何首烏道地藥材醇提物差異成分鑒定、活性評價及生物合成途徑的研究
發(fā)布時間：2020-12-22 07:01
基于已完成的全國13個地區(qū)何首烏質量評價,本研究采用代謝組學技術,建立道地產區(qū)廣東德慶及非道地產區(qū)重慶何首烏醇提物的指紋圖譜,篩選并鑒定其差異成分。探究其對細胞凋亡和周期、免疫吞噬、炎癥反應及慢性毒性的影響,檢測其對人和小鼠肝微粒體細胞色素P450酶的體外酶活作用。通過轉錄組數(shù)據(jù)篩選出差異成分生物合成相關酶基因,根據(jù)其表達量與差異成分的含量進行相關性分析并推測其生物合成途徑,再采用生物催化法驗證合成途徑的關鍵步驟,為何首烏種質資源評價提供新的研究思路和實驗基礎。實驗結果如下:（1）指紋圖譜分析并鑒定出何首烏的化學成分包括芪類、蒽醌類等50個化合物。代謝組學結果表明德慶何首烏的芪類化合物含量顯著高于重慶何首烏,蒽醌類則相反;并篩選出2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（THSG）、虎杖苷、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素等差異成分。其中,德慶何首烏THSG的相對含量為重慶產的40倍。（2）重慶何首烏醇提物對HepG2和L02細胞增殖抑制率高于德慶,THSG等芪類成分對上述2種肝細胞均無細胞毒性,僅大黃素均具有明顯濃度依賴性抑制作用。其誘導L02細胞發(fā)生凋亡,...
【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省
【文章頁數(shù)】：136 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
圖.蔑類化合物生物合成的初期步驟
蒽醌類分為大黃素型和茜草型，其中大黃素型蒽醌結構中的羥基分布在母核苯環(huán)??代謝兩側，包括大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等，主要分布于蓼科、豆科等植物??中。其生物合成主要通過聚酮途徑見圖４［９９１?，分為３個階段：（１）以乙酰ＣｏＡ??為起始單元，在ＣＨＳ家族的作用下，與８個丙二酸單酰ＣｏＡ連續(xù)發(fā)生縮合，形??成聚八酮化合物；（２）聚八酮化合物通過還原、脫羧及氧化等途徑，形成蘆薈??大黃素、大黃酚與大黃酸等化合物；（３）聚八酮化合物通過水解、脫羧、脫水??與甲基化等途徑，生成大黃素與大黃素甲醚等化合物。在聚酮途徑中，催化乙酰??ＣｏＡ與丙二酸單酰ＣｏＡ縮合的反應是由植物ＣＨＳ系催化完成的１ＩＣＫ）］。這是植物??ＩＩＩ型聚酮合成酶（ＰＫＳ）的一個家族酶系，包括ＣＨＳ、ＳＴＳ、吡喃酮合成酶??（２－ｐｙｒｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，２－ＰＳ）、苯甲酮合成酶（Ｂｅｎｚａｌａｃｅｔｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＢＡＳ）、Ｂ丫卩定酮??合成酶（Ａｃｒｉｄｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＣＳ）和蘆薈松合成酶（Ａｌｏｅｓｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＬＳ）等。目??前，國內外在蓼科、茜草科植物蒽醌合成途徑相關酶及基因方面的研宄，尚有大??量酶基因未被克隆及功能研宄。隨著生物芯片、代謝組和蛋白質組學等生物技術??的發(fā)展
?前言???根據(jù)前期對兩廣、江西等４�。ㄊ校保车睾问诪醯馁|量評價，特別是ＴＨＳＧ??含量的比較分析［９７，１（）１］，發(fā)現(xiàn)道地產地廣東德慶何首烏ＴＨＳＧ含量最高，而非道??地產區(qū)的重慶何首烏ＴＨＳＧ含量很低。道地藥材是指產在特定地域，與其他地??區(qū)所產同種中藥材相比，品質和療效更好，且質量穩(wěn)定的中藥材。其影響因素包??括物種品質、自然環(huán)境、中醫(yī)臨床長期應用優(yōu)選等。藥材主要成分的含量差異是??其產生不同療效或毒性的物質基礎。中醫(yī)古籍記載和相關研宄表明，何首烏是一??種常用的補益藥材，具有降脂保肝等功效［６，１１＞５５］，而近年來關于服用何首烏制劑??引起不良反應，甚至造成肝損傷等報道，其致肝毒性的原因可能與其藥材質量相??關。??８－．??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]何首烏水提物及其主要成分對人肝細胞L02中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1 mRNA表達的影響[J]. 王子建,李浩,李登科,陳靜,吳雙,周明,全正揚,孫震曉. 中草藥. 2017(23)
[2]人源HepaRG肝細胞毒性與遺傳毒性高通量篩選方法的初步建立[J]. 文海若,毛志慧,耿興超,李波,王雪,黃芝瑛. 藥物評價研究. 2017(11)
[3]大黃素通過激活線粒體caspase-8通路誘導L02細胞凋亡[J]. 劉德明,周春燕,吳嘉思,王平,孟憲麗. 中藥藥理與臨床. 2017(05)
[4]何首烏肝毒性研究進展[J]. 唐志芳,馬國,梅全喜. 時珍國醫(yī)國藥. 2017(07)
[5]何首烏臨床研究進展與安全應用思考[J]. 吳成勝,孫蓉. 中國中藥雜志. 2017(02)
[6]肝臟藥物代謝酶CYP450與中藥肝毒性的關系[J]. 侯健,孫娥,宋捷,楊蕾,張振海,寧青,賈曉斌. 中國中藥雜志. 2016(15)
[7]何首烏有效成分二苯乙烯苷的藥理活性研究進展[J]. 陳冰冰,姜愛玲,張巖. 中國臨床藥理學與治療學. 2016(06)
[8]何首烏炮制后化學成分及藥理作用的研究進展[J]. 王亭,龔千鋒. 中國實驗方劑學雜志. 2017(02)
[9]何首烏肝毒性物質基礎探索研究[J]. 楊敏,劉婷,馮偉紅,回連強,李嬈嬈,劉曉謙,陳安家,李春,王智民. 中國中藥雜志. 2016(07)
[10]3D HepG2細胞藥物肝毒性評價模型的建立及其在藥物安全性評價中的應用[J]. 李丹丹,湯響林,譚洪玲,梁乾德,王宇光,馬增春,肖成榮,高月. 中國中藥雜志. 2016(07)
博士論文
[1]何首烏致肝損傷成分及作用機制研究[D]. 林龍飛.北京中醫(yī)藥大學 2016
[2]何首烏中二苯乙烯苷生物合成相關基因的篩選與分析[D]. 趙煒.華南理工大學 2014
[3]何首烏懸浮細胞系的建立和穩(wěn)定同位素示蹤研究二苯乙烯苷合成路徑[D]. 邵利.華南理工大學 2012
[4]擬南芥植物代謝組學及金銀花代謝產物抗炎活性研究[D]. 趙洪芝.南開大學 2012
[5]何首烏有效成分二苯乙烯苷的降血脂作用與藥物代謝動力學研究[D]. 王春英.河北醫(yī)科大學 2008
碩士論文
[1]何首烏的化學成分研究[D]. 袁煒.北京中醫(yī)藥大學 2017
[2]何首烏對肝臟毒性的作用[D]. 胡雯婧.湖北科技學院 2017
[3]何首烏水提物及EG大鼠肝微粒體代謝成分分析及肝細胞毒研究[D]. 吳雙.北京中醫(yī)藥大學 2017
[4]基于植物代謝組學技術的何首烏質量評價研究[D]. 張彩云.廣東藥科大學 2016
[5]基于精密肝切片技術的何首烏致肝毒性物質基礎研究[D]. 楊敏.山西醫(yī)科大學 2016
[6]基于指紋圖譜和人肝細胞系的何首烏肝毒性影響因素研究[D]. 李雨萌.云南中醫(yī)學院 2016
[7]Cocktail探針藥物法評價（制）何首烏及其主要成分對CYP450酶活性的影響[D]. 歐陽玲玲.廣州中醫(yī)藥大學 2015
[8]基于肝細胞毒價檢測的何首烏質量控制方法研究[D]. 呂旸.北京化工大學 2013
[9]芪合酶基因Fm-STS在何首烏毛狀根中過量表達與dsRNA干擾[D]. 朱寬鵬.華南理工大學 2012
[10]（制）何首烏對大鼠肝臟損傷機制的研究[D]. 陳慶堂.廣州中醫(yī)藥大學 2012
本文編號：2931348
【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省
【文章頁數(shù)】：136 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
圖.蔑類化合物生物合成的初期步驟
蒽醌類分為大黃素型和茜草型，其中大黃素型蒽醌結構中的羥基分布在母核苯環(huán)??代謝兩側，包括大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等，主要分布于蓼科、豆科等植物??中。其生物合成主要通過聚酮途徑見圖４［９９１?，分為３個階段：（１）以乙酰ＣｏＡ??為起始單元，在ＣＨＳ家族的作用下，與８個丙二酸單酰ＣｏＡ連續(xù)發(fā)生縮合，形??成聚八酮化合物；（２）聚八酮化合物通過還原、脫羧及氧化等途徑，形成蘆薈??大黃素、大黃酚與大黃酸等化合物；（３）聚八酮化合物通過水解、脫羧、脫水??與甲基化等途徑，生成大黃素與大黃素甲醚等化合物。在聚酮途徑中，催化乙酰??ＣｏＡ與丙二酸單酰ＣｏＡ縮合的反應是由植物ＣＨＳ系催化完成的１ＩＣＫ）］。這是植物??ＩＩＩ型聚酮合成酶（ＰＫＳ）的一個家族酶系，包括ＣＨＳ、ＳＴＳ、吡喃酮合成酶??（２－ｐｙｒｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，２－ＰＳ）、苯甲酮合成酶（Ｂｅｎｚａｌａｃｅｔｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＢＡＳ）、Ｂ丫卩定酮??合成酶（Ａｃｒｉｄｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＣＳ）和蘆薈松合成酶（Ａｌｏｅｓｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＬＳ）等。目??前，國內外在蓼科、茜草科植物蒽醌合成途徑相關酶及基因方面的研宄，尚有大??量酶基因未被克隆及功能研宄。隨著生物芯片、代謝組和蛋白質組學等生物技術??的發(fā)展
?前言???根據(jù)前期對兩廣、江西等４�。ㄊ校保车睾问诪醯馁|量評價，特別是ＴＨＳＧ??含量的比較分析［９７，１（）１］，發(fā)現(xiàn)道地產地廣東德慶何首烏ＴＨＳＧ含量最高，而非道??地產區(qū)的重慶何首烏ＴＨＳＧ含量很低。道地藥材是指產在特定地域，與其他地??區(qū)所產同種中藥材相比，品質和療效更好，且質量穩(wěn)定的中藥材。其影響因素包??括物種品質、自然環(huán)境、中醫(yī)臨床長期應用優(yōu)選等。藥材主要成分的含量差異是??其產生不同療效或毒性的物質基礎。中醫(yī)古籍記載和相關研宄表明，何首烏是一??種常用的補益藥材，具有降脂保肝等功效［６，１１＞５５］，而近年來關于服用何首烏制劑??引起不良反應，甚至造成肝損傷等報道，其致肝毒性的原因可能與其藥材質量相??關。??８－．??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]何首烏水提物及其主要成分對人肝細胞L02中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1 mRNA表達的影響[J]. 王子建,李浩,李登科,陳靜,吳雙,周明,全正揚,孫震曉. 中草藥. 2017(23)
[2]人源HepaRG肝細胞毒性與遺傳毒性高通量篩選方法的初步建立[J]. 文海若,毛志慧,耿興超,李波,王雪,黃芝瑛. 藥物評價研究. 2017(11)
[3]大黃素通過激活線粒體caspase-8通路誘導L02細胞凋亡[J]. 劉德明,周春燕,吳嘉思,王平,孟憲麗. 中藥藥理與臨床. 2017(05)
[4]何首烏肝毒性研究進展[J]. 唐志芳,馬國,梅全喜. 時珍國醫(yī)國藥. 2017(07)
[5]何首烏臨床研究進展與安全應用思考[J]. 吳成勝,孫蓉. 中國中藥雜志. 2017(02)
[6]肝臟藥物代謝酶CYP450與中藥肝毒性的關系[J]. 侯健,孫娥,宋捷,楊蕾,張振海,寧青,賈曉斌. 中國中藥雜志. 2016(15)
[7]何首烏有效成分二苯乙烯苷的藥理活性研究進展[J]. 陳冰冰,姜愛玲,張巖. 中國臨床藥理學與治療學. 2016(06)
[8]何首烏炮制后化學成分及藥理作用的研究進展[J]. 王亭,龔千鋒. 中國實驗方劑學雜志. 2017(02)
[9]何首烏肝毒性物質基礎探索研究[J]. 楊敏,劉婷,馮偉紅,回連強,李嬈嬈,劉曉謙,陳安家,李春,王智民. 中國中藥雜志. 2016(07)
[10]3D HepG2細胞藥物肝毒性評價模型的建立及其在藥物安全性評價中的應用[J]. 李丹丹,湯響林,譚洪玲,梁乾德,王宇光,馬增春,肖成榮,高月. 中國中藥雜志. 2016(07)
博士論文
[1]何首烏致肝損傷成分及作用機制研究[D]. 林龍飛.北京中醫(yī)藥大學 2016
[2]何首烏中二苯乙烯苷生物合成相關基因的篩選與分析[D]. 趙煒.華南理工大學 2014
[3]何首烏懸浮細胞系的建立和穩(wěn)定同位素示蹤研究二苯乙烯苷合成路徑[D]. 邵利.華南理工大學 2012
[4]擬南芥植物代謝組學及金銀花代謝產物抗炎活性研究[D]. 趙洪芝.南開大學 2012
[5]何首烏有效成分二苯乙烯苷的降血脂作用與藥物代謝動力學研究[D]. 王春英.河北醫(yī)科大學 2008
碩士論文
[1]何首烏的化學成分研究[D]. 袁煒.北京中醫(yī)藥大學 2017
[2]何首烏對肝臟毒性的作用[D]. 胡雯婧.湖北科技學院 2017
[3]何首烏水提物及EG大鼠肝微粒體代謝成分分析及肝細胞毒研究[D]. 吳雙.北京中醫(yī)藥大學 2017
[4]基于植物代謝組學技術的何首烏質量評價研究[D]. 張彩云.廣東藥科大學 2016
[5]基于精密肝切片技術的何首烏致肝毒性物質基礎研究[D]. 楊敏.山西醫(yī)科大學 2016
[6]基于指紋圖譜和人肝細胞系的何首烏肝毒性影響因素研究[D]. 李雨萌.云南中醫(yī)學院 2016
[7]Cocktail探針藥物法評價（制）何首烏及其主要成分對CYP450酶活性的影響[D]. 歐陽玲玲.廣州中醫(yī)藥大學 2015
[8]基于肝細胞毒價檢測的何首烏質量控制方法研究[D]. 呂旸.北京化工大學 2013
[9]芪合酶基因Fm-STS在何首烏毛狀根中過量表達與dsRNA干擾[D]. 朱寬鵬.華南理工大學 2012
[10]（制）何首烏對大鼠肝臟損傷機制的研究[D]. 陳慶堂.廣州中醫(yī)藥大學 2012
本文編號：2931348
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