發(fā)布時(shí)間：2020-12-29 12:21

　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察益氣活血通絡(luò)方含藥血清通過(guò)調(diào)控NGF與其受體的結(jié)合對(duì)背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi)JNK信號(hào)通路的影響,探討本方保護(hù)糖尿病周圍神經(jīng)病變的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:選取新生48h的SD大鼠,提取乳鼠的背根神經(jīng)節(jié)進(jìn)行原代背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（DRGn）培養(yǎng),并采用免疫熒光技術(shù)鑒定原代培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,將生長(zhǎng)狀況良好的原代背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組、高糖模型組、益氣活血通絡(luò)方高、中、低劑量組（其含藥血清濃度分別為10%、5%和2.5%）及西藥對(duì)照組共6組。除正常對(duì)照組外,其余組別均用100mmol/L高糖濃度造模,高糖環(huán)境下建立損傷模型。24h后除高糖模型組外,其余各組分別加入10%、5%和2.5%含藥血清及西藥對(duì)照血清繼續(xù)培養(yǎng)24h。采用ELISA法檢測(cè)DRG細(xì)胞上清中神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá);采用Western bolt法檢測(cè)各組細(xì)胞中Trk A、P75NTR、JNK、P-JNK、Bax和Bcl-2等蛋白的表達(dá);采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞中P53和Bax等基因的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.NSE免疫熒光染色法鑒定結(jié)果顯示,FITC標(biāo)記的NSE作為一抗在DRGn的胞漿中表達(dá),染色發(fā)出綠色熒光,... 

【文章來(lái)源】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

初貼壁的原代背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（x200）

圖 2 原代培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)（x400）Fig2 The shape of primary cultured dorsal root ganglia cells3.2 原代培養(yǎng)的 DRGn 鑒定結(jié)果實(shí)驗(yàn)采用 NSE 免疫熒光染色法鑒定原代培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，并用 Hochest染核，鏡下觀察可見如圖 3 所示，F(xiàn)ITC 標(biāo)記的 NSE 作為一抗在 DRGn 的胞漿中表達(dá)，染色發(fā)出綠色熒光（圖 3A）；Hochest 染核陽(yáng)性，發(fā)出藍(lán)色熒光（圖 3B），兩圖融合后（圖 3C），可計(jì)算出 DRGn 的純度大于 95%。

圖 2 原代培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)（x400）Fig2 The shape of primary cultured dorsal root ganglia cells的 DRGn 鑒定結(jié)果NSE 免疫熒光染色法鑒定原代培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，可見如圖 3 所示，F(xiàn)ITC 標(biāo)記的 NSE 作為一抗在 DRGn色熒光（圖 3A）；Hochest 染核陽(yáng)性，發(fā)出藍(lán)色熒光 3C），可計(jì)算出 DRGn 的純度大于 95%。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Nerve growth factor protects against palmitic acid-induced injury in retinal ganglion cells[J]. Pan-shi Yan,Shu Tang,Hai-feng Zhang,Yuan-yuan Guo,Zhi-wen Zeng,Qiang Wen.  Neural Regeneration Research. 2016(11)
[2]中西醫(yī)結(jié)合治療氣虛血瘀型糖尿病周圍神經(jīng)病變療效觀察[J]. 陳杰,張科.  四川中醫(yī). 2016(10)
[3]益氣活血通絡(luò)方對(duì)高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響[J]. 王芹,申國(guó)明,王浩,何瑩,尤良震,葉樹,王柳,姚永傳.  安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(05)
[4]益氣活血通絡(luò)方對(duì)糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 江愛娟,王浩,李道衛(wèi),王芹,何瑩.  中華中醫(yī)藥雜志. 2016(08)
[5]糖尿病周圍神經(jīng)病變中醫(yī)臨床及實(shí)驗(yàn)研究近況[J]. 呂樹泉,張淑芳,蘇秀海,宋慧麗,劉愛茹.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2016(13)
[6]糖尿病周圍神經(jīng)病變從絡(luò)論治及其通絡(luò)八法[J]. 陳俊,肖萬(wàn)澤,趙映前.  時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2016(04)
[7]活血通絡(luò)湯配合舒血寧治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變療效[J]. 劉叢群.  糖尿病新世界. 2016(07)
[8]淺談自擬益氣活血通絡(luò)方治療糖尿病周圍神經(jīng)病變[J]. 龔騰芬,陳霞波.  中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥. 2016(07)
[9]益氣活血通絡(luò)法治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的臨床研究[J]. 蘭博雅,王秀閣,米佳,王國(guó)強(qiáng).  中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育. 2016(06)
[10]中醫(yī)辨證論治糖尿病周圍神經(jīng)病變研究概況[J]. 程征.  河南中醫(yī). 2016(03)

博士論文
[1]通絡(luò)糖泰方對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響及機(jī)制研究[D]. 段金娜.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[2]槲皮素、水蛭素、桂皮醛及其復(fù)方對(duì)高糖致大鼠DRGn細(xì)胞凋亡的影響[D]. 石玥.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013
[3]炎性因子對(duì)人樹突狀細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體的調(diào)控作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[D]. 蔣應(yīng)明.第二軍醫(yī)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]益氣活血通絡(luò)法治療糖尿病周圍神經(jīng)病變臨床研究[D]. 程若東.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[2]益氣活血法綜合治療2型糖尿病周圍神經(jīng)病變的臨床研究[D]. 趙艷.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[3]通絡(luò)糖泰方對(duì)自發(fā)性2型糖尿病GK大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變JNK表達(dá)水平的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 胡蕓.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[4]益氣活血通絡(luò)方對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變患者促炎因子干預(yù)的影響的研究[D]. 劉偉花.河北醫(yī)科大學(xué) 2015
[5]益氣活血通絡(luò)法對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變中醫(yī)證候和神經(jīng)電生理的影響[D]. 趙海彬.河北醫(yī)科大學(xué) 2015
[6]2型糖尿病周圍神經(jīng)病變證候研究[D]. 伍云洲.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[7]早期腦出血后細(xì)胞凋亡與p75NTR、TrkA的相關(guān)性研究[D]. 鐘湘平.南華大學(xué) 2014
[8]益氣活血通絡(luò)湯治療糖尿病周圍神經(jīng)病變氣虛血瘀證臨床療效觀察[D]. 韓佳妮.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2012
[9]糖尿病周圍神經(jīng)病變的中醫(yī)研究進(jìn)展[D]. 鄧林.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2011
[10]益氣養(yǎng)陰通絡(luò)法治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的臨床研究[D]. 楊依霖.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2011



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