duì)肝臟胰島素抵抗病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)
            1.4 中醫(yī)對(duì)肝臟胰島素抵抗的治療
        2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肝臟胰島素抵抗的研究
            2.1 定義
            2.2 病因病機(jī)
            2.3 診斷
            2.4 治療
    第二章 課題組前期對(duì)肝臟胰島素抵抗的研究成果
        1 葛根芩連湯的立方依據(jù)及背景
        2 葛根芩連湯治療胰島素抵抗的前期研究基礎(chǔ)
            2.1 臨床實(shí)驗(yàn)
            2.2 本課題的創(chuàng)新構(gòu)思
    第三章 microRNA-146b與SIRT1研究進(jìn)展
        1 miR-146b的研究進(jìn)展
        2 SIRT1與胰島素抵抗的研究進(jìn)展
            2.1 SIRT1與骨骼肌胰島素抵抗
            2.2 SIRT1與脂肪組織胰島素抵抗
            2.3 SIRT1與肝臟胰島素抵抗
    參考文獻(xiàn)
中篇
    第一章 葛根芩連湯的藥理學(xué)分析
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 藥物
            1.2 動(dòng)物
            1.3 儀器設(shè)備
        2 含藥血清色譜質(zhì)譜聯(lián)合分析
            2.1 動(dòng)物喂養(yǎng)
            2.2 動(dòng)物分組及給藥方法
            2.3 含藥血清的制備
            2.4 含藥血清的質(zhì)譜測(cè)定
        3 葛根芩連湯的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析
            3.1 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析
            3.2 結(jié)果與分析
        參考文獻(xiàn)
    第二章 葛根芩連湯對(duì)高脂誘導(dǎo)肝臟胰島素抵抗小鼠SIRT1/FoxO1信號(hào)通路的影響
        前言
        1 實(shí)驗(yàn)材料及方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 高脂飼料
            1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.5 蛋白印跡實(shí)驗(yàn)所用抗體
            1.6 Real-time PCR所用引物序列
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 肝臟胰島素抵抗小鼠模型的制備
            2.2 動(dòng)物分組及給藥
            2.3 小鼠腹腔葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(IPGTT)
            2.4 小鼠腹腔胰島素耐量實(shí)驗(yàn)(IPITT)
            2.5 標(biāo)本的留取和血清指標(biāo)的測(cè)定
            2.6 各血清指標(biāo)ELISA檢測(cè)
            2.7 肝臟組織病理
            2.8 肝臟組織RNA提取
            2.9 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)制備cDNA
            2.10 Real-time PCR檢測(cè)
            2.11 肝臟組織總蛋白提取
            2.12 BCA測(cè)定蛋白濃度
            2.13 免疫沉淀
            2.14 SDS-PAGE電泳
            2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 高脂喂養(yǎng)對(duì)小鼠的影響
            3.2 各組給藥前后體重和血糖的變化
            3.3 各組給藥前后肝酶的變化
            3.4 各組給藥前后血脂的變化
            3.5 各組給藥前后胰島素、HOMA-IR的變化
            3.6 各組IPGTT的變化
            3.7 各組IPITT的變化
            3.8 各組小鼠肝臟病理結(jié)果比較
            3.9 各組小鼠SIRT1、FoxO1 mRNA含量
            3.10 各組小鼠SIRT1/FoxO1信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較
        4 分析及討論
        5 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 葛根芩連湯含藥血清對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞SIRT1/FoxO1信號(hào)通路的影響
        前言
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞
            1.2 試驗(yàn)藥物及試劑
            1.3 主要試劑的配制
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立
            2.3 HepG2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組
            2.4 HepG2細(xì)胞siRNA的轉(zhuǎn)染
            2.5 糖原試劑盒檢測(cè)糖原合成能力
            2.6 MTT法檢測(cè)藥物對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響
            2.7 細(xì)胞蛋白的提取
            2.8 BCA測(cè)定蛋白濃度
            2.9 免疫沉淀
            2.10 SDS-PAGE電泳
            2.11 細(xì)胞mRNA的提取
            2.12 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)制備cDNA
            2.13 Real-time PCR檢測(cè)
            2.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 棕櫚酸最大無(wú)毒濃度的測(cè)定
            3.2 吡格列酮最大無(wú)毒濃度的測(cè)定
            3.3 葛根芩連湯含藥血清最大無(wú)毒濃度的測(cè)定
            3.4 葛根芩連湯對(duì)HepG2細(xì)胞糖原合成能力的影響
            3.5 葛根芩連湯對(duì)SIRT1/FoxO1信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            3.6 葛根芩連湯對(duì)PPARγ、FABP4相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            3.7 SIRT1介導(dǎo)葛根芩連湯對(duì)HepG2細(xì)胞FoxO1、PPARy的調(diào)控作用
        4 分析及討論
        5 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
    第四章 葛根芩連湯對(duì)肝臟胰島素抵抗下miR-146b/SIRT1的影響
        前言
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
            1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1小鼠肝臟組織RNA的提取
            2.2. HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.3細(xì)胞RNA的提取
            2.4逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)制備cDNA
            2.5 Real-time PCR檢測(cè)
            2.6細(xì)胞蛋白的提取
            2.7 BCA測(cè)定蛋白濃度
            2.8免疫沉淀
            2.9 SDS-PAGE電泳
            2.10數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 miR-146b在各組小鼠肝臟中的表達(dá)
            3.2 miR-146b在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)
            3.3 miR-146b mimics轉(zhuǎn)染后SIRTl/FoxOl信號(hào)通路相關(guān)分子蛋白及mRNA的變化
            3.4 miR-146b inhibitor轉(zhuǎn)染后SIRTl/FoxOl信號(hào)通路相關(guān)分子蛋白及mRNA的變化
        4討論及分析
        5實(shí)驗(yàn)結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
下篇
    全文小結(jié)
        1研究結(jié)論
        2創(chuàng)新點(diǎn)
        3研究不足
        4展望
附錄
    附件一縮略詞英漢對(duì)照表
    附件二中醫(yī)證候評(píng)分表
    附件三葛根芩連湯中藥材主要有效化學(xué)成分
    附件四葛根芩連湯潛在參與信號(hào)通路
    附錄五miR-146b和SIRT1預(yù)測(cè)位點(diǎn)
讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3887912