目的:探討駱駝蓬多糖（LTP）誘導細胞自噬及調節(jié)巨噬細胞免疫活性的研究。方法:1)用不同濃度的LTP多糖干預穩(wěn)定表達GFP-LC3融合蛋白的NRK細胞,篩選出LTP多糖誘導細胞自噬的最佳濃度和時間點;2)免疫印跡（Western blotting）法進一步檢測LTP多糖干預后細胞內自噬體標志性蛋白質LC3和p62表達水平的變化,電子顯微鏡觀察細胞內自噬體的數(shù)量,免疫熒光法觀察LTP多糖干預后細胞內自噬體與溶酶體的共定位情況;3)LTP多糖干預后,Western blotting法檢測自噬信號通路中關鍵分子p70s6k、AMPK表達水平的變化,并聯(lián)合運用自噬抑制劑、誘導劑,Western blotting法檢測LC3、p62表達水平的變化;4)以1μg/mL脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）干預體外培養(yǎng)的RAW264.7細胞,建立炎癥細胞模型,CCK-8法檢測細胞活性、Hoechst和PI雙重染色方法觀察細胞凋亡、ELISA檢測炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-a的含量,鑒定炎癥細胞模型;5)LTP多糖干預后,檢測細胞活性、凋亡及炎癥因子含量,聯(lián)合運用自噬抑制劑... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞對照表
摘要
Abstract
前言
研究內容與方法
    1.研究對象
    2.儀器與試劑
        2.1 主要儀器
        2.2 材料與試劑
    3.實驗方法
        3.1 NKR細胞的藥物干預及細胞自噬誘導模型的研究方法
            3.1.1 NRK細胞的培養(yǎng)
            3.1.2 藥物干預培養(yǎng)基的制備
            3.1.3 NRK細胞的藥物干預
            3.1.4 GFP-LC3 NRK細胞自噬體觀察及最適劑量的篩選
            3.1.5 免疫印跡法檢測NRK細胞內LC3,p62蛋白質的含量
            3.1.6 駱駝蓬多糖誘導自噬的通路分析
            3.1.7 電子顯微鏡下觀察NRK細胞內自噬體的形成
            3.1.8 免疫熒光法觀察NRK細胞內自噬溶酶體的形成
        3.2 駱駝蓬多糖對LPS刺激誘導小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7炎癥反應的調節(jié)作用
            3.2.1 RAW264.7細胞培養(yǎng)與保存
            3.2.2 CCK-8法檢測駱駝蓬多糖對LPS刺激的RAW264.7細胞增殖活性
            3.2.3 駱駝蓬多糖干預下LPS誘導RAW264.7細胞凋亡的分析方法
            3.2.4 駱駝蓬多糖對LPS誘導RAW264.7細胞IL-1β,TNF-α分泌量的影響
            3.2.5 免疫印跡檢測LC3,P62蛋白在RAW264.7細胞中的表達
        3.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法
結果
討論
小結
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻
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【參考文獻】：
期刊論文
[1]駱駝蓬多糖提取及對秀麗隱桿線蟲多聚谷氨酰胺聚集毒性的影響[J]. 全慶華,姬瑞芳,袁將,王加利,劉一冰,鄒媛,郭曉宇,張伽妹,劉永剛,高增平.  北京中醫(yī)藥大學學報. 2017(11)
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碩士論文
[1]駱駝蓬地上部分化學成分的研究[D]. 李越鯤.西北農林科技大學 2005



本文編號：3730931