目的:探討穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide,Andro）誘導(dǎo)軟骨肉瘤（Chondrosarcoma,CHS）細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。方法:1.采用cell20counting20kit-8（CCK-8）法、結(jié)晶紫染色法、流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡法（Western20Blotting,WB）等相關(guān)技術(shù)檢測穿心蓮內(nèi)酯對軟骨肉瘤細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期、凋亡及相關(guān)蛋白的影響。2.采用免疫組織化學(xué)法（Immunohistochemical,IHC）檢測SOX9蛋白在不同病理分級軟骨肉瘤組織中的表達(dá);WB法檢測穿心蓮內(nèi)酯對SOX9蛋白表達(dá)的影響。3.利用RNA干擾技術(shù)在軟骨肉瘤細(xì)胞中分別敲低SOX9、β-catenin、TCF-1后,檢測軟骨肉瘤細(xì)胞增殖情況和下游相關(guān)基因的表達(dá)。4.利用免疫熒光法、蛋白核質(zhì)分離法、WB法檢測穿心蓮內(nèi)酯對β-catenin和TCF-1蛋白細(xì)胞亞定位的影響。5.利用MG132和環(huán)己酰亞胺（Cycloheximide,CHX）處理軟骨肉瘤細(xì)胞,探索穿心蓮內(nèi)酯對TCF-1和SOX9蛋白穩(wěn)定性或者內(nèi)源性蛋白合成的影響。6.采用si20RNA干擾技術(shù)、RT-PCR和WB法探索... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)研究
    1.1 軟骨肉瘤發(fā)病的分子機(jī)制
    1.2 軟骨肉瘤的病理分類及臨床表現(xiàn)
        1.2.1 軟骨肉瘤的病理分類
        1.2.2 軟骨肉瘤的臨床表現(xiàn)
    1.3 軟骨肉瘤的診斷
        1.3.1 軟骨肉瘤的影像學(xué)診斷
        1.3.2 軟骨肉瘤的病理組織學(xué)診斷
    1.4 軟骨肉瘤的治療現(xiàn)狀
        1.4.1 軟骨肉瘤的手術(shù)治療
        1.4.2 軟骨肉瘤的放射治療
        1.4.3 軟骨肉瘤的化學(xué)療法
        1.4.4 軟骨肉瘤的分子靶向治療
        1.4.5 軟骨肉瘤的中藥有效活性成分治療
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要溶液及試劑的配置
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 免疫組織化學(xué)法(Immunohistochemical,IHC)
        2.2.2 細(xì)胞免疫熒光染色法
        2.2.3 蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting,WB)實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 細(xì)胞核質(zhì)蛋白分離法
        2.2.5 細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)(CCK-8)
        2.2.6 流式細(xì)胞學(xué)相關(guān)檢測
        2.2.7 結(jié)晶紫染色
        2.2.8 RNA干擾敲低實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 總RNA的收集與提取
        2.2.10 實(shí)時(shí)定量熒光PCR(RT-PCR)實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 穿心蓮內(nèi)酯抑制軟骨肉瘤細(xì)胞生長并誘導(dǎo)細(xì)胞周期G2/M期阻滯
        3.1.1 穿心蓮內(nèi)酯減弱軟骨肉瘤細(xì)胞的活力
        3.1.2 穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)軟骨肉瘤細(xì)胞G2/M期阻滯
    3.2 穿心蓮內(nèi)酯通過Caspase-3依賴的信號通路促進(jìn)軟骨肉瘤細(xì)胞凋亡
        3.2.1 穿心蓮內(nèi)酯促進(jìn)軟骨肉瘤細(xì)胞凋亡
        3.2.2 穿心蓮內(nèi)酯激活caspase-3信號通路
    3.3 SOX9在軟骨肉瘤中高表達(dá),而且被穿心蓮內(nèi)酯調(diào)控
        3.3.1 SOX9在軟骨肉瘤中高表達(dá),敲低SOX9抑制軟骨肉瘤細(xì)胞的生長
        3.3.2 穿心蓮內(nèi)酯下調(diào)SOX9的表達(dá)
    3.4 穿心蓮內(nèi)酯下調(diào)軟骨肉瘤細(xì)胞TCF-1(非β-catenin)的表達(dá)
        3.4.1 敲低β-catenin抑制軟骨肉瘤細(xì)胞的生長
        3.4.2 穿心蓮內(nèi)酯不影響β-catenin的表達(dá)及細(xì)胞核轉(zhuǎn)位
        3.4.3 穿心蓮內(nèi)酯調(diào)控TCF-1蛋白的表達(dá)
    3.5 穿心蓮內(nèi)酯通過靶向調(diào)控TCF-1/SOX9信號軸抑制軟骨肉瘤細(xì)胞的生長
        3.5.1 SOX9負(fù)反饋調(diào)節(jié)β-catenin和TCF-1的表達(dá)
        3.5.2 穿心蓮內(nèi)酯通過TCF-1調(diào)控SOX9的表達(dá)
第四章 討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間發(fā)表論文情況
致謝
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Berberine20displays20antitumor20activity20in20esophageal20cancer20cells20in20vitro[J]. Shu-Xian Jiang,Bo Qi,Wen-Jian Yao,Cheng-Wei Gu,Xiu-Feng Wei,Yi Zhao,Yu-Zhen Liu,Bao-Sheng Zhao.  World Journal of Gastroenterology. 2017(14)
[2]穿心蓮內(nèi)酯及其衍生物的藥理活性最新研究進(jìn)展[J]. 李雪,吳東風(fēng),趙詩云,張娣.  實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床. 2017(02)
[3]穿心蓮的藥理作用及研究進(jìn)展[J]. 何恩其,趙烽.  中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2007(05)



本文編號：3177823