目的:通過層析法從眼鏡蛇毒中分離高純度高生物活性的細(xì)胞毒素-1（CTX-1）和細(xì)胞毒素-2（CTX-2）,以人肝正常細(xì)胞（HL7702）為對照探索CTX-1和CTX-2對人肝星狀細(xì)胞（HSC-LX2）是否有選擇性抑制作用及CTX-1對HSC-LX2細(xì)胞周期、細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)、PI3K/AKT信號通路的影響,從而闡明CTX-1通過阻滯細(xì)胞周期抑制HSC-LX2細(xì)胞增殖并通過PI3K/AKT信號通路誘導(dǎo)HSC-LX2細(xì)胞凋亡的機制。方法:依次應(yīng)用DEAE-Sepharose CL-6B陰離子交換層析、Spehadex G-50凝膠層析和Macro-prep High S陽離子交換層析來對眼鏡蛇毒細(xì)胞毒素進(jìn)行分離純化。用SDS-PAGE電泳鑒定蛋白純度并采用NanoLC-ESI-MS/MS蛋白質(zhì)譜法鑒定蛋白質(zhì)成分及其分子量大小。采用CCK-8法檢測不同濃度的CTX-1和CTX-2對HSC-LX2和HL7702細(xì)胞增殖的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CTX-1干預(yù)后HSC-LX2細(xì)胞周期的變化與CTX-1對HSC-LX2和HL7702細(xì)胞凋亡的影響。通過透射電鏡觀察CTX-1干預(yù)后HSC-LX2細(xì)... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

DEAE-SepharoseCL-6B陰離子交換柱分離眼鏡蛇毒粗毒Fig.1-1DEAE-SepharoseCL-6Banionexchangechromatographof

圖 1-2 Sephadex G-50 凝膠柱分離陰離子交換柱峰ⅠFig.1-2 Gel filtration of peakⅠfrom anion exchange on acolumn of Sephadex G-502.1.3 Macro-prep High S 預(yù)裝柱陽離子交換層析將 Spehadex G-50 分子篩層析中細(xì)胞毒性最High S 預(yù)裝柱陽離子交換層析進(jìn)一步分離純化后1-3 所示。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)第Ⅳ峰和第Ⅴ峰細(xì)胞毒性較透析凍干，保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?

圖 1-2 Sephadex G-50 凝膠柱分離陰離子交換柱峰ⅠFig.1-2 Gel filtration of peakⅠfrom anion exchange on acolumn of Sephadex G-502.1.3 Macro-prep High S 預(yù)裝柱陽離子交換層析將 Spehadex G-50 分子篩層析中細(xì)胞毒性最強的第Ⅲ峰High S 預(yù)裝柱陽離子交換層析進(jìn)一步分離純化后，共有六個1-3 所示。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)第Ⅳ峰和第Ⅴ峰細(xì)胞毒性較強。收集第透析凍干，保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]舟山眼鏡蛇細(xì)胞毒素CTX1抗腫瘤作用及機制[D]. 吳敏燕.廣州醫(yī)學(xué)院 2011



本文編號：2915716