發(fā)布時間：2020-11-08 08:10

　　 隨著經(jīng)濟的迅猛發(fā)展和人們生活方式的改變,心腦血管疾病已成為人們身體健康的頭號殺手。降低血脂、改善血脂異常在臨床治療中能降低心腦血管病發(fā)生率和死亡率。因此,目前十分需要積極地研究和探索新型的降血脂藥物,尤其是從天然產(chǎn)物中尋找和發(fā)現(xiàn)有價值的物質(zhì)。粗壯女貞是我國西南地區(qū)苦丁茶的主要基源植物之一,在我國擁有悠久的飲用歷史,以茶劑的形式廣泛用于高血壓、高血脂和肥胖人群。但它的作用機制不甚清楚。因此對粗壯女貞降脂效果進行系統(tǒng)的藥效學(xué)評價和機制研究顯得尤為重要。粗壯女貞總苷是從粗壯女貞老葉中提取制備的水溶性苯乙醇苷類成分,本文首先通過動物模型評價粗壯女貞總苷(CNTG)的降脂效果并進行初步的降脂機制研究。將Syrian金黃地鼠隨機分為正常組、高脂模型組、陽性藥非諾貝特組及CNTG高、中、低劑量組。連續(xù)給藥4周,在給藥2周、3周及4周后分別取血檢測血清中脂質(zhì)的含量。實驗結(jié)束時剖取肝臟進行肝臟脂質(zhì)含量測定和肝臟病理檢測。并應(yīng)用實時定量PCR檢測粗壯女貞總苷對肝臟中相關(guān)基因mRNA表達水平的影響;用Western blot法檢測相關(guān)蛋白表達水平。實驗結(jié)果表明,給藥2周、3周、4周后,與模型組相比,CNTG高劑量組血清和肝臟中的TC、TG、LDL-C含量均顯著降低;并可明顯減輕肝細胞病變。CNTG高劑量組明顯升高AMPKmRNA 的相對表達量和 LKB1、phospho-LKB1及phospho-AMPK 的蛋白表達水平,表明CNTG能促進地鼠肝臟中LKB1磷酸化從而激活A(yù)MPK發(fā)揮降脂作用。此外本文建立胰島素抵抗和脂質(zhì)堆積細胞模型來進一步評價粗壯女貞乙醇提取物不同萃取部位及有效成分改善胰島素抵抗和脂質(zhì)堆積的活性。高糖刺激誘導(dǎo)建立胰島素抵抗HepG2細胞模型,并用葡萄糖氧化酶法檢測樣品對胰島素抵抗HepG2細胞糖消耗的影響。利用油酸誘導(dǎo)建立脂質(zhì)堆積HepG2細胞模型,并用油紅O染色法檢測樣品對脂質(zhì)堆積HepG2細胞的影響。實驗結(jié)果表明,在有效濃度范圍內(nèi),粗壯女貞各提取部位和單體化合物對細胞增殖無明顯影響,對HepG2細胞的糖消耗無顯著影響。與模型組相比,除石油醚部位外,總提物、乙酸乙酯、正丁醇及水部位均能不同程度提高胰島素抵抗HepG2細胞的葡萄糖消耗量和改善油酸誘導(dǎo)的脂質(zhì)堆積。不同濃度的阿克苷和紫莖女貞苷A、C、D也均表現(xiàn)出對油酸刺激引起的細胞脂質(zhì)堆積明顯的改善作用。因此,粗壯女貞可以改善高糖刺激引起的HepG2細胞胰島素抵抗和脂質(zhì)堆積,具有較好的開發(fā)前景。為了進一步探究粗壯女貞苯乙醇苷類化合物的生物活性和作用機制,本文設(shè)計了虛擬篩選和RNA-seq實驗。在虛擬篩選實驗中,發(fā)現(xiàn)有6個化合物釣到15個靶標,分別與腫瘤、阿爾茲海默癥、細菌感染和高膽固醇血癥等相關(guān)。為了進一步探討苯乙醇苷化合物對糖脂代謝的影響和機制,利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)探究了阿克苷(AKG)改善脂質(zhì)堆積HepG2細胞脂類合成代謝的可能機制。結(jié)果顯示,Control vs Model和Model vsAKG組間出現(xiàn)了大量差異表達基因。經(jīng)對已知差異基因進行GO功能和KEGG富集分析,發(fā)現(xiàn)這些差異表達基因涉及生物過程、分子功能和細胞組分等多個復(fù)雜過程,同時富集到多個與脂類代謝合成相關(guān)的KEGG通路中。這提示阿克苷可以通過多層次、多途徑對脂質(zhì)堆積HepG2細胞脂類代謝合成進行調(diào)控。結(jié)合GO功能注釋和KEGG pathway富集分析隨機挑選SCARB1、SCARB2、ACAT2、DHCR7、FDFT1、LSS、HMGCR、SREBF1 和CPT1A基因進行驗證,經(jīng)驗證發(fā)現(xiàn),實時定量PCR的結(jié)果與RNA-seq測序結(jié)果基本一致,說明RNA-seq測序結(jié)果是可信的。同時通過對差異基因的驗證和注釋進一步明確了阿克苷發(fā)揮降脂作用可能影響的部分靶點和信號通路,AKG可能通過影響 SCARB1、SCARB2、ACAT2、DHCR7、FDFT1、LSS、SREBF1和HMGCR等多個基因的表達改善脂類代謝合成過程,但對CPT1A沒有影響,這為粗壯女貞中苯乙醇苷化合物的降脂機制的研究提供了可靠的數(shù)據(jù)。
【學(xué)位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

２．２．１給藥前金黃地鼠血脂水平變化??一周后，各造模組地鼠與正常對照組比較，ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ均明顯升高??（Ｐ＜０．００１），差異有顯著性意義，表明高脂血癥金黃地鼠模型成立。見表２，圖??１〇???表２?給藥前各組金黃地鼠血月旨水平ｉｘ±ｓ，?ｎ＝１０，?ｍｍｏｌ－Ｌ＇１）???血清總膽固甘油三酯?低密度脂蛋白－髙密度脂蛋白－??Ｇｒ〇ＵＰ?醇（ＴＣ）?（ＴＧ）?膽固醇（ＬＤＬ－Ｃ）膽固醇（ＨＤＬ－Ｃ）??ｃｏｎｔｒｏｌ?３．４１?士０．３９?１．７４±０．５０?０．９７士?０．１３?１．６５?士?０．２３??ｍｏｄｅｌ?５．６０?士?０．９５＊＊＊?３．０１±０．９５＊＊＊?２．０３±０．５６＊＊＊?２．１２?土?０．１９＊＊＊??ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ?５．７２±１．１７＊＊＊?２．８９?士０．６５＊＊＊?２．０６士?０．７９＊＊＊?２．１８?土?０．２４＊＊＊??ＣＮＴＧ?ＳＯＯｒｎｇ－ｋｇ＇１?５．４６±〇．８７＊＊＊?２．７５±０．８４＊＊?２．１０±０．４３＊＊＊?２．０１±０．２２＊＊??ＣＮＴＧ?６００ｍｇ－ｋｇ?＊?５．８６±１．３４＊＊＊?２．９１±０．８５＊＊＊?２．１３土０．７６＊＊＊?２．１８±０．３７＊＊??ＣＮＴＧ?１２００ｍｇｋｇ?１?５．７４±１．２７＊＊＊?２．９２士?１．４６＊＊＊?２．１４±１．１２＊＊＊?１＿９７?士?０．２３＊＊???＊＊／＊＜０．０１，?＊＊＊?Ｐ＜０．００１?ｖｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ??

差異有顯著性意義。與模型組相比，ＣＮＴＧ給藥組可顯著降低高脂誘導(dǎo)??的金黃地鼠血清中ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ的含量，效果顯著（／＾仍，戶＜０．０１）。見??表３，圖２。???表３給藥２周各組金黃地鼠血脂水平變化Ｇ土Ｓ?ｎ＝１０，ｍｍｏｌ?Ｌ／１）???Ｇｒｏｕｐ?ＴＣ?ＴＧ?ＬＤＬ－Ｃ?ＨＤＬ－Ｃ???ｃｏｎｔｒｏｌ?３．５３±０．２５?２．０３±０．７９?０．９１±０．１６?１，６９±０．２０??ｍｏｄｅｌ?６＿６７±０．８３＊料?３．６３±１．１５＊＊?２＿５７?土０．５８＊＊＊?２．３６土?０．２２＊＊＊??ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ?４．７２±０．２８ＡＡＡ?２．０４±０．６０ＡＡ?１．２６±〇．２１ＡＡＡ?２．０２?士?０．１３“?▲??ＣＮＴＧ?３００ｍｇ．ｋｇｏ?６．７１?土０．７３?３．０７士０．９６?２．５２±０．４０?２．３６士０．２３??ＣＮＴＧ?６００ｍｇ．ｋｇ－ｉ?６．０５±〇．７４?２＿８８±０＿７８?２．１０±０．４６?２＿２５±０．３２??ＣＮＴＧ?１２００ｍｇｋｇ－＇?５．３７±０．７４ＡＡ?２．５５±０．９６Ａ?１．８２±０．２６ＡＡ?１．９９?土?０．３３?▲▲??＊＊?Ｐ＜０．０１，?＊＊＊?Ｐ＜０．００１?ｖｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?Ａ／Ｊ＜０．０５，?ＡＡ?Ｐ＜０．０１，?Ａ?ＡＡ?Ｐ＜Ｏ．００Ｊ?ｖｓ?ｍｏｄｅｌ??？。ｗｗ?ＶＶＣ

續(xù)顯著升高，差異有顯著性意義。與模型組相比，ＣＮＴＧ高劑量可以顯著降??ＴＣ（Ｐ＜０．０５）和ＴＧ?（尸＜０．００１），但ＣＮＴＧ低劑量和中劑量組對模型組ＴＣ、ＴＧ??和ＬＤＬ－Ｃ的含量沒有影響。見表５，圖４。??表５給藥４周各組金黃地鼠血脂水平變化ｎ＝１０，?ｔｍｎｏｍ???Ｇｒｏｕｐ?Ｔ
【參考文獻】

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本文編號：2874512