【研究背景】骨肉瘤是兒童和青少年最常見(jiàn)的骨組織惡性腫瘤之一,惡性程度高,侵襲性強(qiáng),易早期發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。雖然手術(shù)和新輔助化療的應(yīng)用大大提高了患者的生存率,但仍有近一半患者死于轉(zhuǎn)移。腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學(xué)特征,也是惡性腫瘤患者的主要死因。所以如何有效預(yù)防和治療轉(zhuǎn)移,對(duì)改善骨肉瘤患者的預(yù)后至關(guān)重要。槲皮素(Quercetin)是一類(lèi)天然類(lèi)黃酮物質(zhì),廣泛存在于蔬菜、水果和植物中,具有多種生物學(xué)功能。大量研究報(bào)道槲皮素具有抗炎、抗過(guò)敏、擴(kuò)張冠脈、抗血小板聚集、抗氧化、抗癌防癌、調(diào)節(jié)免疫功能等作用。在歐美等國(guó)家,槲皮素已經(jīng)被推薦為天然的潛力抗癌藥物。新近研究發(fā)現(xiàn)槲皮素能夠降低乳腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤的發(fā)生。然而,槲皮素在骨肉瘤中的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。【研究目的】通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的抑制作用和相關(guān)分子機(jī)制,為更好地理解槲皮素的潛在抗骨肉瘤作用提供理論基礎(chǔ)�！狙芯糠椒ā�1.槲皮素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞活力、周期、凋亡的影響(1)人骨肉瘤細(xì)胞株HOS和人骨肉瘤細(xì)胞株MG63,復(fù)蘇傳代培養(yǎng)。向24孔板中加入5×10~4個(gè)細(xì)胞/孔,采用不同濃度組槲皮素(0、25、50、100μM)作用12h和24h后,再向每孔細(xì)胞中加入40μl CCK-8試劑,37°C生化培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育2h,然后在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定細(xì)胞吸光度值來(lái)檢測(cè)細(xì)胞活力。(2)向24孔板中加入5×10~4個(gè)細(xì)胞/孔,采用不同濃度組槲皮素(0、25、50、100μM)作用24h后,胰酶消化細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞周期試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定人骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期變化。(3)用FITC/PI試劑盒測(cè)定細(xì)胞的凋亡情況。向24孔板中加入5×10~4個(gè)細(xì)胞/孔,采用不同濃度組槲皮素(0、25、50、100μM)作用24h后,根據(jù)FITC/PI凋亡試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定人骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡情況。2.槲皮素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響(1)將50μl液化的Matrigel基質(zhì)膠均勻鋪于Transwell小室的微孔膜上,于37℃孵育6h,使Matrigel聚合成膠。細(xì)胞鋪板6小時(shí)后,加入不同濃度組的槲皮素(0、25、50、100μM)處理。以不含血清的培養(yǎng)基重懸骨肉瘤細(xì)胞,加入5×10~4個(gè)細(xì)胞/孔在transwell上室,下室加入含10%血清培養(yǎng)基,作用24h,固定細(xì)胞,結(jié)晶紫染色后用棉簽輕輕拭去基質(zhì)膠和上室細(xì)胞,200×光鏡下觀察5個(gè)視野并計(jì)數(shù)穿過(guò)人工基底膜的細(xì)胞數(shù),計(jì)算其平均值。(2)收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨肉瘤細(xì)胞,接種于24孔板中(5×10~4個(gè)細(xì)胞/孔)。細(xì)胞培養(yǎng)24h,長(zhǎng)滿(mǎn)單層后,用10μl槍頭比著直尺,盡量垂直于背后的橫線劃痕。用PBS洗去劃痕后漂浮的細(xì)胞(以此作為0 h),加入不同濃度組槲皮素(0、25、50、100μM)的無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),檢測(cè)細(xì)胞的遷移率。在0h,12h和24h時(shí)于光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照記錄。3.槲皮素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因mRNA和蛋白變化的影響(1)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定HIF-1α,VEGF,MMP2和MMP9 mRNA表達(dá)情況:向6孔板中加入2×10~5個(gè)細(xì)胞/孔,加入不同濃度組槲皮素(0、25、50、100μM)培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)到時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞棄培養(yǎng)基,Trizol法提取骨肉瘤細(xì)胞RNA,逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)根據(jù)TAKARA公司RT試劑盒進(jìn)行,熒光定量PCR反應(yīng)是根據(jù)TAKARA公司熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)建立。反應(yīng)產(chǎn)物的特異性通過(guò)溶解曲線為單峰來(lái)判斷。(2)用蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)測(cè)定HIF-1α,VEGF,MMP2和MMP9蛋白表達(dá)情況:向6孔板中加入2×10~5個(gè)細(xì)胞/孔,加入不同濃度組槲皮素(0、25、50、100μM)培養(yǎng)24h。培養(yǎng)到時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞棄培養(yǎng)基,將含蛋白酶抑制劑的RIPA加入骨肉瘤細(xì)胞中,刮取并離心細(xì)胞,收集細(xì)胞裂解上清液。取40μg蛋白上樣,采用SDS-PAGE法電泳,分離后的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜,用含5%脫脂奶粉的封閉液封閉1h,4℃孵育HIF-1α,VEGF,MMP2和MMP9的多克隆抗體過(guò)夜,室溫孵育二抗1h,加入ECL曝光。用ImageJ圖像分析軟件分析免疫印跡灰度值。4.裸鼠成瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)分組:(1)空白對(duì)照組:生理鹽水;(2)陽(yáng)性對(duì)照組:順鉑組,2mg/kg;(3)槲皮素組:a.低濃度組,25mg/kg;b.中濃度組:50mg/kg;c.高濃度組:100mg/kg。(2)細(xì)胞準(zhǔn)備和藥物準(zhǔn)備:構(gòu)建重組質(zhì)粒p Lenti-CMV-mCherry-linker-Luc-PGK轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝產(chǎn)生慢病毒顆粒,感染人骨肉瘤細(xì)胞HOS,熒光鑒定感染率100%,建立穩(wěn)定細(xì)胞株。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,胰酶消化離心后,用生理鹽水重懸,配制成5×10~8個(gè)/ml單細(xì)胞懸液。(3)模型建立及給藥方案:30只裸鼠隨機(jī)分為五組。在無(wú)菌條件下于裸鼠尾靜脈接種,每只裸鼠接種0.2ml(即1×10~8個(gè)細(xì)胞)單細(xì)胞懸液。3天后,腹腔注射25,50或100 mg/kg槲皮素。每日兩次,為期四周。陽(yáng)性對(duì)照組順鉑劑量為2mg/kg。陰性對(duì)照組用生理鹽水注射。四周后裸鼠采用水合氯醛麻醉,腹腔注射D-熒光素30秒后頸椎脫臼處死,手術(shù)去除前胸壁,馬上用活體小動(dòng)物成像系統(tǒng)和活體圖像軟件檢測(cè)肺轉(zhuǎn)移灶。所有的上述程序和化驗(yàn)方法經(jīng)廣州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物衛(wèi)生管理和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。計(jì)算抑制率:[(C-T)/C]×100%(公式1),治療組的平均熒光為T(mén),C為陰性對(duì)照組的平均熒光�！緦�(shí)驗(yàn)結(jié)果】1、槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞活力的影響:0、25、50、100μM的槲皮素作用于人骨肉瘤細(xì)胞株HOS和人骨肉瘤細(xì)胞株MG63 12h和24h,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性。結(jié)果顯示,不同濃度的槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞HOS和MG63活性無(wú)明顯影響,P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)CCK-8測(cè)定槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞活力影響的結(jié)果,可選取0、25、50、100μM可作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)刺激濃度。2、槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞周期的影響:不同濃度槲皮素(0、25、50、100μM)刺激人骨肉瘤細(xì)胞株HOS和MG6324h,應(yīng)用細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒測(cè)定細(xì)胞周期分布狀況。結(jié)果顯示,不同濃度槲皮素(0、25、50、100μM)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞株HOS和MG63細(xì)胞G_0/G_1、G_2/M和S期無(wú)明顯影響,其差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響:不同濃度槲皮素(0、25、50、100μM)刺激人骨肉瘤細(xì)胞株HOS和MG6324 h,應(yīng)用Alexa Fluor 488 annexin V/Dead cell凋亡試劑盒測(cè)定凋亡情況。與0μM槲皮素對(duì)照組比較,槲皮素刺激下人骨肉瘤細(xì)胞HOS和MG63未發(fā)生明顯的早期或者中晚期凋亡。4、槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞侵襲能力的影響:采用Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)觀察槲皮素作用后人骨肉瘤細(xì)胞侵襲通過(guò)人工基底膜后的能力。下室加入含不同濃度槲皮素的含血清的培養(yǎng)基,培養(yǎng)24小時(shí)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,25μM槲皮素組、50μM槲皮素組、100μM槲皮素組平均穿膜HOS細(xì)胞數(shù)分別為0μM槲皮素組平均穿膜細(xì)胞數(shù)的(83.98±2.76)%,(38.67±3.52)%和(16.36±2.56)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),槲皮素處理組穿膜HOS細(xì)胞數(shù)明顯低于0μM槲皮素空白對(duì)照組。隨著槲皮素濃度增加,抑制HOS細(xì)胞侵襲能力增加。25μM槲皮素組、50μM槲皮素組、100μM槲皮素組平均穿膜MG63細(xì)胞數(shù)分別為0μM槲皮素組平均穿膜細(xì)胞數(shù)的(87.55±4.98)%,(69.34±5)%和(41.98±4.4)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),槲皮素處理組穿膜MG63細(xì)胞數(shù)明顯低于0μM槲皮素空白對(duì)照組。隨著槲皮素濃度增加,抑制MG63細(xì)胞侵襲能力增加。我們研究證實(shí)了,槲皮素抑制人骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞侵襲,呈劑量依賴(lài)。5、槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞遷移能力的影響:我們采用劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞的遷移能力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同濃度的槲皮素作用于兩種人骨肉瘤細(xì)胞。處理12h后,25μM槲皮素組、50μM槲皮素組、100μM槲皮素組與0μM槲皮素組對(duì)照組遷移距離的比率分別為:HOS細(xì)胞(72.28±22.34)%、(61.49±19.61)%、(49.66±9.33)%;MG63細(xì)胞(39.49±5.9)%、(31.15±12.27)%、(20.34±4.25)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。處理24h后,25μM槲皮素組、50μM槲皮素組、100μM槲皮素組與0μM槲皮素組對(duì)照組遷移距離的比率分別為:HOS細(xì)胞(59.40%±20.13)%、(42.78±11.34)%、(46.06±11.5)%;MG63細(xì)胞(36.39±3.09)%、(28.43±0.7)%、(21.26±7.47)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。我們研究證實(shí),槲皮素能夠抑制人骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞遷移,呈劑量時(shí)間依賴(lài)。6、槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞相關(guān)基因mRNA和蛋白的影響:不同濃度槲皮素(0、25、50、100μM)刺激人骨肉瘤細(xì)胞株HOS 24 h,提取總RNA反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行熒光定量PCR。結(jié)果顯示,隨著槲皮素濃度增加,HIF-1α(0.65±0.05,0.08±0.02,0.04±0.01);VEGF(0.25±0.09,0.07±0.01,0.01±0.01);MMP2(0.48±0.06,0.15±0.05,0.14±0.07);MMP9(0.28±0.08,0.12±0.02,0.08±0.02)的mRNA水平呈現(xiàn)逐漸降低的現(xiàn)象,與0μM槲皮素對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。蛋白免疫印跡結(jié)果所示,0、25、50、100μM槲皮素處理后HIF-1α的灰度值分別為:(0.57±0.08,0.45±0.07,0.42±0.08,0.42±0.01);VEGF的灰度值分別為(0.51±0.04,0.48±0.09,0.37±0.10,0.25±0.03);MMP2的灰度值分別為(0.59±0.01,0.54±0.13,0.46±0.07,0.34±0.01);MMP9的灰度值分別為(1.07±0.06,0.89±0.19,0.75±0.07,0.60±0.16)。隨著槲皮素濃度增加,HIF-1α、VEGF、MMP 2、MMP 9的蛋白水平呈現(xiàn)逐漸降低的現(xiàn)象,與0μM槲皮素對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。槲皮素抑制人骨肉瘤細(xì)胞的HIF-1α、VEGF、MMP 2和MMP 9的mRNA和蛋白表達(dá),呈劑量依賴(lài)。7、裸鼠成瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn):為明確槲皮素對(duì)骨肉瘤的影響,體內(nèi)注射穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HOS細(xì)胞入裸鼠尾靜脈。術(shù)后三天,動(dòng)物予槲皮素、生理鹽水或順鉑治療等效體積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明槲皮素能劑量依賴(lài)性顯著抑制肺部腫瘤生長(zhǎng)。與生理鹽水治療的對(duì)照鼠對(duì)比,25、50和100 mg/kg槲皮素處理鼠的肺腫瘤熒光表達(dá)分別為0.89±0.10,0.71±0.06,0.63±0.05,順鉑治療組鼠腫瘤為0.63±0.04。根據(jù)公式1計(jì)算抑瘤率,與生理鹽水處理組對(duì)比,100 mg/kg槲皮素槲皮素抑制腫瘤37.41%、順鉑治療抑制腫瘤36.46%。結(jié)果表明,槲皮素能抑制骨肉瘤體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移�！緦�(shí)驗(yàn)結(jié)論】1、25-100μM槲皮素不影響人骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞活性,不影響人骨肉瘤細(xì)胞的凋亡和周期改變。2、槲皮素抑制人骨肉瘤細(xì)胞的細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移,呈劑量依賴(lài)。3、槲皮素抑制人骨肉瘤細(xì)胞的HIF-1α、VEGF、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表達(dá),呈劑量依賴(lài)。4、裸鼠成瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步證實(shí)了槲皮素可抑制裸鼠肺內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤生成。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R285
【部分圖文】：

結(jié) 果結(jié) 果1. 槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞活力的影響以濃度為 0、25、50、100μM 的槲皮素作 用于人骨肉瘤細(xì)胞株 HOS 和人骨肉瘤細(xì)胞株 MG63 12h 和 24h，CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞活性。圖 1 顯示，不同濃度的槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞 HOS 和 MG63 活性無(wú)明顯影響，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù) CCK-8 測(cè)定槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞活力影響的結(jié)果，選取 0、25、50、100μM 可作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)刺激濃度。

圖 2 槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞周期的影響A：不同濃度槲皮素刺激 HOS 細(xì)胞 24h 周期細(xì)胞各期比例圖； B：不同濃度槲皮素刺激MG63 細(xì)胞 24h 周期細(xì)胞各期比例圖； C：不同濃度槲皮素刺激 HOS 細(xì)胞 24h 周期細(xì)胞各期比例統(tǒng)計(jì)圖； D：不同濃度槲皮素刺激 MG63 細(xì)胞 24h 周期細(xì)胞各期比例統(tǒng)計(jì)圖。數(shù)據(jù)以 mean ± SD 表示。表 1 槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞 HOS 和 MG63 細(xì)胞周期的影響HOS MG63G0/G1(%) S(%) G2/M(%) G0/G1(%) S(%) G2/M(%)0μM 31.31±0.83 30.16±0.73 27.88±0.73 19.88±2.47 56.02±1.51 14.80±1.1025μM 31.23±0.23 27.68±1.78 26.71±3.35 22.81±2.19 53.54±2.69 13.34±0.3550μM 31.96±2.06 27.23±1.78 29.24±2.13 22.56±1.19 55.04±1.10 13.14±1.26100μM 30.40±2.36 27.97±2.88 28.27±2.19 19.49±2.21 55.98±1.36 15.42±1.19

3. 槲皮素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響不同濃度槲皮素（0、25、50、100μM）刺激人骨肉瘤細(xì)胞株 HOS 和 MG6324h，應(yīng)用 Alexa Fluor 488 annexin V/Dead cell 凋亡試劑盒測(cè)定凋亡情況。槲皮素刺激人骨肉瘤細(xì)胞 HOS，凋亡細(xì)胞占百分比為 0μM 槲皮素對(duì)照組（1.47±0.18）%、25μM 槲皮素對(duì)照組（1.50±0.18）%、50μM 槲皮素對(duì)照組刺激組（1.50±0.26）%，100μM 槲皮素對(duì)照組刺激組（1.51±0.05）%（圖 3A）。與 0μM 槲皮素對(duì)照組比較，槲皮素刺激下人骨肉瘤細(xì)胞 HOS 未發(fā)生明顯的早期或者中晚期凋亡（圖 3C）。槲皮素刺激人骨肉瘤細(xì)胞 MG63，凋亡細(xì)胞占百分比為 0μM槲皮素對(duì)照組（4.32±1.56）%、25μM 槲皮素對(duì)照組（4.56±0.33）%、50μM槲皮素對(duì)照組刺激組（4.66±0.45）%、100μM 槲皮素對(duì)照組刺激組（4.62±1.71）%（圖 3B）。與 0μM 槲皮素對(duì)照組比較，槲皮素刺激下人骨肉瘤細(xì)胞 MG63 未發(fā)生明顯的早期或者中晚期凋亡（圖 3D）。
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1 蘭海峰;槲皮素抑制人骨肉瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣州醫(yī)科大學(xué);2018年

2 李存孝;CD147在人骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其反義RNA對(duì)骨肉瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 鄭強(qiáng);白細(xì)胞介素-2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在人骨肉瘤細(xì)胞系內(nèi)的表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

4 高志學(xué);人骨肉瘤細(xì)胞多藥耐藥機(jī)制及其逆轉(zhuǎn)劑的研究[D];吉林大學(xué);2007年

5 劉艷武;紫檀芪通過(guò)抑制JAK2/STAT3信號(hào)通路抗人骨肉瘤細(xì)胞活性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 張海英;SATB1在維持人骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用及其分子機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2013年

7 樊強(qiáng);蜂毒素抑制人骨肉瘤細(xì)胞MG63活力及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2014年

8 陸鵬;淫羊藿素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2012年

9 李丁;姜黃素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞放射增敏作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2012年

10 仲苓芝;H0-1在維持人骨肉瘤細(xì)胞對(duì)三氧化二砷抗性中的作用及分子機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 龐運(yùn)國(guó);基于RNA干擾和RNA-seq技術(shù)探討GRM4基因在人骨肉瘤細(xì)胞中的作用機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 楊軒;人骨肉瘤細(xì)胞U2OS靶向肽的篩選、鑒定及初步應(yīng)用研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2017年

3 吳進(jìn);人骨肉瘤細(xì)胞與電壓門(mén)控性鉀離子通道關(guān)系的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 周峰;二甲雙胍聯(lián)合阿霉素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2014年

5 鄒正渝;重組hS100A6的原核表達(dá)及其對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞143B的生物學(xué)作用和機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

6 姚娟;NOV的差異表達(dá)對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞系增殖、凋亡和遷移的影響及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

7 孟子鈞;吳茱萸堿抑制人骨肉瘤細(xì)胞143B增殖與PI3K/Akt信號(hào)關(guān)系的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 歐陽(yáng)正曉;他莫昔芬聯(lián)合多柔比星對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2013年

9 王賢;欖香烯乳對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞系（MG-63）多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)及其相關(guān)機(jī)制的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2008年

10 迮仁浩;人骨肉瘤細(xì)胞中S100A6蛋白的表達(dá)及其意義[D];華中科技大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2873180