北蟲草不僅含有豐富的氨基酸、蛋白質、維生素和微量元素等,還具有增強人體免疫力、抗腫瘤、抗疲勞等功能,是一種有很高的食用價值及藥用價值的食藥用真菌。試驗以北蟲草子實體為原料,提取、分離純化北蟲草中生物堿類化合物,并初步探究其抗氧化能力及抑菌能力,可為進一步開發(fā)和利用北蟲草提供一定的參考。試驗結果如下:1.試驗用生物堿特有的顏色反應和沉淀反應對粗提物進行了初步的鑒定,并用紫外-可見光分光光度計和高效液相色譜儀對提取物進行了進一步的確認,通過顏色反應、沉淀反應、紫外全波段光譜圖和高效液相色譜圖可以初步確認粗提物中含有生物堿,并確定了其測定波長為268 nm。2.通過研究紫外-可見分光光度計直接測定法得到的圖譜、穩(wěn)定試驗和精密度試驗結果進行比較,得出直接測定法較好,適用于北蟲草總生物堿的測定,此法操作簡單易行;雖然很多人都在用酸性染料比色法,但是在本試驗中,相對于直接測定法,酸性染料比色法操作步驟繁瑣,對樣品的破壞較大,不利于生物堿的收集與純化。3.在單因素的基礎上,采用響應面法對北蟲草總生物堿的提取工藝進行了優(yōu)化了,在提取溫度為52℃,提取時間為23 min,固液比為1:5,乙醇濃度為64%的條件下,生物堿粗提液為0.79 mg/mL,與預測值0.80 mg/mL的RSD(相對標準偏差)為0.62%,表明該模型可靠,換算為提取得率為3.93 mg/g,比優(yōu)化前(2.46 mg/g)提高了近1.6倍。4.通過研究五種樹脂不同類型的性能,如吸附率、解吸附率、靜態(tài)吸附動力學等,篩選出較為合適的樹脂對生物堿進行純化工藝研究,結果表明:732陽離子樹脂比較合適用來純化北蟲草總生物堿工藝的材料。然后對732樹脂進行簡單的純化工藝進行研究,結果表明:用pH為4.0的上樣濃度為1.8 mg/m L,流速為2 BV/h的條件進行吸附;用0.8%的氨水、2 BV/h的流速進行洗脫,可使總生物堿純度提高到74.71%,比純化前(43.15%)提高了1.73倍。表明732樹脂能夠較好的純化北蟲草中的總生物堿。5.試驗采用打孔法考察了純化后生物堿的體外抑菌效果,采用不同濃度梯度對8種菌株進行試驗,以抑菌圈直徑為響應值,探究生物堿對各菌株的最小抑菌濃度。結果表明,北蟲草總生物堿對各菌株的最小抑菌濃度分別為大腸桿菌20mg/mL、傷寒桿菌40 mg/mL、福氏痢疾桿菌20 mg/mL、銅綠假單胞桿菌20 mg/m L、白色念珠菌60 mg/mL。試驗結果表明,北蟲草生物堿具有較好的抑菌效果。6.對純化后的生物堿進行體外抗氧化試驗,包括超氧根陰離子清除能力、羥基自由基清除能力和二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除能力的測定。結果表明,北蟲草總生物堿具有較好的體外抗氧化能力,且與其濃度呈明顯的正比關系。生物堿對DPPH清除率為90.60%,對超氧根陰離子的清除率為85.46%,對羥基自由基的清除率為77.41%,在試驗濃度范圍內均優(yōu)于二丁基羥基甲苯(BHT)的體外抗氧化能力,試驗結果說明北蟲草總生物堿具有較好的體外抗氧化能力。
【學位單位】：延安大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R284.2;R285
【部分圖文】：

圖 2-1 生物堿顏色/沉淀反應圖Fig.2-1 Color and precipitation reaction of alkaloids生物堿的色譜檢識反應結果外吸收光譜結果-2 可知，標品和總生物堿從最小波長 200 nm 開始就有很大的加大在 208.5 nm 和 215 nm 處就達到了最大吸光度，隨后 258 nm 和 268 nm 處又有最大吸收波長。由于本實驗選擇的溶nm 附近對光譜有很大的吸收，從而可以排除 208.5 nm 和 21確定本次試驗的目標波長是 258 nm 和 268 nm,溶劑吸收在最干擾，除去 208.5 nm 和 215 nm 最大吸收波長外還有其他較，遵循了吸收最大干擾最小的原則。由此可初步把測定生物m，同時也能初步確定提取液中含有生物堿。

圖 2-2 北蟲草總生物堿的紫外吸收光譜Fig. 2-2 UV absorption spectra of alkaloids from Cordyceps militarisStandard:蟲草素標品 Sample:試樣混合液 高效液相色譜結果 2-2 為蟲草素標品的高效液相色譜圖，圖 2-3 為提取液的色譜圖，在，保留時間基本一致，可初步判斷樣品和標品為同一種物質。 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 測器 A:260nm圖 2-3 蟲草素標品高效液相色譜圖Fig.2-3 HPLC of standard

- 17 -圖 3-2 北蟲草總生物堿提取流程Fig.3-2 Extraction process of alkaloids from Cordyceps militaris3.1.5 總生物堿含量測定將北蟲草子實體用粉碎機粉碎后過 40 目篩，準確稱取 1 g 于 50 mL 離心管中，加入 10 mL 50 %乙醇酸水溶液，搖晃充分浸透蟲草粉，然后于超聲清洗儀中在功率為 200 W、溫度為 40 ℃的條件下提取 20 min，在 5 ℃、8000 r/min 的條件下離心，取上清液，減壓回收溶劑得酸水液，加入 10 mL 石油醚萃取脫脂，重復 3 次，用10 %的氨水加入到酸水液中,調節(jié) pH 至 10~11，在 5 ℃、8000 r/min 的條件下離心
【參考文獻】

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本文編號：2873615