目的首先明確Pae給藥是否可以影響高血脂大鼠血脂水平,抑制炎性反應(yīng);進(jìn)一步檢測Pae-exo對RAECs的炎性反應(yīng)的影響;最后探討Pae-exo對RAECs是否通過調(diào)控mi R-223介導(dǎo)的NLRP3信號通路產(chǎn)生影響。方法采用高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射維生素D₂復(fù)制高脂血癥SD大鼠模型,采用酶法檢測大鼠血清TC、TG含量,HE染色觀察大鼠肝細(xì)胞脂質(zhì)積累情況,超速離心法提取exo,透射電鏡觀察exo,Zeta view檢測exo粒徑,Western blot檢測CD63、CD9、TSG101、Calnexin蛋白表達(dá),HPLC檢測exo中Pae含量。接著將大鼠血漿exo作用于原代RAECs細(xì)胞,免疫組化法檢測第Ⅷ因子表達(dá),免疫熒光顯微鏡觀察RAECs對exo的攝取,CCK-8法檢測RAECs活性,Elisa法檢測IL-1β、IL-6水平,q PCR檢測mi R-223表達(dá),Western blot檢測NLRP3、ASC、Caspase-1、ICAM-1蛋白表達(dá)。結(jié)果1丹皮酚抑制高血脂大鼠血脂含量及炎性介質(zhì)水平實(shí)驗(yàn)采用高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合維生素D₂腹腔... 

【文章來源】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

高脂大鼠模型鑒定（x±s，n=8）

圖 2 Pae 抑制高血脂大鼠血脂含量及炎癥介質(zhì)的表達(dá)（ x ±s，n=A.Pae 抑制高血脂大鼠血脂含量；B.Pae 抑制高血脂大鼠血清炎癥介質(zhì)的表達(dá)Fig 2 Pae inhibits blood lipid levels and expression of inflammatory mediators （A.Pae inhibits blood lipid levels in hyperlipidemic rats;B.Pae inhibits the expinflammatory mediators in hyperlipidemic rats.（**P﹤0.01,*P﹤0.05 vs. C grou0.05 vs. M group）3.3 外泌體提取鑒定為了探究高血脂大鼠血漿 exo 對 RAECs 的作用，筆者采用超速離心方法提取各干預(yù)條件下的大鼠血漿外泌體，大鼠取血后經(jīng)過離漿，采用超速離心法離心后過濾得到的外泌體進(jìn)行檢測。TEM 觀察小，如圖 3A 所示，對照組、模型組、Pae（150mg/Kg）組的外泌體，直徑

表達(dá) CD63、CD9、TSG101 蛋白，而陰性對照 Calnexin 則完全不在達(dá)，提示超速離心法分離到為大鼠血漿來源的外泌體。納米粒子跟蹤分析儀（Zeta view）分別檢測 C-exo，M-exo、50mg/Kg），如表 1 顯示，整體顆粒峰值在 115 nm 左右，粒子平均值在，中位值在 120nm 左右，且跨度都 40~50nm 之間。以 130 nm 區(qū)分 e胞外囊泡，計算 exo 濃度，各組 exo 百分比均在 68%左右。模型組和，外泌體顆粒數(shù)增多（P<0.01）， Pae 組和模型組相比，外泌體顆粒（P<0.01），說明高血脂能夠促進(jìn)大鼠血漿外泌體分泌，而 Pae 灌胃高血脂引起的外泌體分泌，降低血漿外泌體含量。圖 3C 為各組外泌圖，報告顯示 MODE 曲線流暢，樣本中雜質(zhì)較少，C-exo，M-exo、50mg/Kg）粒徑峰值分別為 115 nm、125 nm、105nm，與外泌體粒徑理圖 3D 為單幀的粒子運(yùn)動圖，各組粒子在檢測液體中做無規(guī)則運(yùn)動。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3259135