目的:以脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激的RAW264.7細胞,以自噬誘導劑雷帕霉素（rapamycin, Rap）促進自噬為主要模型,研究丹皮酚（paeonol,P）對RAW264.7自噬與免疫功能的影響。方法:使用LPS 1μg·ml^-1刺激RAW264.7細胞6 h,丹皮酚200μmol/L處理12 h,Rap 100 ng·ml^-1作用6 h,蛋白免疫印跡法（western blot,WB）檢測自噬相關(guān)因子LC3B、Beclin、P62和炎癥相關(guān)因子TNF-α、IL-1β的表達水平,激光共聚焦熒光共定位法（immunofluorescence,IF）檢測LC3B、P62蛋白的熒光表達和定位;酶聯(lián)免疫分析（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）檢測RAW264.7細胞TNF-α的分泌。結(jié)果:在脂多糖誘導RAW264.7炎癥反應(yīng)的細胞模型中,添加丹皮酚藥物后LC3B、Beclin表達增多,P62表達減少,LC3B-l向LC3B-ll的轉(zhuǎn)換效率增強;雷帕霉素抑制IL-1β... 

【文章來源】：中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志. 2020,26(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

LPS刺激RAW264.7細胞中自噬相關(guān)蛋白LC3B、Beclin、P62的表達

圖2示,在正常對照組中, Cy3 標記的 LC3B(紅色)主要定位于細胞核與細胞質(zhì)中,與 DAPI 標記的細胞核重疊,FITC標記的P62(綠色)主要定位在細胞質(zhì)中。經(jīng)藥物刺激后,其定位并沒有改變。3.3 丹皮酚對LPS刺激RAW264.7細胞炎癥相關(guān)因子TNF-α和IL-1β表達的影響

與Rap組比較,R+P組表達量差異無統(tǒng)計學意義,提示在非炎癥的環(huán)境中,雷帕霉素與丹皮酚對細胞沒有影響。圖4 LPS 刺激 RAW264.7 細胞中 TNF-α 的分泌(Elisa)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3488070