目的:通過(guò)觀察龜板膠、鹿角膠對(duì)體外培養(yǎng)豚鼠OA軟骨細(xì)胞的影響,對(duì)比分析Raf/MEK/ERK通路相關(guān)基因Raf-1、MEK、ERK的mRNA的表達(dá)量以及Raf-1、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表達(dá)的差異,證明龜鹿二仙膠中君藥龜板膠、鹿角膠通過(guò)增強(qiáng)該通路MEK/ERK磷酸化的表達(dá)水平,從而促進(jìn)OA軟骨細(xì)胞的增殖,進(jìn)一步剖析龜鹿二仙膠防治OA軟骨退變的作用機(jī)制。方法:1.將12周齡豚鼠膝關(guān)節(jié)OA軟骨細(xì)胞離體培養(yǎng),甲苯胺藍(lán)及Ⅱ型膠原染色鑒定后,傳代得到F2代。2.MTT比色法篩選龜板膠、鹿角膠對(duì)豚鼠OA軟骨細(xì)胞F2代的最適干預(yù)濃度及最適干預(yù)時(shí)間。3.將實(shí)驗(yàn)分為6組:龜板膠組(簡(jiǎn)記龜組)、鹿角膠組(簡(jiǎn)記鹿組)、空白組(簡(jiǎn)記空組)、龜板膠+PD98059組(簡(jiǎn)記龜抑組)、鹿角膠+PD98059組(簡(jiǎn)記鹿抑組)、空白+PD98059組(簡(jiǎn)記空抑組),龜板膠、鹿角膠均為兩者最適干預(yù)濃度,MEK抑制劑PD98059(簡(jiǎn)記抑)干預(yù)濃度為10uM。4.qPCR法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)Raf-1、MEK、ERK的mRNA含量的差異。5.Western Blot法測(cè)定實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)Raf-1、MEK...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英漢縮略詞對(duì)照表
引言
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)藥物
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 主要試劑的配制
        2.2 建立12周齡豚鼠離體軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系
        2.3 軟骨細(xì)胞的鑒定
        2.4 MTT法檢測(cè)含藥培養(yǎng)液的最適干預(yù)濃度及最適干預(yù)時(shí)間
        2.5 qPCR法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)Raf-1、MEK、ERK的mRNA含量差異
        2.6 Western Blot測(cè)定實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)Raf-1、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表達(dá)
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2.8 實(shí)驗(yàn)技術(shù)流程圖
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 鏡下豚鼠軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)情況
        3.2 豚鼠膝關(guān)節(jié)OA軟骨細(xì)胞的染色鑒定
        3.3 龜板膠、鹿角膠含藥培養(yǎng)基的最適促增殖濃度及時(shí)間
        3.4 實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)Raf-1、MEK、ERK的mRNA的表達(dá)量
        3.5 實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)Raf-1、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白的表達(dá)情況
    4 討論
        4.1 含藥培養(yǎng)液干預(yù)體外培養(yǎng)細(xì)胞的可行性
        4.2 選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)胞來(lái)源的依據(jù)
        4.3 MEK抑制劑PD98059的選擇
        4.4 篩選含藥培養(yǎng)基最適干預(yù)濃度及最適干預(yù)時(shí)間的必要性
        4.5 qPCR法檢測(cè)目的基因mRNA的表達(dá)
        4.6 Western Blot法檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)
        4.7 Raf/MEK/ERK信號(hào)通路與OA的關(guān)系
        4.8 試析龜鹿二仙膠防治OA的作用及配伍機(jī)理
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3765048