乳腺癌是女性最常被診斷出的惡性腫瘤之一,也是癌癥死亡的重要原因。乳腺癌在所有女性癌癥病例中約占30%,在所有癌癥死亡比例中占14%。與許多國(guó)家一樣,乳腺癌已成為中國(guó)女性中最普遍的癌癥,中國(guó)新發(fā)乳腺癌和死亡病例占世界總數(shù)的12.2%和9.6%。目前,手術(shù)治療,放療和化療是乳腺癌的主要治療方法,但有著各種嚴(yán)重的副作用,包括嘔吐,惡心,脫發(fā),骨髓抑制和血栓等。因此,有必要為乳腺癌患者開(kāi)發(fā)具有較低副作用的新型抗癌藥。人參屬植物,作為傳統(tǒng)的藥用植物,已經(jīng)受到了廣大研究者的關(guān)注。人參皂苷是人參屬植物的主要有效成分,有著多種生物學(xué)功能,如免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗疲勞、抗腫瘤等功效。人參皂苷Rk1是人參經(jīng)過(guò)處理后生成的一種成分,具有抗胰島素抵抗,抗炎和抗癌活性。然而,關(guān)于人參皂苷Rk1的抗乳腺癌作用的報(bào)道卻很少。因此,本課題通過(guò)一系列的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)來(lái)探究人參皂苷Rk1對(duì)乳腺癌細(xì)胞的抗增殖作用及其分子機(jī)制。1.通過(guò)單因素和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)提高了二醇組人參總皂苷中人參皂苷20（S）-Rg3,Rk1和Rg5含量,響應(yīng)面優(yōu)化后最佳工藝條件為乙醇濃度91.16%,溶解時(shí)間42.31 min,沉淀3次,此時(shí)人參皂苷含量為86.... 

【文章頁(yè)數(shù)】：138 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 人參皂苷及其分類(lèi)
        1.1.2 人參皂苷的制備
        1.1.3 人參皂苷的分離純化
        1.1.4 人參皂苷的生物學(xué)活性
        1.1.5 乳腺癌研究現(xiàn)狀
        1.1.6 抗腫瘤機(jī)制研究
    1.2 研究方案與內(nèi)容
    1.3 研究目的和創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 二醇組人參總皂苷的分離純化
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 人參皂苷單體標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定
        2.3.2 單因素實(shí)驗(yàn)
        2.3.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 二醇組人參總皂苷的分離純化
        2.3.5 紫外光譜
        2.3.6 傅里葉紅外光譜
        2.3.7 人參皂苷Rk1 純度測(cè)定
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論
        2.4.1 人參皂苷單體標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.4.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        2.4.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        2.4.4 二醇組人參總皂苷的分離純化
        2.4.5 人參皂苷Rk1 紫外光譜分析
        2.4.6 人參皂苷Rk1 傅里葉紅外光譜分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 人參皂苷Rk1對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的抗增殖作用
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞株
        3.2.4 相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 CCK-8細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 LDH釋放測(cè)定
        3.3.4 乳腺癌細(xì)胞的克隆形成實(shí)驗(yàn)
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 人參皂苷Rk1 對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的抗增殖作用
        3.4.2 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞的抑制作用
        3.4.3 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞LDH釋放的影響
        3.4.4 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞克隆形成的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 人參皂苷Rk1體內(nèi)抗乳腺癌研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.5 相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑及藥物的配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞的前期準(zhǔn)備
        4.3.2 乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231 荷瘤裸鼠模型構(gòu)建
        4.3.3 乳腺癌荷瘤裸鼠分組及腹腔注射給藥
        4.3.4 相關(guān)指標(biāo)觀察及檢測(cè)
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 乳腺癌荷瘤裸鼠的一般情況觀察
        4.4.2 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌荷瘤裸鼠體重的影響
        4.4.3 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌荷瘤裸鼠的腫瘤體積的影響
        4.4.4 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌荷瘤裸鼠的瘤重的影響
        4.4.5 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌荷瘤裸鼠的腫瘤組織學(xué)的影響
        4.4.6 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌荷瘤裸鼠主要器官組織學(xué)的影響
        4.4.7 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌荷瘤裸鼠肝腎功能的影響
    4.5 本章小結(jié)
第五章 人參皂苷Rk1對(duì)乳腺癌細(xì)胞周期分布的影響
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        5.2.4 相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.3.2 細(xì)胞周期分布檢測(cè)
        5.3.3 蛋白質(zhì)免疫印跡
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞周期分布影響
        5.4.2 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的影響
    5.5 本章小結(jié)
第六章 人參皂苷Rk1對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        6.2.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        6.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 Hoechst33342 熒光染色
        6.3.2 Annexin V/PI雙染
        6.3.3 JC-10 線粒體膜電位檢測(cè)
        6.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)
        6.3.5 蛋白免疫印跡檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白
        6.3.6 免疫印跡檢測(cè)腫瘤組織中凋亡相關(guān)蛋白
        6.3.7 免疫組化檢測(cè)腫瘤中凋亡蛋白的表達(dá)
    6.4 結(jié)果與討論
        6.4.1 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞Hoechst33342 染色的影響
        6.4.2 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞Annexin V/PI雙染色的影響
        6.4.3 人參皂苷Rk1對(duì)MCF-7和MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞線粒體膜電位的影響
        6.4.4 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        6.4.5 乳腺癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白免疫印跡結(jié)果分析
        6.4.6 腫瘤組織凋亡相關(guān)蛋白檢測(cè)結(jié)果分析
        6.4.7 Z-VAD-FMK對(duì)人參皂苷Rk1 誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
    6.5 本章小結(jié)
第七章 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌細(xì)胞ROS/PI3K/Akt通路的影響
    7.1 引言
    7.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        7.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        7.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        7.2.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        7.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    7.3 實(shí)驗(yàn)方法
        7.3.1 ROS的檢測(cè)
        7.3.2 乳腺癌細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白免疫印跡檢測(cè)
        7.3.3 荷瘤裸鼠腫瘤組織PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白免疫印跡檢測(cè)
        7.3.4 荷瘤裸鼠腫瘤組織PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白免疫組化分析
    7.4 結(jié)果與討論
        7.4.1 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌細(xì)胞ROS的影響
        7.4.2 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的影響
        7.4.3 腫瘤組織PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白檢測(cè)結(jié)果分析
        7.4.4 LY294002 對(duì)人參皂苷Rk1 誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
        7.4.5 胰島素對(duì)人參皂苷Rk1 誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
        7.4.6 NAC對(duì)人參皂苷Rk1 誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
    7.5 本章小結(jié)
第八章 人參皂苷Rk1對(duì)乳腺癌細(xì)胞有氧糖酵解影響初探
    8.1 引言
    8.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        8.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        8.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
        8.2.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        8.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    8.3 實(shí)驗(yàn)方法
        8.3.1 乳腺癌細(xì)胞葡萄糖攝取的測(cè)定
        8.3.2 乳腺癌細(xì)胞乳酸產(chǎn)生的測(cè)定
        8.3.3 乳腺癌細(xì)胞ATP含量的測(cè)定
        8.3.4 乳腺癌細(xì)胞HK2 表達(dá)的測(cè)定
        8.3.5 乳腺癌細(xì)胞PKM2 表達(dá)的測(cè)定
        8.3.6 乳腺癌細(xì)胞LDHA表達(dá)的測(cè)定
        8.3.7 乳腺癌細(xì)胞蛋白免疫印跡
        8.3.8 腫瘤組織HK2、PKM2、LDHA蛋白免疫印跡分析
        8.3.9 腫瘤組織HK2、PKM2、LDHA蛋白免疫組化分析
    8.4 結(jié)果與討論
        8.4.1 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌細(xì)胞葡萄糖攝取、乳酸產(chǎn)生以及ATP含量的影響
        8.4.2 人參皂苷Rk1 對(duì)乳腺癌細(xì)胞HK2、PKM2、LDHA表達(dá)的影響
        8.4.3 人參皂苷Rk1 對(duì)腫瘤組織HK2、PKM2、LDHA表達(dá)的影響
    8.5 本章小結(jié)
總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間主要科研成果
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]堿降解人參莖葉三醇組皂苷工藝的研究及產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)修飾[D]. 程磊.吉林大學(xué) 2013
[2]高速逆流色譜提取人參皂苷的研究[D]. 曾鵬濤.長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué) 2012
[3]人參皂苷Rg3和Rh2的分離制備研究[D]. 孫峰.延邊大學(xué) 2009
[4]人參皂苷Rg3的抗疲勞作用研究[D]. 張艷.吉林大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3726388