人參(Panax ginseng)為五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根及根莖,收載于歷版《中國藥典》,最早的藥物學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》將人參列為上品,四環(huán)三萜達(dá)瑪烷型人參皂苷為其主要活性成分,具有顯著的抗腫瘤,抗炎癥,抗肥胖等多種功效。為了綜合開發(fā)人參的藥用價(jià)值,本實(shí)驗(yàn)旨對一種人參加工食品“鮮人參膏”(Fresh Ginseng Paste,FGP)的制作工藝進(jìn)行了探討并對FGP成分中多種人參皂苷進(jìn)行含量測定,制定了FGP的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。文章通過構(gòu)建對乙酰氨基酚(APAP)誘導(dǎo)小鼠肝損傷模型,和順鉑(CDDP)致急性腎損傷動物模型,從細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激等方面進(jìn)一步研究了FGP對肝、腎的保護(hù)活性,同時闡釋了可能的分子機(jī)制,對深入開發(fā)人參加工產(chǎn)品的藥用價(jià)值具有深遠(yuǎn)意義。1.FGP成分分析及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定。取FGP樣品通過HPLC進(jìn)行分析,并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。顯示出FGP中人參總皂苷的含量約為23mg/g,FGP中含有14種人參皂苷,分別為1.Rg1、2.Re、3.Rb1、4.Rc、5.Rb2、6.Rd、7.Rg6、8.F4、9.Rk3、10.Rh4、11.(S)-Rg3、12.(R)-Rg3、13.Rk1、14.Rg5,其中含量較高的為(S,R)Rg3、Rg5和Rk1等次級皂苷組分,經(jīng)方法學(xué)考察14種人參皂苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其重復(fù)率,精密度和穩(wěn)定性RSD值在0.39-0.54%,14種人參皂苷對照品加樣回收率集中在98.7-99.3%之間,RSD值1.85%,已充分證明此方法可以用于FGP中人參皂苷含量測定,且穩(wěn)定性較為良好。并通對FGP的原料、輔料,使用水及環(huán)境進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定制規(guī)范其生產(chǎn)質(zhì)量;2.FGP對對乙酰氨基酚(APAP)誘導(dǎo)小鼠肝損傷的緩解作用。將32只小鼠隨機(jī)分為:空白組、模型組、低劑量及高劑量給藥組。實(shí)驗(yàn)取用血清和小鼠肝組織,分別用在檢測各項(xiàng)生理指標(biāo)及組織病理學(xué)染色。研究表明:FGP可調(diào)節(jié)小鼠的器官指數(shù)并改善血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的水平。還可改善肝組織中谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSH)的耗竭和丙二醛(MDA)水平的異常變化;3.FGP對順鉑(CDDP)致小鼠急性腎損傷的緩解作用,研究取用小鼠血清測定其生理指標(biāo)同時通過HE、TUNEL、Hoechst 33258和免疫組織化學(xué)染色法觀察腎臟組織病理學(xué)變化,采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)分析細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果表明:小鼠血清中肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)和丙二醛(MDA)水平有明顯降低,腎臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)和還原型谷胱甘肽(GSH)顯著升高;組織糖原沉積減少,腎小管上皮細(xì)胞凋亡明顯減少,同時改善了腎組織壞死和凋亡程度。Western blot分析結(jié)果表明,FGP能明顯抑制Bax和cleaved caspase-3等的過表達(dá)和降低Bcl-2的水平。綜上所述,本研究結(jié)果清晰地表明,FGP中富含多種人參皂苷,且次級皂苷含量較高。FGP能夠通過緩解氧化應(yīng)激損傷和抗凋亡作用來減少APAP引起的小鼠急性肝損傷。同時對CDDP誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)的氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡具有很好的保護(hù)活性,其可能的分子機(jī)制是通過抑制了體內(nèi)Bax/Bcl-2以及caspase-3等一系列信號通路的激活,繼而進(jìn)一步緩解了CDDP誘導(dǎo)的急性腎損傷。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

第二篇 研究內(nèi)容第一章 “鮮人參膏”的制備、成分分析及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究“鮮人參膏”（以下簡稱“FGP”）是以鮮人參為主要原料，并配伍具有補(bǔ)中益氣、養(yǎng)神、調(diào)和脾胃功能等作用的大棗，在不添加任何化學(xué)成分的前提下，對其進(jìn)行組方配最大限度保留鮮人參特有香氣及天然成分。通過大量的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，采用參須水不僅可以作為良好的提取溶劑，同時創(chuàng)新性發(fā)用參須水作為溶劑，在提取和保留天然原生皂苷的同時，最大限度的增加稀有皂苷的，可有效增強(qiáng)鮮人參膏的生物活性，充分發(fā)揮鮮人參和大棗的藥效。本部分主要進(jìn)行了FGP的制備研究，分析了其中主要的藥效成分，同時制定了FGP的標(biāo)準(zhǔn)，為人參及加工品的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

(mg/kg) (g) (mg/g) (mg/g) (mg/g)Normal - 33.84±2.38 49.74±2.65 4.96±0.47 13.92±1.03APAP 20 31.57±1.96*50.90±1.36*2.39±0.15*16.00±0.77*APAP+FGP400 29.79±2.28 53.71±0.97#2.56±0.43 14.52±0.95#800 29.37±2.44 53.72±2.64#2.89±0.27#14.81±0.51#注：** p < 0.01，* p < 0.05，與空白組相比；##p < 0.01，#p < 0.05，與模型組相比Note: ** p < 0.01, * p < 0.05, compared with the normal group; # p < 0.05, compared with the model group.2.2 FGP 對小鼠血清指標(biāo)的影響如圖 2.1 所示，在對小鼠給予 APAP 250mg kg-1后導(dǎo)致了模型組血清中 ALT 和 AST升高（p＜0.01），而在低劑量組（400 mg·kg-1）和高劑量組（800 mg·kg-1）給藥后可以劑量依賴性方式明顯降低 APAP 導(dǎo)致的這 2 種轉(zhuǎn)氨酶的增加。初步說明 FGP 對 APAP肝損傷具有一定的保護(hù)作用。

圖2.2. FGP對氧化指標(biāo)（GSH,MDA）的影響（ x ±s ，n=8,）Figure 2.2. Effect of FGP on Oxidation Index (GSH, MDA)（ x ±s ，n=8,）2.2.4 FGP 對小鼠肝組織病理變化影響如圖 2.3 所示，空白組的肝組織未顯示出明顯變化，而在模型組中的組織中可明顯觀察到中央靜脈周圍細(xì)胞壞死變性和炎性細(xì)胞浸潤。顯而易見的是，用 FGP 低，高劑給藥干預(yù)后的小鼠肝臟細(xì)胞有著明顯改善，并清晰體現(xiàn)出劑量依賴性。在圖 2.4 中組織理學(xué)變化的壞死評分中，也清楚地表明 FGP 進(jìn)行干預(yù)后可以緩解 APAP 所致肝臟病理變化。0×010Normal APAPAPAP+FGP400mg/kg 800mg/kg&HE
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本文編號：2877363