目的考察秦皮乙素對(duì)乏氧微環(huán)境中三陰性乳腺癌細(xì)胞干性的影響。方法 Western blot法考察乏氧微環(huán)境(5%O_2-10%CO_2-85%N_2)中MDA-MB-231細(xì)胞特征,細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)考察秦皮乙素對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞在正常培養(yǎng)及乏氧培養(yǎng)下的影響。將培養(yǎng)的乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞分為正常組、乏氧組和秦皮乙素2.5、10、20μmol·L~(-1)組,流式細(xì)胞術(shù)、腫瘤球形成及Western blot法考察秦皮乙素對(duì)乏氧微環(huán)境中癌細(xì)胞干性的影響。結(jié)果與正常組相比,乏氧組細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)和干性標(biāo)志物CD44的表達(dá)顯著增多(P 0.01)。秦皮乙素對(duì)正常培養(yǎng)和乏氧培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞均顯示一定的抑制作用,其正常培養(yǎng)24 h和48 h半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為66.87μmol·L~(-1)和28.65μmol·L~(-1),乏氧培養(yǎng)24 h和48 h IC50分別為40.21μmol·L~(-1)和16.09μmol·L~(-1)。與正常組比較,乏氧組CD44+/CD24-細(xì)胞比例顯著升高,腫瘤球形成顯著增多(P 0.01)。與乏氧組比較,秦皮乙素2.5、10、20μmol·L~(-1)組CD44+/CD24-細(xì)胞比例顯著下降,腫瘤球形成減少,HIF-1α表達(dá)下調(diào),干性相關(guān)標(biāo)志物CD44、Nanog、Sox2、OCT4表達(dá)降低(P 0.05,P 0.01)。結(jié)論秦皮乙素可抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231在乏氧微環(huán)境中的增殖,降低乳腺癌細(xì)胞干性,其作用機(jī)制可能與穩(wěn)定HIF-1α表達(dá),下調(diào)干性相關(guān)蛋白有關(guān)。
【部分圖文】：

與正常組相比，乏氧組MDA-MB-231細(xì)胞中HIF-1α表達(dá)明顯增多，干性標(biāo)志物CD44的表達(dá)也顯著增多，均具有非常顯著差異（P<0.01），見圖1。細(xì)胞增殖

秦皮乙素（0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25、50、100μmol·L-1）在正常培養(yǎng)和乏氧培養(yǎng)下均對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞顯示一定的抑制作用，作用48 h的細(xì)胞存活率有低于作用24 h的趨勢(shì)，見圖2。秦皮乙素作用24 h和48 h的IC50在正常培養(yǎng)下分別為66.87μmol·L-1和28.65μmol·L-1，在乏氧微環(huán)境下分別為40.21μmol·L-1和16.09μmol·L-1。根據(jù)48 h IC50結(jié)果，選擇秦皮乙素濃度2.5、10、20μmol·L-1進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。CD44+/CD24-細(xì)胞比例

流式細(xì)胞檢測(cè)顯示，乏氧組MDA-MB-231細(xì)胞中CD44+/CD24-細(xì)胞比例較正常組明顯增多（P<0.01）；秦皮乙素2.5、10、20μmol·L-1組CD44+/CD24-細(xì)胞比例顯著減少，與乏氧組有顯著差異（P<0.01），見圖3。腫瘤球形成
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