目的:采用細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)選擇性抑制小鼠樹突狀細(xì)胞上的TLR2、TLR4受體蛋白表達(dá),探索青藤堿對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的抗炎機(jī)制,明確青藤堿對小鼠DC2.4調(diào)控作用的關(guān)鍵靶點(diǎn),為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究提供新思路以及新藥的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.針對小鼠樹突狀細(xì)胞上TLR2、TLR4受體蛋白,分別設(shè)計(jì)與合成重組質(zhì)粒,應(yīng)用細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)選擇性抑制TLR2、TLR4受體蛋白表達(dá)。Western blot法分別測定TLR2、TLR4蛋白表達(dá)情況,篩選出針對TLR2、TLR4蛋白最佳沉默組質(zhì)粒。2.按單一和聯(lián)合沉默TLR2、TLR4原則,將DC2.4細(xì)胞分為空白組、沉默TLR2空白組、沉默TLR4空白組、共沉默TLR2+4空白組、模型組、沉默TLR2模型組、沉默TLR4模型組、共沉默TLR2+4模型組、青藤堿組、沉默TLR2青藤堿組、沉默TLR4青藤堿組、共沉默TLR2+4青藤堿組、甲氨蝶呤組。除空白組、沉默TLR2空白組、沉默TLR4空白組、共沉默TLR2+4空白組外,其余各組分別加入1μg/ml的R848溶液培養(yǎng)24h,誘導(dǎo)小鼠DC2.4成熟產(chǎn)生免疫反應(yīng),青藤堿組、沉默TLR2青藤堿組、沉... 

【文章來源】：成都中醫(yī)藥大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

干擾載體pLKD-CMV-G&PR-U6-shRNA示意圖

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018 屆碩士研究生學(xué)位論文載體鑒定-CMV-G&PR-U6-shRNA 大小為 8509bp，條帶，大小介于 8-10kb 之間，約 8500bp限制性內(nèi)切酶 Age I 酶和 EcoR I U6-shRNA 的 U6 啟動(dòng)子下游的 ccdB 毒性，其大小分別介于 8-10kb 與 250-500bp片段和 300bp 的 ccdB 毒性基因片段，與預(yù)der Marker 條帶，對應(yīng)圖 4 右的：10 kb、82kb、1.5kb、1kb、750 bp、500 bp、250

重組質(zhì)粒部分基因序列檢測圖譜

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3025273