北蟲(chóng)草不僅含有豐富的氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素和微量元素等,還具有增強(qiáng)人體免疫力、抗腫瘤、抗疲勞等功能,是一種有很高的食用價(jià)值及藥用價(jià)值的食藥用真菌。試驗(yàn)以北蟲(chóng)草子實(shí)體為原料,提取、分離純化北蟲(chóng)草中生物堿類化合物,并初步探究其抗氧化能力及抑菌能力,可為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用北蟲(chóng)草提供一定的參考。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.試驗(yàn)用生物堿特有的顏色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)對(duì)粗提物進(jìn)行了初步的鑒定,并用紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)和高效液相色譜儀對(duì)提取物進(jìn)行了進(jìn)一步的確認(rèn),通過(guò)顏色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、紫外全波段光譜圖和高效液相色譜圖可以初步確認(rèn)粗提物中含有生物堿,并確定了其測(cè)定波長(zhǎng)為268 nm。2.通過(guò)研究紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)直接測(cè)定法得到的圖譜、穩(wěn)定試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較,得出直接測(cè)定法較好,適用于北蟲(chóng)草總生物堿的測(cè)定,此法操作簡(jiǎn)單易行;雖然很多人都在用酸性染料比色法,但是在本試驗(yàn)中,相對(duì)于直接測(cè)定法,酸性染料比色法操作步驟繁瑣,對(duì)樣品的破壞較大,不利于生物堿的收集與純化。3.在單因素的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法對(duì)北蟲(chóng)草總生物堿的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化了,在提取溫度為52℃,提取時(shí)間為23 min,固液比為1:5,乙醇濃度為64%的條件下,生物堿粗提液為0.79 mg/mL,與預(yù)測(cè)值0.80 mg/mL的RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)為0.62%,表明該模型可靠,換算為提取得率為3.93 mg/g,比優(yōu)化前(2.46 mg/g)提高了近1.6倍。4.通過(guò)研究五種樹(shù)脂不同類型的性能,如吸附率、解吸附率、靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)等,篩選出較為合適的樹(shù)脂對(duì)生物堿進(jìn)行純化工藝研究,結(jié)果表明:732陽(yáng)離子樹(shù)脂比較合適用來(lái)純化北蟲(chóng)草總生物堿工藝的材料。然后對(duì)732樹(shù)脂進(jìn)行簡(jiǎn)單的純化工藝進(jìn)行研究,結(jié)果表明:用pH為4.0的上樣濃度為1.8 mg/m L,流速為2 BV/h的條件進(jìn)行吸附;用0.8%的氨水、2 BV/h的流速進(jìn)行洗脫,可使總生物堿純度提高到74.71%,比純化前(43.15%)提高了1.73倍。表明732樹(shù)脂能夠較好的純化北蟲(chóng)草中的總生物堿。5.試驗(yàn)采用打孔法考察了純化后生物堿的體外抑菌效果,采用不同濃度梯度對(duì)8種菌株進(jìn)行試驗(yàn),以抑菌圈直徑為響應(yīng)值,探究生物堿對(duì)各菌株的最小抑菌濃度。結(jié)果表明,北蟲(chóng)草總生物堿對(duì)各菌株的最小抑菌濃度分別為大腸桿菌20mg/mL、傷寒桿菌40 mg/mL、福氏痢疾桿菌20 mg/mL、銅綠假單胞桿菌20 mg/m L、白色念珠菌60 mg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明,北蟲(chóng)草生物堿具有較好的抑菌效果。6.對(duì)純化后的生物堿進(jìn)行體外抗氧化試驗(yàn),包括超氧根陰離子清除能力、羥基自由基清除能力和二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除能力的測(cè)定。結(jié)果表明,北蟲(chóng)草總生物堿具有較好的體外抗氧化能力,且與其濃度呈明顯的正比關(guān)系。生物堿對(duì)DPPH清除率為90.60%,對(duì)超氧根陰離子的清除率為85.46%,對(duì)羥基自由基的清除率為77.41%,在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)均優(yōu)于二丁基羥基甲苯(BHT)的體外抗氧化能力,試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明北蟲(chóng)草總生物堿具有較好的體外抗氧化能力。
【學(xué)位單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284.2;R285
【部分圖文】：

圖 2-1 生物堿顏色/沉淀反應(yīng)圖Fig.2-1 Color and precipitation reaction of alkaloids生物堿的色譜檢識(shí)反應(yīng)結(jié)果外吸收光譜結(jié)果-2 可知，標(biāo)品和總生物堿從最小波長(zhǎng) 200 nm 開(kāi)始就有很大的加大在 208.5 nm 和 215 nm 處就達(dá)到了最大吸光度，隨后 258 nm 和 268 nm 處又有最大吸收波長(zhǎng)。由于本實(shí)驗(yàn)選擇的溶nm 附近對(duì)光譜有很大的吸收，從而可以排除 208.5 nm 和 21確定本次試驗(yàn)的目標(biāo)波長(zhǎng)是 258 nm 和 268 nm,溶劑吸收在最干擾，除去 208.5 nm 和 215 nm 最大吸收波長(zhǎng)外還有其他較，遵循了吸收最大干擾最小的原則。由此可初步把測(cè)定生物m，同時(shí)也能初步確定提取液中含有生物堿。

圖 2-2 北蟲(chóng)草總生物堿的紫外吸收光譜Fig. 2-2 UV absorption spectra of alkaloids from Cordyceps militarisStandard:蟲(chóng)草素標(biāo)品 Sample:試樣混合液 高效液相色譜結(jié)果 2-2 為蟲(chóng)草素標(biāo)品的高效液相色譜圖，圖 2-3 為提取液的色譜圖，在，保留時(shí)間基本一致，可初步判斷樣品和標(biāo)品為同一種物質(zhì)。 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 測(cè)器 A:260nm圖 2-3 蟲(chóng)草素標(biāo)品高效液相色譜圖Fig.2-3 HPLC of standard

- 17 -圖 3-2 北蟲(chóng)草總生物堿提取流程Fig.3-2 Extraction process of alkaloids from Cordyceps militaris3.1.5 總生物堿含量測(cè)定將北蟲(chóng)草子實(shí)體用粉碎機(jī)粉碎后過(guò) 40 目篩，準(zhǔn)確稱取 1 g 于 50 mL 離心管中，加入 10 mL 50 %乙醇酸水溶液，搖晃充分浸透蟲(chóng)草粉，然后于超聲清洗儀中在功率為 200 W、溫度為 40 ℃的條件下提取 20 min，在 5 ℃、8000 r/min 的條件下離心，取上清液，減壓回收溶劑得酸水液，加入 10 mL 石油醚萃取脫脂，重復(fù) 3 次，用10 %的氨水加入到酸水液中,調(diào)節(jié) pH 至 10~11，在 5 ℃、8000 r/min 的條件下離心
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2873615