目的:通過(guò)中藥車(chē)前子及其活性成分對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的動(dòng)物保護(hù)實(shí)驗(yàn),研究其對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的治療作用,并運(yùn)用分子生物學(xué)方法及細(xì)胞學(xué)方法,進(jìn)一步探討中藥車(chē)前子及其活性成分對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌治療作用及作用機(jī)制。方法:1、選取普通級(jí)昆明雄性小鼠80只分為兩組,兩組給予不同菌量的沙門(mén)氏菌,觀(guān)察小鼠死亡率、小鼠生長(zhǎng)情況、盲腸病理變化,探討車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌小鼠模型的保護(hù)作用;2、通過(guò)液相色譜儀,測(cè)定車(chē)前子提取物中主要活性成分京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、桃葉珊瑚苷含量,采用NCCLS推薦的肉湯微量稀釋法測(cè)定中藥車(chē)前子及其活性成分對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的最低抑菌濃度,通過(guò)記錄菌液的OD_(600)數(shù)值,監(jiān)測(cè)鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染的生長(zhǎng)情況,繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)。3、通過(guò)計(jì)算車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌入侵Hela細(xì)胞的入侵率,以驗(yàn)證其對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌入侵宿主細(xì)胞的抑制作用,通過(guò)測(cè)量酶標(biāo)儀測(cè)量490nm處的吸光值,計(jì)算樣品上清中LDH的釋放量,驗(yàn)證車(chē)前子提取物對(duì)Hela細(xì)胞的毒性。4、通過(guò)Western-Blot方法,觀(guān)察車(chē)前子及其活性成分京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、桃葉珊瑚苷對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌SPI-1主要效應(yīng)蛋白SipA及SipC表達(dá)的影響,進(jìn)一步分析車(chē)前子及主要活性成分桃葉珊瑚苷對(duì)鼠傷沙門(mén)氏菌治療的作用機(jī)制。結(jié)果:1、車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染小鼠的死亡率、體重下降具有很好的保護(hù)作用。小鼠盲腸病理切片顯示,鼠傷寒沙門(mén)氏菌處理組小鼠盲腸杯狀細(xì)胞減少甚至消失,結(jié)構(gòu)破壞,大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),而藥物治療組及inva敲除組,小鼠的盲腸僅有不明顯的皮下水腫,且杯狀細(xì)胞排列整齊,結(jié)構(gòu)完整,表明車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌在小鼠盲腸中引起的病理變化具有顯著的保護(hù)作用。2、經(jīng)高效液相儀測(cè)定車(chē)前子提取物主要活性成分中京尼平苷酸的含量為0.76%,毛蕊花糖苷的含量為0.51%、桃葉珊瑚苷的含量為0.04%。車(chē)前子提取物、京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、桃葉珊瑚苷在常規(guī)有效藥物濃度下對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)均無(wú)抑制作用。3、車(chē)前子提取物在有效藥物濃度16,32mg/mL時(shí),在不影響Hela細(xì)胞的活性同時(shí),可有效抑制沙門(mén)氏菌對(duì)Hela細(xì)胞的入侵,僅在濃度為128mg/mL時(shí)表現(xiàn)出微弱的細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)表明,車(chē)前子提取物可有效抑制鼠傷寒沙門(mén)氏菌入侵上皮細(xì)胞,干預(yù)細(xì)胞感染過(guò)程。4、車(chē)前子提取物未有效抑制鼠傷寒沙門(mén)氏菌重要入侵蛋白SipA的表達(dá)水平,但車(chē)前子及主要活性成分桃葉珊瑚苷可以有效抑制鼠傷寒沙門(mén)氏菌重要效應(yīng)蛋白SipC的表達(dá)水平。進(jìn)一步證實(shí)車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的保護(hù)作用機(jī)制為車(chē)前子提取物對(duì)效應(yīng)蛋白SipC的下調(diào)作用,其主要起效成分為活性成分桃葉珊瑚苷。結(jié)論:車(chē)前子及其活性成分桃葉珊瑚苷,通過(guò)對(duì)鼠傷寒SPI-1編碼的重要效應(yīng)蛋白SipC顯著下調(diào)作用,致使SPI-1編碼的效應(yīng)蛋白不能正常的運(yùn)轉(zhuǎn),鼠傷寒沙門(mén)氏菌入侵上皮細(xì)胞的能力因此而被削弱,進(jìn)而起到了抑制鼠傷寒沙門(mén)氏菌對(duì)上皮細(xì)胞入侵的作用,保護(hù)感染小鼠的作用。車(chē)前子及其活性成分對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的治療作用的得到了進(jìn)一步證實(shí),其作用機(jī)理及起效成分得到進(jìn)一步明確。根據(jù)中醫(yī)滲濕止瀉理論,選取中藥車(chē)前子治療鼠傷寒沙門(mén)氏菌,通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)其治療效果及機(jī)制進(jìn)一步明確,為中醫(yī)藥治療鼠傷寒沙門(mén)氏感染提供了理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù),擴(kuò)展了新思路。
【學(xué)位單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

（5）將載玻片置于 5%伊紅溶液中染色 2min；（6）將載玻片置于 95%乙醇中浸潤(rùn) 20 次，轉(zhuǎn)移至 95%乙醇中浸泡 2min，再至 100%的乙醇中，每次 2min；（7）將載玻片置于二甲苯中，2min；將蓋玻片蓋好，放置于光學(xué)顯微鏡下觀(guān)片。果車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染小鼠死亡率的影響圖 1 所示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染的小鼠具有護(hù)作用。鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染后，陽(yáng)性療組感染后第五天出現(xiàn)死亡，其死亡率，第六天，第七天，第八天分別為 20%,40%,60%,80%；inva 敲除組在第七天，其死亡率在第在第七天，第八天分別為 10%,30%；車(chē)前子組在第八天出現(xiàn)死亡率在第八天，第九天分別為 20%,40%。這表明，車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)鼠引起的死亡率具有明顯的保護(hù)作用。

圖 2 車(chē)前子提取物對(duì)感染鼠傷寒沙門(mén)氏菌 SL1344 小鼠體重的保護(hù)作用2.3 車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染小鼠盲腸病理變化的保護(hù)作用如圖2所示，實(shí)驗(yàn)表明，車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌引起的小鼠盲腸病理變化具有很好的保護(hù)作用，如圖所示，在陽(yáng)性對(duì)照組中，鼠傷寒沙門(mén)氏菌處理組小鼠盲腸杯狀細(xì)胞減少甚至消失，結(jié)構(gòu)破壞，大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，而藥物治療組及inva 敲除組，小鼠的盲腸僅有不明顯的皮下水腫，且杯狀細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，這表明車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌引起的盲腸的病理變化具有明顯的保護(hù)作用�？瞻捉M SL1344 感染組

圖 2 車(chē)前子提取物對(duì)感染鼠傷寒沙門(mén)氏菌 SL1344 小鼠體重的保護(hù)作用2.3 車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染小鼠盲腸病理變化的保護(hù)作用如圖2所示，實(shí)驗(yàn)表明，車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌引起的小鼠盲腸病理變化具有很好的保護(hù)作用，如圖所示，在陽(yáng)性對(duì)照組中，鼠傷寒沙門(mén)氏菌處理組小鼠盲腸杯狀細(xì)胞減少甚至消失，結(jié)構(gòu)破壞，大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，而藥物治療組及inva 敲除組，小鼠的盲腸僅有不明顯的皮下水腫，且杯狀細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，這表明車(chē)前子提取物對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌引起的盲腸的病理變化具有明顯的保護(hù)作用�？瞻捉M SL1344 感染組
【參考文獻(xiàn)】

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1 溫晉華;馬玉春;;某企業(yè)食堂就餐引起鼠傷寒沙門(mén)氏菌食物中毒的流行病學(xué)分析[J];河北醫(yī)學(xué);2015年12期

2 曾金祥;畢瑩;許兵兵;任剛;王娟;朱繼孝;朱玉野;;車(chē)前子化學(xué)成分研究[J];中藥材;2015年05期

3 孫秀超;王海龍;楊芳芳;王振輝;;5種常見(jiàn)中草藥提取液的抑菌試驗(yàn)[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2015年06期

4 謝明;楊爽爽;王亮亮;李龍;王笑庸;;中藥車(chē)前子的研究進(jìn)展[J];黑龍江醫(yī)藥;2015年03期

5 殷俊磊;吳穎斐;藺志杰;王曉春;胡亞辰;李求春;耿士忠;焦新安;;雞白痢沙門(mén)菌S06004株致病島-2缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性[J];微生物學(xué)報(bào);2015年09期

6 張賽奇;王米;楊銳樂(lè);薛飛群;;15種中藥對(duì)豬大腸桿菌的體外抑菌試驗(yàn)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年03期

7 張素輝;曹?chē)?guó)文;張邑帆;周淑蘭;;抗雞白痢沙門(mén)氏菌中藥復(fù)方的篩選[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘;2014年09期

8 劉海隆;張艷;鄭心力;林大捷;邢漫萍;趙興華;;木麻黃和地膽草體外抑菌試驗(yàn)研究[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

9 顏升;曾金祥;畢瑩;魏娟;王曉云;羅光明;朱繼孝;任剛;;車(chē)前子提取物對(duì)正常大鼠利尿活性及腎臟水通道蛋白與離子通道的作用[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2014年12期

10 薛宏宇;韓震;李光坤;董歡歡;;桃葉珊瑚苷提取及對(duì)細(xì)胞氧化損傷保護(hù)作用[J];光譜實(shí)驗(yàn)室;2013年05期

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