目的基于質(zhì)量標(biāo)志物(Q-marker)理論,分析具有抗腫瘤活性的葒草醋酸乙酯提取物的成分,研究其質(zhì)量控制方法。方法首先使用UPLC-ESI-HRMS對(duì)該提取物進(jìn)行成分鑒定;再使用HPLC進(jìn)行成分的定量測(cè)定,同時(shí)建立其定量測(cè)定方法,并對(duì)鑒定出的化合物進(jìn)行藥理作用分析,初步預(yù)測(cè)Q-marker;最后采用人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞模型,研究葒草醋酸乙酯提取物及6種候選成分混合物對(duì)A549腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及遷移的影響。結(jié)果通過(guò)UPLC-ESI-HRMS結(jié)果指認(rèn)出12個(gè)化合物,其中,HPLC未檢出原兒茶酸、兒茶素、山柰素和芹菜素,異牡荊素和木犀草素質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于0.01mg/g,不納入Q-marker候選物之列。結(jié)合藥理作用分析,最終選擇了6種成分沒(méi)食子酸、異葒草苷、葒草苷、牡荊素、木犀草苷和槲皮苷作為其潛在Q-marker。各樣品中均能檢測(cè)出這6個(gè)成分,且6個(gè)成分總量超過(guò)10%。葒草醋酸乙酯提取物及等劑量6成分混合物均能顯著抑制A549細(xì)胞的增殖與遷移,并誘導(dǎo)其凋亡,且兩組之間效果無(wú)顯著性差異。結(jié)論沒(méi)食子酸、異葒草苷、葒草苷、牡荊素、木犀草苷和槲皮苷作為具有抗腫瘤活性的葒草醋酸乙酯提取物中的潛在Q-marker具有科學(xué)合理性;建立的葒草醋酸乙酯提取物的HPLC定量測(cè)定方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定。
【部分圖文】：

UPLC-ESI-HRMS鑒定發(fā)現(xiàn)POEa中含有沒(méi)食子酸、原兒茶酸、兒茶素、牡荊素、槲皮苷、山柰素、木犀草素、芹菜素、異葒草苷、葒草苷、異牡荊素、木犀草苷12種成分，見(jiàn)圖1和表1。以葒草苷為例，該化合物在供試品中的保留時(shí)間為12.64 min，一級(jí)質(zhì)譜信息顯示其在負(fù)離子模式下響應(yīng)較正離子好，并得到m/z 447.093 0的準(zhǔn)分子離子峰[M-H]-，經(jīng)Xcalibar軟件擬合后推測(cè)其分子式為C21H20O11，該化合物的二級(jí)離子碎片信息主要有m/z 357.061 7、m/z 327.051 1、分別對(duì)應(yīng)[M-H-C3H6O3]-、[M-H-C4H8O4]-；推測(cè)其裂解途徑符合黃酮類化合物的裂解規(guī)律，結(jié)合文獻(xiàn)分析[15]，最終確定該化合物為葒草苷。

沒(méi)食子酸、異葒草苷、葒草苷、牡荊素、木犀草苷及槲皮苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD分別為0.8%、1.3%、0.9%、1.0%、0.7%、0.8%，表明該方法重復(fù)性良好。3.2.6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

本研究應(yīng)用劉昌孝院士[11]提出的“質(zhì)量標(biāo)志物”（Q-marker）的理論，通過(guò)UPLC-ESI-HRMS結(jié)合對(duì)照品指認(rèn)了12種成分；再通過(guò)化合物與抗腫圖4 POEa和混合物對(duì)A549細(xì)胞凋亡率的影響
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