目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ（ICS Ⅱ）對氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖（OGD/R）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的作用及其作用機(jī)制。方法:通過OGD 2 h/R 24 h誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷在體外模擬體內(nèi)腦缺血再灌注損傷,N-乙酰半胱氨酸（NAC）作為陽性對照藥。將PC12細(xì)胞按藥效學(xué)分組隨機(jī)分為7組:空白組,空白+ICS Ⅱ 50μM組,OGD/R組,OGD/R+ICS Ⅱ 12.5μM組,OGD/R+ICS Ⅱ 25μM組,OGD/R+ICS Ⅱ 50μM組,OGD/R+NAC100μM組。采用MTT法檢測細(xì)胞活力,酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）漏出率及細(xì)胞活性氧（ROS）含量,Mito-SOX Red熒光染色檢測PC12細(xì)胞線粒體內(nèi)ROS,羅丹明123檢測PC12細(xì)胞線粒體膜電位（MMP）,一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒檢測PC12細(xì)胞凋亡情況。通過Western blot法檢測Nrf2、Keap1、HO-1、NQO-1、SIRT3、IDH2、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)及active-Caspase-3水平的變化。結(jié)果:OGD/R組較空白組細(xì)胞活力明顯降低（P&... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ICSII對OGD2h/R24h誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷的影響

were treated with ICS II (12.5, 25, and 50 μM) and NAC (100 μM) for 24 h after OGD 2 h. (A) Cell viability; (B)LDH release (C) The morphological changes. **P<0.01 vs control group;#P<0.05 vs OGD/R group;##P<0.01 vsOGD/R group; ( x ± SD, n=6).2.2 ICS II 減輕 OGD/R 誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)和線粒體內(nèi) ROS 的產(chǎn)生并降低 MMP為了探究 OGD/R 能否導(dǎo)致 PC12 細(xì)胞內(nèi)過量 ROS 蓄積以及線粒體損傷，本研究采用大鼠來源ROS ELISA試劑盒檢測PC12細(xì)胞內(nèi)ROS含量，Mito-SOX RedMito-tracker green 熒光雙染檢測線粒體內(nèi) ROS 以及羅丹明 123 檢測 MMP。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，OGD/R 組較空白組與空白+ICS II 50 μM 組，ROS 水平顯著升高，給予 ICSII（12.5, 25, 50 μM）作用 24 h，ROS 水平明顯降低，且 OGD/R 組與 OGD/R+ICSII 50 μM 組相比較具有顯著差異（P＜0.01）（圖 2A）。同時，OGD/R 較空白組與空白+ICS II 50 μM 組，線粒體內(nèi) ROS 水平顯著升高，說明 OGD/R 能誘導(dǎo)線粒體 ROS 的過量產(chǎn)生（圖 2B），給予 ICS II 后降低 OGD/R 誘導(dǎo)的線粒體 ROS增加并呈濃度依賴性。此外，OGD/R 組較空白組和空白+ICS II 50 μM 組，MMP顯著降低，而 ICS II 或 NAC 同樣呈濃度依賴性提高線粒體 MMP（圖 2C）。

0.05 vs OGD/R 組 ；##P＜0.01 vs OGD/R 組；（ x ± SD, n=3）。Fig.2. Effects of ICS II on OGD 2 h/R 24 h-induced intracellular ROS production, mitochondrial ROS production and MMP in PC12 cells. The cells were treated with ICS II (12.5, 25, and 50 μM)and NAC (100 μM) for 24 h after OGD 2 h. (A) Intracellular ROS production level; (B) Mitochondrial ROS production; (C) MMP. **P＜0.01 vs control group;#P＜0.05 vs OGD/R group;##P＜0.01 vs OGD/R group; ( x ± SD,n=3).2.3 ICS II 對 OGD/R 誘導(dǎo)的 PC12 細(xì)胞 SIRT3 以及 IDH2 表達(dá)的影響為了確定 SIRT3 信號通路是否在 OGD/R 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，本研究采用 Western blot 法檢測 SIRT3 及其下游基因的蛋白表達(dá)。 結(jié)果表明OGD/R 組較空白組和空白+ICS II 50 μM 組，SIRT3 蛋白水平顯著降低，而 ICS II作用后可明顯提高 SIRT3 的表達(dá)（P＜0.01）（圖 3A，B）。此外，OGD/R 組較空白組和空白+ICS II 50 μM 組，IDH2 表達(dá)明顯降低（P＜0.01）。而給予 ICS II后，IDH2 的水平顯著提高（P＜0.01）（圖 3C，D），此結(jié)果說明 SIRT3/IDH2信號通路參與了 ICS II 對 OGD 2 h/R 24 h 誘導(dǎo)的 PC12 細(xì)胞損傷的改善作用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3302229