目的:通過研究T淋巴細胞的腫瘤抑制作用,闡明中藥方劑鱉龍軟肝湯的主要成分苦杏仁苷在HBV相關(guān)性HCC以及HCC進展期間細胞免疫應答中的作用機制。方法:分別提取HBV相關(guān)HCC患者及健康對照者外周血中的T淋巴細胞,確定苦杏仁苷的最佳使用濃度;MTT檢測健康人群外周血T細胞（NC-T）、HBV相關(guān)HCC患者外周血的T細胞（HBV-T）、苦杏仁苷處理的HBV-T細胞活性;ELISA檢測各組細胞培養(yǎng)基中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10的含量;流式細胞術(shù)檢測各組細胞中CD4⁺和CD8⁺T細胞亞群占CD3⁺T細胞的比值,以及CD4⁺和CD8⁺T細胞亞群內(nèi)STAT3的磷酸化水平;QPCR和western blot檢測各組細胞中STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2的表達;構(gòu)建NC-T、HBV-T、苦杏仁苷干預的HBV-T細胞與HBV相關(guān)性肝癌HepG2.2.15直接共培養(yǎng)模型,ELISA檢測培養(yǎng)基中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10的含量;構(gòu)建NC-T、HB... 

【文章來源】：湖南中醫(yī)藥大學湖南省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

于 37℃、5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。隔天換液，培養(yǎng) 3 天。在 400×的倍鏡下觀察，細胞呈圓形。圖2-1 培養(yǎng)第3天正常人T淋巴細胞（×400倍）2.4.2 苦杏仁苷處理 T 細胞的最佳濃度選取

圖2-2.苦杏仁苷處理培養(yǎng)的T細胞的最佳濃度篩選。對不同來源 T 細胞的細胞活力影響杏仁苷是否對T細胞有活力和免疫功能的增強。我并使用10 mg/ml的苦杏仁苷處理HBV-T細胞0-72點檢測細胞OD值。結(jié)果如圖2-3和表2-5所示，處C患者外周血的T淋巴細胞OD值為1.11±0.09，低于在苦杏仁苷處理下，HBV-T細胞的OD值部分恢著差異；48 h時，HBV-T細胞活力（OD = 1.29 ± = 1.69 ± 0.05），而HBV-T細胞在苦杏仁苷處理下.04)，與NC-T組無顯著差異；72 h時，HBV-T細胞低于NC-T細胞（OD = 1.86 ± 0.03），而HBV-T細

【參考文獻】：
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本文編號：3123061