目的利用超高效液相色譜（UPLC）對(duì)黃芩莖葉中的黃酮類、酚酸類成分進(jìn)行分析與評(píng)價(jià),基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接探討黃芩莖葉防治新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）的潛在作用機(jī)制。方法采用UPLC測(cè)定11個(gè)產(chǎn)地黃芩莖葉樣品中9種黃酮類、3種酚酸類成分的含量,并利用SPSS 19.0對(duì)不同產(chǎn)地樣品進(jìn)行主成分分析。利用TCMSP數(shù)據(jù)庫獲取上述12種化學(xué)成分的作用靶點(diǎn),使用GeneCards及NCBI數(shù)據(jù)庫獲取COVID-19靶點(diǎn),導(dǎo)入Cytoscape 3.7.0軟件建立藥物-化學(xué)成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò),導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫獲取靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò),導(dǎo)入Bioconductor進(jìn)行GO功能注釋和KEGG通路富集分析。利用AutoDock Vina將化合物與新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）S蛋白受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶II（ACE2）蛋白酶結(jié)構(gòu)域復(fù)合物（SARS-CoV-2-S-RBD-ACE2）進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果不同產(chǎn)地黃芩莖葉中均含有豐富的黃酮類、酚酸類成分,但含量差異較大,野黃芩苷為黃芩莖葉中含量最高的成分,相同產(chǎn)地黃芩莖葉化學(xué)成分相似度較高,不同產(chǎn)地黃芩莖葉化學(xué)成分相似度較低,表明不... 

【文章來源】：藥物評(píng)價(jià)研究. 2020,43(06)

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

黃芩莖葉治療COVID-19靶點(diǎn)韋恩圖

在RCSB數(shù)據(jù)庫中下載ACE2蛋白酶結(jié)構(gòu)域與新型冠狀病毒S蛋白受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的復(fù)合物PDB文件（SARS-CoV-2-S-RBD-ACE2,PDB ID:6lzg）導(dǎo)入PyMOL，刪除水分子，添加氫。在Pubchem數(shù)據(jù)庫中下載藥物-化學(xué)成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)中化學(xué)成分及4種臨床用于治療COVID-19藥物結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入Chem3D轉(zhuǎn)化成PDB格式。將以上化合物導(dǎo)入AutoDock Tools 1.5.6程序，添加原子電荷，分配原子類型，所有柔性鍵均默認(rèn)可旋轉(zhuǎn)，保存為pdbqt格式，作為對(duì)接配體。運(yùn)行AutoDock Vina進(jìn)行分子對(duì)接。選取打分最高（affinity數(shù)值最低）的構(gòu)象作為對(duì)接構(gòu)象，利用PyMOL程序?qū)?duì)接構(gòu)象進(jìn)行可視化分析。每種活性成分對(duì)接結(jié)果幾種結(jié)合構(gòu)象中，選取結(jié)合能較低且構(gòu)象較好的結(jié)果作為分子對(duì)接結(jié)果，結(jié)合能越小說明受體配體之間親和力越大，結(jié)果見表8和圖8。由表8可知，藥物-化學(xué)成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)中化學(xué)成分的結(jié)合能均小于-5 kJ/mol，即與SARS-CoV-2-S-RBD-ACE2均有較好的結(jié)合活性。圖7 KEGG通路富集分析結(jié)果

黃芩是我國常用清熱藥，在COVID-19的中醫(yī)藥防治中發(fā)揮了重要作用。多年生植物黃芩在我國的栽培面積巨大，每年均會(huì)產(chǎn)生生物量數(shù)倍于根的黃芩地上部分，因此造成了嚴(yán)重的資源浪費(fèi)與生態(tài)等問題。黃芩茶由黃芩的嫩莖及葉制成，是我國民間的別樣茶之一，保健效果明顯，在我國部分地區(qū)十分流行[2]。研究表明，黃芩的莖和葉資源性化學(xué)成分類型與根類似且含量豐富，藥理作用明顯，具有巨大的開發(fā)潛力，以黃芩莖葉為原料的黃芩莖葉解毒膠囊在中醫(yī)臨床上已被廣泛用于治療上呼吸道感染等相關(guān)疾病[3-4]。目前關(guān)于黃芩莖葉化學(xué)成分的研究多集中在少數(shù)幾種黃酮類成分上，鮮有黃芩莖葉中具有明顯生物活性的酚酸類成分的定性定量研究。故本研究在前期基礎(chǔ)上系統(tǒng)考察黃芩莖葉的提取條件（水提、不同比例醇提、不同超聲時(shí)間、不同回流時(shí)間）、流動(dòng)相系統(tǒng)（乙腈-甲酸水、乙腈-磷酸水、甲醇-甲酸水、甲醇-磷酸水）、不同梯度洗脫程序等最終建立不同產(chǎn)地黃芩莖葉中的9種黃酮類、3種酚酸類成分的UPLC快速分析方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地黃芩莖葉中均含有豐富的黃酮類、酚酸類資源化學(xué)成分，但含量差異較大，野黃芩苷為黃芩莖葉中含量最高的成分；相同產(chǎn)地黃芩莖葉化學(xué)成分相似度較高，不同產(chǎn)地黃芩莖葉化學(xué)成分相似度較低，提示產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境諸多生態(tài)因子能顯著影響黃芩莖和葉中資源性化學(xué)成分形成和積累從而造成品質(zhì)的差異。本研究建立的UPLC方法可對(duì)簡(jiǎn)單快速、全面可靠的對(duì)不同產(chǎn)地黃芩莖葉進(jìn)行評(píng)價(jià)，可為黃芩莖葉質(zhì)量控制、資源綜合利用提供思路，亦為黃芩植物其他器官或同屬藥材成分定性定量提供有益參考。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]黃芩-金銀花藥對(duì)治療新型冠狀病毒肺炎潛在作用機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究[J]. 劉嘉,嚴(yán)寶飛,曾明月,曾慶琪,楊海軍,張景正.  世界中醫(yī)藥. 2020(04)
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碩士論文
[1]黃芩莖葉資源化學(xué)與新資源藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[D]. 嚴(yán)寶飛.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2018



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