發(fā)布時間：2020-11-07 07:06

　　 目的:探討基于補腎通腑法理論組成的加味升降散對血管性癡呆(VD)模型大鼠行為學(xué)的影響,及海馬組織中相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)元的調(diào)控作用,初步揭示其治療VD的作用環(huán)節(jié)和靶點,為臨床使用提供實驗數(shù)據(jù)支持。方法:90只SD大鼠,按照隨機數(shù)字表,隨機分成6組:假手術(shù)組,模型組,高劑量組,中劑量組,低劑量組,石杉堿甲組,每組15只,采用2-血管阻斷法復(fù)制血管性癡呆大鼠模型。造模完成后,剔除模型不成功和死亡的大鼠,每組隨機選取12只作為研究對象。高、中、低劑量組分別按照14ml/kg、7ml/kg、3.5ml/kg灌胃給予0.8g/ml的加味升降散水煎液,石杉堿甲組給予石杉堿甲懸浮液0.1mg/kg,假手術(shù)組、模型組灌胃生理鹽水7ml/kg,tid,28天。給藥結(jié)束后,采用Morris水迷宮法檢測行為學(xué),尼氏染色鏡下觀察海馬形態(tài)學(xué)特征,ELISA檢測大鼠海馬和結(jié)腸中SP、VIP的表達情況,TBA法檢測大鼠海馬中MDA的含量,羥胺法檢測大鼠海馬組織中T-SOD活力的情況,ELISA檢測大鼠海馬中Ach變化結(jié)果;分光光度計法檢測大鼠海馬中AchE含量的變化,Western blotting檢測大鼠海馬中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達情況。結(jié)果:(1)行為學(xué)結(jié)果:與假手術(shù)組比較,模型組逃避潛伏期時間延長(P0.05),學(xué)習(xí)次數(shù)降低(P0.05),經(jīng)過目標區(qū)域及平臺的次數(shù)減少(P0.05),停留在目標區(qū)域及平臺的時間降低(P0.05);與模型組比較,高、中、低劑量組和石杉堿甲組逃避潛伏期時間縮短(P0.05),學(xué)習(xí)次數(shù)增加(P0.05),經(jīng)過目標區(qū)域及平臺的次數(shù)增加(P0.05),停留在目標區(qū)域及平臺的時間延長(P0.05)。(2)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)特征:假手術(shù)組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元基本正常;模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列松散,顯著丟失;與模型組比較,高、中、低劑量組和石杉堿甲組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)有所改善,排列較為緊密有序。(3)氧化損傷因子含量的變化:與假手術(shù)組比較,模型組海馬中T-SOD含量降低(P0.05),而MDA升高(P0.05);與模型組比較,高、中、低劑量組和石杉堿甲組大鼠海馬中T-SOD含量升高(P0.05),而MDA降低(P0.05)。(4)神經(jīng)遞質(zhì)含量變化:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬中SP、VIP、Ach、AchE含量降低(P0.05);與模型組比較,高、中、低劑量組和石杉堿甲組大鼠海馬中SP、VIP、Ach、AchE含量升高(P0.05)。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠結(jié)腸中SP、VIP含量降低(P0.05);與模型組比較,高、中、低劑量組大鼠結(jié)腸中SP、VIP含量升高(P0.05),而石杉堿甲組大鼠結(jié)腸中SP、VIP含量與模型組無明顯差異;與石杉堿甲組比,高、中、低劑量組大鼠結(jié)腸中SP、VIP含量升高(P0.05)。(5)蛋白表達情況:與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬中Bcl-2蛋白表達降低,Bax、Caspase-3蛋白表達升高(P0.05)。與模型組比較,高、中、低劑量組和石杉堿甲組大鼠海馬中bcl-2蛋白表達升高(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表達降低(P0.05)。結(jié)論:加味升降散可改善血管性癡呆所致的認知功能障礙。其作用機制可能是通過改善海馬區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)Ach、AchE的含量,同時通過腦腸雙調(diào),改善海馬區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)SP、VIP的含量來改善認知功能障礙;以及通過提高海馬區(qū)T-SOD的含量,降低MDA的含量抵抗氧化損傷,實現(xiàn)上調(diào)海馬區(qū)Bcl-2蛋白水平,下調(diào)Bax、Caspase-3蛋白水平,改善海馬神經(jīng)元凋亡狀況,從而達到改善認知功能障礙,提高學(xué)習(xí)記憶力。
【學(xué)位單位】：湖北民族學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 2-1 各組大鼠空間探索搜索策略影響圖例Fig. 2-1 The legend about space exploration search strategy of rats in each groupA：假手術(shù)組；B：模型組；C：高劑量組；D：中劑量組；E：低劑量組；F：石杉堿甲組A: Sham operation group; B:model group; C:high-dose group; D: medium-dose grou; E:low-dose group; F: huperzine group.

第二部分 實驗研究4.2 尼 染色結(jié)果各組大鼠海馬組織 CA1 區(qū)尼氏染色結(jié)果，見圖（2-3），假手術(shù)組大鼠海組織神經(jīng)元未見明顯畸形(圖 A)；模型組海馬神經(jīng)元排列松散，顯著丟失(圖 與模型組相比，高劑量組、中劑量組、低劑量組和石杉堿甲組中大鼠海馬組神經(jīng)元在數(shù)目、排列、形態(tài)上均有所改善。見圖（C、D、E、F）。

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05圖 2-7 各組大鼠海馬中 Ach、AchE 含量( n=12， x±s )Tab. 2-5 The contents of Ach,and AchE in the hippocampus of each group( n=12， x±s )4.6 大鼠海馬組織中 CA1 區(qū) Bcl-2、Bax、Caspase-3 的結(jié)果與假手術(shù)組相比，模型組海馬中 Bcl-2 蛋白表達降低，Bax 和 Caspase-3 蛋白表達升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組相比，高、中、低劑量組和石杉堿甲組海馬中 Bcl-2 蛋白表達升高，Bax 和 Caspase-3 蛋白表達降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。高、中、低劑量組之間相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；高、中、低劑量組與石杉堿甲組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖 2-8，圖 2-9。
【參考文獻】

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本文編號：2873609