研究目的:本次主要以骨松強(qiáng)骨方對于腎陽虛血瘀型原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的療效為基礎(chǔ),結(jié)合干細(xì)胞實驗的研究成果,探索骨松強(qiáng)骨方對骨質(zhì)疏松癥治療的作用機(jī)理。為臨床新藥的開發(fā)提供依據(jù)。研究方法:（1）采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離出BMSCs。（2）制骨松強(qiáng)骨方含藥血清和生理鹽水對照血清,檢測骨松強(qiáng)骨方含藥血清對BMSCs增殖、成骨分化的影響（3）通過Real-Time PCR,檢測骨松強(qiáng)骨方含藥血清對BMSCs Runx-2、OPG細(xì)胞因子表達(dá)情況。研究結(jié)果:（1）采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法,可以獲得大量的具有較高活性的BMSCs（2）細(xì)胞增殖能力檢測結(jié)果顯示:骨松強(qiáng)骨方含藥血清各組與生理鹽水組相比,骨松強(qiáng)骨方含藥血清可明顯促進(jìn)BMSCs增殖（P<0.05）。（3）進(jìn)行成骨誘導(dǎo)后,骨松強(qiáng)骨方中、高劑量組對BMSCs成骨誘導(dǎo)的促進(jìn)作用優(yōu)于生理鹽水組（P均<0.05）。高劑量組對SD大鼠BMSCs成骨分化的促進(jìn)作用最好。骨松強(qiáng)骨方中、高劑量組的Runx-2、OP細(xì)胞因子的表達(dá)明顯高于生理鹽水組（P均<0.05）。結(jié)論:（1）骨松強(qiáng)骨方含藥血清具有促進(jìn)BMSCs的增殖和向成骨方向分化的作用。（2）... 

【文章來源】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮寫詞表
文獻(xiàn)研究
    1.1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對骨質(zhì)疏松癥的認(rèn)識
        1.1.1 骨質(zhì)疏松癥的危害
        1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的診斷
        1.1.3 骨質(zhì)疏松癥的治療
    1.2 傳統(tǒng)中醫(yī)對骨質(zhì)疏松癥認(rèn)識
    1.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療骨質(zhì)疏松癥的理論依據(jù)
        1.3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與骨質(zhì)疏松癥關(guān)系
        1.3.2 中醫(yī)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞進(jìn)展
    1.4 骨松強(qiáng)骨方
實驗一 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)與鑒定
    2.1. 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 試劑配制
        2.1.3 儀器設(shè)備與耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞鑒定
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 BMSCs細(xì)胞形態(tài)
        2.3.2 BMSCs細(xì)胞成骨分化
        2.3.3 BMSCs細(xì)胞成脂分化
    2.4 小結(jié)
實驗二 含藥血清對BMSCs增殖與成骨分化的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要實驗藥物和試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2.實驗方法
        3.2.1 骨松強(qiáng)骨方煎劑的制備
        3.2.2 含藥血清的制備
        3.2.3 骨松強(qiáng)骨方含藥血清對BMSCs增殖能力的影響
        3.2.4 骨松強(qiáng)骨方含藥血清對BMSCs成骨分化的影響
        3.2.5 細(xì)胞內(nèi)ALP活性測定
        3.2.6 堿性磷酸酶組織染色
        3.2.7 鈣化結(jié)節(jié)染色（茜素紅染色）
        3.2.8 實時定量PCR
        3.2.9 數(shù)據(jù)處理
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 BMSCs生長曲線
        3.3.2 BMSCs成骨誘導(dǎo)后形態(tài)特征
        3.3.3 細(xì)胞內(nèi)ALP活性測定結(jié)果
        3.3.4 茜素紅染色結(jié)果
        3.3.5 Runx-2 和OPG擴(kuò)增情況
    3.4 小結(jié)
討論
    4.1“益腎活血法”治療骨質(zhì)疏松癥
        4.1.1“益腎活血法”理論基礎(chǔ)
        4.1.2“益腎活血法”治療
    4.2 中藥血清藥理學(xué)研究方法
        4.2.0 血清藥理學(xué)的概念
        4.2.1 實驗動物的選擇
        4.2.2 給藥劑量和方法
        4.2.3 服藥和采血的時間
        4.2.4 實驗中其他問題
    4.3 BMSCs體外分離、培養(yǎng)和鑒定
        4.3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外細(xì)胞系的建立
        4.3.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定
        4.3.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨方向分化
    4.4 中藥的研究
        4.4.1 中藥對BMSCs的成骨分化的影響
        4.4.2 中藥對BMSCs細(xì)胞Runx2表達(dá)的影響
        4.4.3 中藥對BMSCs細(xì)胞OPG表達(dá)的影響
實驗結(jié)論
參考文獻(xiàn)
實驗附圖
綜述 傳統(tǒng)中藥對原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥治療現(xiàn)代化的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨松強(qiáng)骨方治療腎陽虛血瘀型原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥療效觀察[J]. 朱靜棟,孔西建,吳丹,李盈盈,葉進(jìn),毛春煥,王咪娜,王璘琳.  現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2017(04)
[2]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對繼發(fā)性骨質(zhì)疏松大鼠骨缺損愈合的影響[J]. 高翔,陳廣謀,黃成碩,劉志軍,曾榮,楚佳奇,李鵬.  海南醫(yī)學(xué). 2016(20)
[3]2型糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥患者血清胰島素樣生長因子-1的檢測及意義[J]. 康燕蓉,顧佩莉.  海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2016(18)
[4]淫羊藿總黃酮對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程BMP-2/RunX2/OSX通路的影響[J]. 梁廣勝,陳偉才,殷嫦嫦,殷明,曹雪琴.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2016(05)
[5]中藥血清藥理學(xué)研究進(jìn)展[J]. 陳健媚,郭姣.  廣東藥學(xué)院學(xué)報. 2016(03)
[6]補(bǔ)腎活血方對骨質(zhì)疏松癥模型大鼠骨密度及BMP-2蛋白表達(dá)影響實驗研究[J]. 姜坤,周強(qiáng),尚德陽,孫鑫,邢克欣,林庶茹,鄧洋洋.  遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2016(05)
[7]巴戟天水提取物對間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中OPG/RANKL表達(dá)的影響[J]. 吳國志,歐積壯,吳昌新.  海南醫(yī)學(xué). 2016(03)
[8]Micro-CT評價Runx2基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植促進(jìn)缺血性股骨頭壞死兔壞死股骨頭修復(fù)效果[J]. 許海甲,李章華,侯煜東,方衛(wèi)軍,唐歡.  生物技術(shù)通訊. 2015(06)
[9]骨質(zhì)疏松癥的中醫(yī)治療研究進(jìn)展[J]. 楊志鵬,魏成建,龔雙全.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2015(11)
[10]鎖陽多糖對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的改善作用[J]. 史平,朱薇,李曉鳴.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2015(23)

博士論文
[1]鹿角盤提取物的體外抗骨質(zhì)疏松作用[D]. 吳菲菲.大連理工大學(xué) 2013

碩士論文
[1]骨松強(qiáng)骨顆粒制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[D]. 牛瓊瓊.河南中醫(yī)學(xué)院 2014
[2]補(bǔ)腎中藥有效成分對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響[D]. 陳誼敬.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 2013
[3]鹿角冒對大鼠骨質(zhì)疏松癥治療作用的研究[D]. 陸燕.大連理工大學(xué) 2010



本文編號：2929944