人參(Panax ginseng)為五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根及根莖,收載于歷版《中國藥典》,最早的藥物學專著《神農本草經》將人參列為上品,四環(huán)三萜達瑪烷型人參皂苷為其主要活性成分,具有顯著的抗腫瘤,抗炎癥,抗肥胖等多種功效。為了綜合開發(fā)人參的藥用價值,本實驗旨對一種人參加工食品“鮮人參膏”(Fresh Ginseng Paste,FGP)的制作工藝進行了探討并對FGP成分中多種人參皂苷進行含量測定,制定了FGP的質量標準草案。文章通過構建對乙酰氨基酚(APAP)誘導小鼠肝損傷模型,和順鉑(CDDP)致急性腎損傷動物模型,從細胞凋亡及氧化應激等方面進一步研究了FGP對肝、腎的保護活性,同時闡釋了可能的分子機制,對深入開發(fā)人參加工產品的藥用價值具有深遠意義。1.FGP成分分析及質量標準制定。取FGP樣品通過HPLC進行分析,并進行方法學驗證。顯示出FGP中人參總皂苷的含量約為23mg/g,FGP中含有14種人參皂苷,分別為1.Rg1、2.Re、3.Rb1、4.Rc、5.Rb2、6.Rd、7.Rg6、8.F4、9.Rk3、10.Rh4、11.(S)-Rg3、12.(R)-Rg3、13.Rk1、14.Rg5,其中含量較高的為(S,R)Rg3、Rg5和Rk1等次級皂苷組分,經方法學考察14種人參皂苷的標準曲線及其重復率,精密度和穩(wěn)定性RSD值在0.39-0.54%,14種人參皂苷對照品加樣回收率集中在98.7-99.3%之間,RSD值1.85%,已充分證明此方法可以用于FGP中人參皂苷含量測定,且穩(wěn)定性較為良好。并通對FGP的原料、輔料,使用水及環(huán)境進行標準定制規(guī)范其生產質量;2.FGP對對乙酰氨基酚(APAP)誘導小鼠肝損傷的緩解作用。將32只小鼠隨機分為:空白組、模型組、低劑量及高劑量給藥組。實驗取用血清和小鼠肝組織,分別用在檢測各項生理指標及組織病理學染色。研究表明:FGP可調節(jié)小鼠的器官指數并改善血清中谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)的水平。還可改善肝組織中谷胱甘肽轉移酶(GSH)的耗竭和丙二醛(MDA)水平的異常變化;3.FGP對順鉑(CDDP)致小鼠急性腎損傷的緩解作用,研究取用小鼠血清測定其生理指標同時通過HE、TUNEL、Hoechst 33258和免疫組織化學染色法觀察腎臟組織病理學變化,采用蛋白質印跡法(Western blot)分析細胞凋亡情況。結果表明:小鼠血清中肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)和丙二醛(MDA)水平有明顯降低,腎臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)和還原型谷胱甘肽(GSH)顯著升高;組織糖原沉積減少,腎小管上皮細胞凋亡明顯減少,同時改善了腎組織壞死和凋亡程度。Western blot分析結果表明,FGP能明顯抑制Bax和cleaved caspase-3等的過表達和降低Bcl-2的水平。綜上所述,本研究結果清晰地表明,FGP中富含多種人參皂苷,且次級皂苷含量較高。FGP能夠通過緩解氧化應激損傷和抗凋亡作用來減少APAP引起的小鼠急性肝損傷。同時對CDDP誘導小鼠體內的氧化應激和細胞凋亡具有很好的保護活性,其可能的分子機制是通過抑制了體內Bax/Bcl-2以及caspase-3等一系列信號通路的激活,繼而進一步緩解了CDDP誘導的急性腎損傷。
【學位單位】：吉林農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

第二篇 研究內容第一章 “鮮人參膏”的制備、成分分析及質量標準研究“鮮人參膏”（以下簡稱“FGP”）是以鮮人參為主要原料，并配伍具有補中益氣、養(yǎng)神、調和脾胃功能等作用的大棗，在不添加任何化學成分的前提下，對其進行組方配最大限度保留鮮人參特有香氣及天然成分。通過大量的實驗研究發(fā)現，采用參須水不僅可以作為良好的提取溶劑，同時創(chuàng)新性發(fā)用參須水作為溶劑，在提取和保留天然原生皂苷的同時，最大限度的增加稀有皂苷的，可有效增強鮮人參膏的生物活性，充分發(fā)揮鮮人參和大棗的藥效。本部分主要進行了FGP的制備研究，分析了其中主要的藥效成分，同時制定了FGP的標準，為人參及加工品的質量控制提供參考依據。

(mg/kg) (g) (mg/g) (mg/g) (mg/g)Normal - 33.84±2.38 49.74±2.65 4.96±0.47 13.92±1.03APAP 20 31.57±1.96*50.90±1.36*2.39±0.15*16.00±0.77*APAP+FGP400 29.79±2.28 53.71±0.97#2.56±0.43 14.52±0.95#800 29.37±2.44 53.72±2.64#2.89±0.27#14.81±0.51#注：** p < 0.01，* p < 0.05，與空白組相比；##p < 0.01，#p < 0.05，與模型組相比Note: ** p < 0.01, * p < 0.05, compared with the normal group; # p < 0.05, compared with the model group.2.2 FGP 對小鼠血清指標的影響如圖 2.1 所示，在對小鼠給予 APAP 250mg kg-1后導致了模型組血清中 ALT 和 AST升高（p＜0.01），而在低劑量組（400 mg·kg-1）和高劑量組（800 mg·kg-1）給藥后可以劑量依賴性方式明顯降低 APAP 導致的這 2 種轉氨酶的增加。初步說明 FGP 對 APAP肝損傷具有一定的保護作用。

圖2.2. FGP對氧化指標（GSH,MDA）的影響（ x ±s ，n=8,）Figure 2.2. Effect of FGP on Oxidation Index (GSH, MDA)（ x ±s ，n=8,）2.2.4 FGP 對小鼠肝組織病理變化影響如圖 2.3 所示，空白組的肝組織未顯示出明顯變化，而在模型組中的組織中可明顯觀察到中央靜脈周圍細胞壞死變性和炎性細胞浸潤。顯而易見的是，用 FGP 低，高劑給藥干預后的小鼠肝臟細胞有著明顯改善，并清晰體現出劑量依賴性。在圖 2.4 中組織理學變化的壞死評分中，也清楚地表明 FGP 進行干預后可以緩解 APAP 所致肝臟病理變化。0×010Normal APAPAPAP+FGP400mg/kg 800mg/kg&HE
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本文編號：2877363