目的探討葛根素對缺氧再復(fù)氧成骨細(xì)胞細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。方法組織塊法和差速法獲得成骨細(xì)胞并鑒定。將成骨細(xì)胞用葛根素(10-6-10-10M)處理,CCK-8檢測3小時(shí),12小時(shí),24小時(shí)后細(xì)胞活性。選擇3小時(shí)中有效的濃度進(jìn)一步實(shí)驗(yàn),建立正常組,缺氧復(fù)氧組,缺氧復(fù)氧葛根素組;CCK-8檢測各組細(xì)胞的活性變化,流式檢測細(xì)胞凋亡,ROS,免疫蛋白印跡檢測I型膠原(Collagen type I)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP-2)、核心結(jié)合因子α1(RUNX-2)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的表達(dá)。結(jié)果獲得成骨細(xì)胞。CCK-8檢測葛根素可促進(jìn)成骨細(xì)胞,選擇葛10-8-10-9M根素作用3小時(shí),用作實(shí)驗(yàn),缺氧復(fù)氧可以有效降低成骨細(xì)胞的生物學(xué)活性,提高凋亡和ROS,葛根素能逆轉(zhuǎn)這些損傷。葛根素促進(jìn)成骨相關(guān)蛋白I型膠原(Collagen type I)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP-2)、核心結(jié)合因子α1(RUNX-2)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的表達(dá)回升。結(jié)論葛根素對缺氧復(fù)氧損傷的成骨細(xì)胞有保護(hù)作用。
【部分圖文】：

成骨細(xì)胞的凋亡及自噬極大的影響骨組織的愈合[2]。而葛根素是一種異黃酮的中草藥，本實(shí)驗(yàn)證明了葛根素能有效的提高缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞活性。利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測了細(xì)胞周期可以發(fā)現(xiàn)缺氧復(fù)氧抑制了成骨細(xì)胞的增殖，而葛根素可以促進(jìn)缺氧復(fù)氧的成骨細(xì)胞的增殖。ROS（活性氧簇）在細(xì)胞的生命活動(dòng)中有重要的作用，低水平的ROS表現(xiàn)出生理細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)作用，導(dǎo)致細(xì)胞的增殖，遷移[3]，研究表明過量的ROS產(chǎn)生與許多疾病的病理學(xué)相關(guān)，包括骨丟失[4-5]，而在本實(shí)驗(yàn)中葛根素降低了成骨細(xì)胞的ROS積累量，并促進(jìn)了成骨細(xì)胞的增殖能力，使得成骨細(xì)胞的增殖能力升高。BMP-2和TGF-β1在前成骨細(xì)胞階段誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化和骨形成中起關(guān)鍵作用[6]。與Runt相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2）在成骨細(xì)胞分化中是主要的控制轉(zhuǎn)錄因子[7]。成骨細(xì)胞骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP-2）是轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）超家族中多功能細(xì)胞因子的一員，其可以誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞并發(fā)生成骨作用[8-9],從而促進(jìn)新生骨的形成，所以BMP-2可以作為骨折愈合的主要因子之一。在本實(shí)驗(yàn)中，BMP-2和RUNX2兩種基因在缺氧復(fù)氧前后的表達(dá)變化明顯，而且葛根素能夠明顯增加BMP-2和RUNX2基因在成骨細(xì)胞中的表達(dá)。最近的研究表明，TGF-β1是結(jié)締組織再生和骨重建的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑[[10],TGF-β1可以增強(qiáng)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞中的堿性磷酸酶（ALP）活性并且促進(jìn)新生骨成型，在本實(shí)驗(yàn)中，葛根素可以有效提高其在缺氧復(fù)氧損傷中的表達(dá)。葛根素對于成骨細(xì)胞的缺氧復(fù)氧損傷有逆轉(zhuǎn)的功效，但是其中具體的內(nèi)部分子機(jī)制還有待于進(jìn)一步的研究。圖2：不同濃度的葛根素對成骨細(xì)胞的增殖分化的影響，其中在葛根素作用3小時(shí)中，10-8M和10-9M對成骨細(xì)胞促進(jìn)增值較明顯。*P<0.05

不同濃度的葛根素對成骨細(xì)胞的增殖分化的影響，其中在葛根素作用3小時(shí)中，10-8M和10-9M對成骨細(xì)胞促進(jìn)增值較明顯。*P<0.05

圖2：不同濃度的葛根素對成骨細(xì)胞的增殖分化的影響，其中在葛根素作用3小時(shí)中，10-8M和10-9M對成骨細(xì)胞促進(jìn)增值較明顯。*P<0.05圖4 各組成骨細(xì)胞凋亡率，圖P：葛根素；H/R缺氧復(fù)氧；NC normal control，*P<0.05
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