目的:骨肉瘤是最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤。盡管骨肉瘤患者目前的生存率能達(dá)到70%左右,但是在過去數(shù)十年中骨肉瘤的治療缺乏突破性的進(jìn)展。而且骨肉瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),極大影響了患者預(yù)后。因此尋找骨肉瘤新的治療方法是臨床上一項(xiàng)緊迫的任務(wù)。和厚樸酚是一個從木蘭科植物中提取的聯(lián)苯類化合物,已被發(fā)現(xiàn)具有治療腦缺血、焦慮癥、疼痛的作用,而且具有抗微生物、抗炎和抗腫瘤的特性。鑒于和厚樸酚的抗腫瘤作用,因此本研究旨在探索和厚樸酚對骨肉瘤的治療作用。方法:在本研究中,我們通過細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測和厚樸酚對人骨肉瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。通過細(xì)胞周期流式和周期相關(guān)蛋白檢測研究和厚樸酚對細(xì)胞周期的影響。通過細(xì)胞凋亡流式、線粒體膜電位檢測和凋亡相關(guān)蛋白的檢測研究和厚樸酚對細(xì)胞凋亡的影響。使用AO染色、MDC染色、電鏡觀察和自噬相關(guān)蛋白檢測探索和厚樸酚對細(xì)胞自噬的影響。我們使用Z-VAD-FMK和3-MA分別抑制凋亡和自噬,觀察二者的交互作用。之后檢測了和厚樸酚處理細(xì)胞后ROS和ERK1/2的表達(dá)水平。再使用ROS清除劑和ERK1/2通路抑制劑PD98059并檢測和厚樸酚誘導(dǎo)的凋亡和自噬是否改變。最后對裸鼠異體種... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２．１和厚樸酚抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖??

種抑制作用是否通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯實(shí)現(xiàn)的，我們檢驗(yàn)了經(jīng)過和厚樸酚處理的??Ｈ０Ｓ和Ｕ２０Ｓ細(xì)胞的細(xì)胞周期分布。通過流式細(xì)胞儀的檢測，我們發(fā)現(xiàn)和厚樸酚??導(dǎo)致了骨肉瘤細(xì)胞的Ｇ０／Ｇ１期阻滯，并伴有Ｇ２／Ｍ期和Ｓ期的比例下降（圖２．３）。??為了進(jìn)一步探究和厚樸酚引起細(xì)胞周期阻滯的分子機(jī)制，我們檢測了細(xì)胞周期相??關(guān)蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ＣｙｃｌｉｎＥ、ＣＤＫ４和ＣｙｃｌｉｎＤｌ的表達(dá)下調(diào)并且呈濃度依賴趨??勢（圖２．４）。由于這些蛋白在Ｇ１期向Ｓ期轉(zhuǎn)變中發(fā)揮重要作用，驗(yàn)證了流式細(xì)胞??１７??

?ｊ＂??Ｊ?，ｖｖｖ??ＨＮＫ２０ｐＭ?ＨＮＫ?３０?［ｉＭ?°?Ｊｒ??圖２．２和厚樸酚抑制ＨＯＳ和Ｕ２０Ｓ細(xì)胞克隆形成??２．３．２和厚樸酚誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯??在上一小部分中我們發(fā)現(xiàn)和厚樸酚能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖，為了探究這??種抑制作用是否通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯實(shí)現(xiàn)的，我們檢驗(yàn)了經(jīng)過和厚樸酚處理的??Ｈ０Ｓ和Ｕ２０Ｓ細(xì)胞的細(xì)胞周期分布。通過流式細(xì)胞儀的檢測，我們發(fā)現(xiàn)和厚樸酚??導(dǎo)致了骨肉瘤細(xì)胞的Ｇ０／Ｇ１期阻滯，并伴有Ｇ２／Ｍ期和Ｓ期的比例下降（圖２．３）。??為了進(jìn)一步探究和厚樸酚引起細(xì)胞周期阻滯的分子機(jī)制，我們檢測了細(xì)胞周期相??關(guān)蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ＣｙｃｌｉｎＥ、ＣＤＫ４和ＣｙｃｌｉｎＤｌ的表達(dá)下調(diào)并且呈濃度依賴趨??勢（圖２．４）。由于這些蛋白在Ｇ１期向Ｓ期轉(zhuǎn)變中發(fā)揮重要作用，驗(yàn)證了流式細(xì)胞??１７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2972833