干燥綜合征(Sjogren,s syndrome,SS)是一種以淚腺,唾液腺等外分泌腺為受累器官的一種自身免疫性疾病。目前臨床上尚無治療干燥綜合征的理想藥物,多采取替代治療如人工淚液、毛果蕓香堿等藥物緩解癥狀,以及免疫治療等治療方法,無法從根本上解決病人的痛苦,也無法有效的制止疾病的惡化。因此臨床上一種低毒高效的可以治愈SS的藥物有著迫切的需求。CP-25(苯磺酰芍藥苷,Phenylsulfonylpaeoniflorin,代號CP-25)是芍藥苷(Paeoniflorin,Pae)經(jīng)酯化修飾得到的單體成分。本課題組前期研究結(jié)果表明CP-25對原發(fā)性干燥綜合征小鼠模型療效顯著,但CP-25對其作用機制尚不清楚�；谝酝难芯�,本研究成功建立了C57BL/6小鼠抗原誘導(dǎo)干燥綜合征動物模型,采用CP-25的有效劑量給藥,觀察頜下腺組織的病理結(jié)構(gòu)改變,頜下腺中CXCL13、CXCR5的表達(dá),探討頜下腺病理改變與CXCL13-CXCR5的關(guān)系;利用人頜下腺上皮細(xì)胞株(Huamn salivary gland,HSG)與B淋巴細(xì)胞株進(jìn)行共培養(yǎng),采用transwell,免疫共沉淀和Western ...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞對照表(ABBREVIATION)
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 實驗材料
    2.1 實驗動物與實驗細(xì)胞
    2.2 藥物和試劑
    2.3 試劑配方
    2.4 儀器設(shè)備
3 實驗方法
    3.1 抗原誘導(dǎo)干燥綜合征小鼠(SS)模型的建立與分組
    3.2 動物實驗檢測指標(biāo)
        3.2.1 全身情況檢查
        3.2.2 脾、頜下腺及胸腺指數(shù)
        3.2.3 唾液量的檢測
        3.2.4 頜下腺組織H&E病理染色
        3.2.5 CCK8法檢測SS小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖
        3.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測SS小鼠外周血以及頜下腺中B淋巴細(xì)胞亞群比例
        3.2.7 免疫組化法檢測小鼠頜下腺組織CXCL13-CXCR5的表達(dá)
        3.2.8 Western blot法檢測頜下腺p-ERK、p-P38、GRK2的表達(dá)
    3.3 CP-25對HSG細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞株共培養(yǎng)后的細(xì)胞功能的影響
        3.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代及凍存
        3.3.2 細(xì)胞共培養(yǎng)
        3.3.3 Q-PCR檢測HSG細(xì)胞CXCL13的表達(dá)
        3.3.4 細(xì)胞增殖、遷移實驗
        3.3.5 Western blot法檢測B淋巴細(xì)胞CXCR5、p-ERK、p-P38、GRK2的表達(dá)
    3.4 統(tǒng)計分析
4 結(jié)果
    4.1 SS小鼠全身情況變化
    4.2 CP-25對SS小鼠體重的影響
    4.3 CP-25對SS小鼠唾液量的影響
    4.4 CP-25對SS小鼠器官指數(shù)的影響
    4.5 CP-25對SS小鼠頜下腺病理的影響
    4.6 CP-25對SS小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響
    4.7 CP-25對SS小鼠外周血和頜下腺B淋巴細(xì)胞亞群的影響
    4.8 各組小鼠頜下腺CD-19、CXCR5、CXCL13的表達(dá)情況
    4.9 CP-25對SS小鼠頜下腺p-ERK、p-P38、GRK2的表達(dá)情況
    4.10 CP-25對IFN-α處理后HSG增殖和CXCL13表達(dá)的影響
    4.11 HSG與B淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后,對 B淋巴細(xì)胞增殖、遷移功能的影響
    4.12 CP-25對B淋巴細(xì)胞CXCR5、p-ERK1/2、p-P38、GRK2表達(dá)的影響
5 討論
    5.1 成功構(gòu)建C57BL/6小鼠抗原誘導(dǎo)干燥綜合征模型
    5.2 CP-25對C57BL/6小鼠抗原誘導(dǎo)干燥綜合征模型的治療作用與其調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞亞群密切相關(guān)
    5.3 CXCL13-CXCR5-MAPK信號通路在B淋巴細(xì)胞增殖遷移中發(fā)揮重要作用
    5.4 CP-25通過調(diào)節(jié)GRK2的膜轉(zhuǎn)位,發(fā)揮治療作用
    5.5 本實驗的不足以及下一步計劃
6 結(jié)論
    6.1 CP-25對抗原誘導(dǎo)干燥綜合癥模型C57BL/6小鼠具有治療作用
    6.2 CP-25的治療作用可能與其調(diào)節(jié)B細(xì)胞亞群比例及增殖遷移有關(guān)
    6.3 CP-25可以調(diào)節(jié)共培養(yǎng)后的B淋巴細(xì)胞GRK2在胞膜的分布
7 參考文獻(xiàn)
8 附錄
9 致謝
綜述 B淋巴細(xì)胞亞群在干燥綜合征中的作用
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3811468