研究目的:槲寄生植物提取物1,7-二（4-羥基苯基）-1E,4E-庚二烯-3-酮（EB30）抑制肺癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究。研究方法:本實(shí)驗(yàn)以肺癌細(xì)胞株A549和NCI-H292為研究對象,采用CCK-8法和RTCA法檢測EB30對肺癌細(xì)胞增殖活性的影響;PI染色后利用流式細(xì)胞儀分析檢測EB30對肺癌細(xì)胞周期的影響;DAPI染色法協(xié)同Annexin V/PI雙染法分析EB30作用后肺癌細(xì)胞凋亡情況;采用了DCFH-DA染色法,流式細(xì)胞儀檢測EB30處理細(xì)胞內(nèi)ROS的含量變化;采用JC-1染料進(jìn)行染色,流式細(xì)胞學(xué)觀察分析EB30處理后肺癌細(xì)胞MMP的變化;Western blot實(shí)驗(yàn)檢測EB30對于凋亡相關(guān)蛋白以及PI3K/Akt、ERK1/2信號通路蛋白的表達(dá)。結(jié)果:EB30在一定濃度范圍內(nèi)能夠明顯抑制肺癌細(xì)胞增殖,而對正常肺組織細(xì)胞不產(chǎn)生明顯毒性,進(jìn)一步研究表明EB30不僅能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯、促進(jìn)胞內(nèi)活性氧（ROS）的大量產(chǎn)生,而且能夠激活細(xì)胞內(nèi)、外凋亡途徑從而誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡。此外,EB30能夠上調(diào)p-ERKl/2和p-P90RSK蛋白表達(dá),下調(diào)Akt和P70RSK... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 A549細(xì)胞株、NCI-H292細(xì)胞株以及HBE細(xì)胞株
    2.2 EB30化合物的獲取
    2.3 實(shí)驗(yàn)過程使用的主要試劑
    2.4 實(shí)驗(yàn)相關(guān)溶液配制
    2.5 實(shí)驗(yàn)過程使用的主要儀器
3 研究內(nèi)容及方法
    3.1 A549、NCI-H292及HBE細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存
        3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.2.2 細(xì)胞傳代
        3.2.3 細(xì)胞凍存
    3.3 細(xì)胞活性檢測
        3.3.1 CCK-8法
        3.3.2 RTCA法檢測細(xì)胞活力
    3.4 細(xì)胞凋亡檢測
        3.4.1 DAPI染色法
        3.4.2 Annexin V FITC/PI雙染法
    3.5 細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）測定
    3.6 細(xì)胞周期檢測
    3.7 線粒體膜電位（MMP）檢測
    3.8 免疫熒光染色
    3.9 Western blot
        3.9.1 蛋白提取
        3.9.2 線粒體的分離及蛋白提取
        3.9.3 SDS-PAGE電泳
    3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
4 EB30促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡研究內(nèi)容及結(jié)果
    4.1 EB30對肺癌A549、NCI-H292細(xì)胞增殖活性的影響
    4.2 EB30誘導(dǎo)肺癌A549、NCI-H292細(xì)胞凋亡
        4.2.1 DAPI染色法觀察EB30引起肺癌A549、NCI-H292細(xì)胞的凋亡
        4.2.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測肺癌A549、NCI-H292細(xì)胞的凋亡
    4.3 EB30對A549、NCI-H292細(xì)胞周期的影響
    4.4 EB30誘導(dǎo)肺癌A549、NCI-H292細(xì)胞內(nèi)ROS過量產(chǎn)生
    4.5 EB30降低肺癌A549、NCI-H292細(xì)胞線粒體膜電位（MMP）、促進(jìn)細(xì)胞色素c釋放以及AIF入核
    4.6 EB30引起凋亡相關(guān)蛋白的改變
    4.7 EB30通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt和ERK1/2通調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞凋亡
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文評閱及答辯情況表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3020901