目的:探討駱駝蓬多糖（LTP）誘導(dǎo)細(xì)胞自噬及調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞免疫活性的研究。方法:1)用不同濃度的LTP多糖干預(yù)穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3融合蛋白的NRK細(xì)胞,篩選出LTP多糖誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的最佳濃度和時(shí)間點(diǎn);2)免疫印跡（Western blotting）法進(jìn)一步檢測(cè)LTP多糖干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)自噬體標(biāo)志性蛋白質(zhì)LC3和p62表達(dá)水平的變化,電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬體的數(shù)量,免疫熒光法觀察LTP多糖干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)自噬體與溶酶體的共定位情況;3)LTP多糖干預(yù)后,Western blotting法檢測(cè)自噬信號(hào)通路中關(guān)鍵分子p70s6k、AMPK表達(dá)水平的變化,并聯(lián)合運(yùn)用自噬抑制劑、誘導(dǎo)劑,Western blotting法檢測(cè)LC3、p62表達(dá)水平的變化;4)以1μg/mL脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）干預(yù)體外培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞,建立炎癥細(xì)胞模型,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性、Hoechst和PI雙重染色方法觀察細(xì)胞凋亡、ELISA檢測(cè)炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-a的含量,鑒定炎癥細(xì)胞模型;5)LTP多糖干預(yù)后,檢測(cè)細(xì)胞活性、凋亡及炎癥因子含量,聯(lián)合運(yùn)用自噬抑制劑... 

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
Abstract
前言
研究?jī)?nèi)容與方法
    1.研究對(duì)象
    2.儀器與試劑
        2.1 主要儀器
        2.2 材料與試劑
    3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 NKR細(xì)胞的藥物干預(yù)及細(xì)胞自噬誘導(dǎo)模型的研究方法
            3.1.1 NRK細(xì)胞的培養(yǎng)
            3.1.2 藥物干預(yù)培養(yǎng)基的制備
            3.1.3 NRK細(xì)胞的藥物干預(yù)
            3.1.4 GFP-LC3 NRK細(xì)胞自噬體觀察及最適劑量的篩選
            3.1.5 免疫印跡法檢測(cè)NRK細(xì)胞內(nèi)LC3,p62蛋白質(zhì)的含量
            3.1.6 駱駝蓬多糖誘導(dǎo)自噬的通路分析
            3.1.7 電子顯微鏡下觀察NRK細(xì)胞內(nèi)自噬體的形成
            3.1.8 免疫熒光法觀察NRK細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體的形成
        3.2 駱駝蓬多糖對(duì)LPS刺激誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用
            3.2.1 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)與保存
            3.2.2 CCK-8法檢測(cè)駱駝蓬多糖對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞增殖活性
            3.2.3 駱駝蓬多糖干預(yù)下LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞凋亡的分析方法
            3.2.4 駱駝蓬多糖對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞IL-1β,TNF-α分泌量的影響
            3.2.5 免疫印跡檢測(cè)LC3,P62蛋白在RAW264.7細(xì)胞中的表達(dá)
        3.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
新疆醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評(píng)閱表?


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]駱駝蓬多糖提取及對(duì)秀麗隱桿線蟲多聚谷氨酰胺聚集毒性的影響[J]. 全慶華,姬瑞芳,袁將,王加利,劉一冰,鄒媛,郭曉宇,張伽妹,劉永剛,高增平.  北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(11)
[2]血根堿通過STAT3通路對(duì)LPS致RAW264.7細(xì)胞炎癥的保護(hù)作用[J]. 張夢(mèng)雅,王春麗,杜先華,黃松.  中藥新藥與臨床藥理. 2017(06)
[3]植物多糖構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 譚西,周欣,陳華國(guó).  中國(guó)中藥雜志. 2017(21)
[4]植物黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J]. 劉一杰,薛永常.  中國(guó)生物工程雜志. 2016(09)
[5]駱駝蓬粗多糖抗氧化性的研究[J]. 李雪,張鳴,常國(guó)華,陳映全.  中國(guó)食品添加劑. 2016(01)
[6]黃酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 趙雪巍,劉培玉,劉丹,孫珊珊,李貞,余可馨,張嫚麗,史清文.  中草藥. 2015(21)
[7]黃酮類化合物抗腫瘤活性及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 楊楠,賈曉斌,張振海,孫娥,嚴(yán)紅梅.  中國(guó)中藥雜志. 2015(03)
[8]植物多糖的免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 尚慶輝,解玉懷,張桂國(guó),姜淑貞,楊在賓,楊維仁,張崇玉.  動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2015(01)
[9]酒精誘導(dǎo)嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞自噬及其與P62作用的關(guān)系[J]. 董越娟,石貞玉,劉詩(shī)濛,張維娟,皇甫超申,鄧錦波,劉彬.  解剖學(xué)報(bào). 2013(06)
[10]駱駝蓬多糖提取工藝優(yōu)化及抗氧化活性的測(cè)定[J]. 張新國(guó),于國(guó)慶,彭軼楠,王鳴剛.  中醫(yī)藥學(xué)報(bào). 2013(05)

碩士論文
[1]駱駝蓬地上部分化學(xué)成分的研究[D]. 李越鯤.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3730931