目的探討miRNA-199a-5p對血管內(nèi)皮細胞發(fā)生功能損傷的影響以及黃芪多糖的干預(yù)作用,為進一步闡明心血管疾病相關(guān)血管內(nèi)皮損傷的病理生理機制提供科學(xué)依據(jù),為中醫(yī)藥防治內(nèi)皮損傷相關(guān)心血管疾病提供新的治療策略和治療靶點。方法瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建miRNA-199a-5p差異表達的血管內(nèi)皮損傷細胞模型并用黃芪多糖進行相關(guān)干預(yù);ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清中內(nèi)皮功能指標內(nèi)皮素-1（ET-1）、血管性假性血友病因子（vWF）、血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）含量,硝酸還原酶法檢測一氧化氮（NO）濃度;RT-PCR檢測各組細胞GRP78、ATF6和CHOP基因的表達;Western Blot檢測各組細胞GRP78、ATF6和CHOP蛋白的表達。結(jié)果內(nèi)皮功能指標檢測結(jié)果表明,miRNA-199a-5p inhibitor組NO分泌減少,ET、vWF、TM分泌增多,與正常對照組、黃芪多糖組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ATF6通路GRP78、ATF6、CHOP基因表達量在miRNA-199a-5p inhibitor組上調(diào),與正常對照組、黃芪多糖組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激3條經(jīng)典通路圖

圖 2 miRanda 靶標軟件預(yù)測示意圖黃芪，為補藥之長，是益氣活血代表方補陽還五湯的君藥，臨床上對心血管疾病血瘀證有較好的療效。作為黃芪的主要有效成分，黃芪多糖（APS）近年來的藥理研究被發(fā)現(xiàn)其有心血管獲益，可降血糖，調(diào)節(jié)血脂、血壓，防治動脈粥樣硬化，并對血管內(nèi)皮細胞有較好的保護作用[25-27]。黃芪多糖可顯著抑制內(nèi)皮損傷時與血瘀形成密切相關(guān)的粘附分子 P-選擇素、血管細胞粘附分子-1（VCAM-1）等因子的表達，提示其具有活血作用，可改善心血管病血瘀狀態(tài)[28]；本課題組研究也證實，黃芪多糖增強高血壓血瘀證模型細胞活性,促進血瘀異常細胞形態(tài)修復(fù)，可維持細胞正常形態(tài)結(jié)構(gòu)[29]。可見，黃芪多糖對血管內(nèi)皮損傷有良好的修復(fù)作用，然而其具體作用機制尚未得到公認。近年來，關(guān)于黃芪多糖緩解機體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)方面有不少報道表明 APS 可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志基因 GRP78、CHOP、IRE1 等的表達，在抑制心肌細胞損傷、凋亡，減輕糖尿病大鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，增加胰島素敏感性等方面發(fā)揮重[30-31]

圖 3：a 各組 NO 分泌量；b 各組 ET-1 分泌量；c 各組 TM 分泌量；d 各組 vWF 分泌量注:*,P<0.05;**,P<0.01(與正常組比較).#,P<0.05;##,P<0.01(與 Inhibitor 組比較).果分析：內(nèi)皮功能指標檢測結(jié)果顯示，miRNA-199a-5p mimic 組與 inhibitor 較，mimic 組 NO 分泌量明顯增高(P<0.01)，ET、TM、vWF 分泌量顯著下降(P<0.01而與正常組以及 mimic 對照組相比，miRNA-199a-5p mimic 組各內(nèi)皮功能因子量未出見顯著差異(P>0.05)。與正常組比較，miRNA-199a-5p inhibitor 組 NO 量減少(P<0.01)，ET、TM、vWF 產(chǎn)生增加(P<0.01)；而 miRNA-199a-5p inhibit照組與正常組相比，各內(nèi)皮因子分泌量未見顯著差異(P>0.05)，與正常組相近芪多糖組與 miRNA-199a-5p inhibitor 組比較，NO 分泌量顯著提升(P<0.05)，EM、vWF 分泌量降低(P<0.01)。實驗結(jié)論miRNA-199a-5p mimic組與正常組相比，內(nèi)皮因子未見顯著差異，提示該miRN

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本文編號：3520783