目的:本研究旨在探索芒果苷(mangiferin)于體外對(duì)BCBL-1細(xì)胞株增殖、凋亡、分泌IL-4和胞內(nèi)KSHV的影響,以及可能的作用機(jī)制。方法:1.采用CCK-8細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)不同芒果苷濃度對(duì)體外培養(yǎng)的BCBL-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,并計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50);2.用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)來(lái)檢測(cè)800μmol/L的芒果苷作用不同時(shí)間段(12h,24h,48h)對(duì)BCBL-1細(xì)胞株分泌IL-4的影響;3.用Annexin V/PI-FITC標(biāo)記400,800和1600μmol/L濃度的芒果苷作用24h后的BCBL-1細(xì)胞,并用流式細(xì)胞儀分析,計(jì)算Annexin V/PI-細(xì)胞比率,了解BCBL-1細(xì)胞凋亡情況;4.將400、800和1600μmol/L芒果苷作用于BCBL-1細(xì)胞24h、48h、72h后,利用熒光定量PCR法檢測(cè)病毒復(fù)制周期相關(guān)的基因(LANA、ORF50和PAN)表達(dá)量,觀察芒果苷對(duì)KSHV復(fù)制周期的影響;5.800μmol/L芒果苷干預(yù)BCBL-1細(xì)胞12h后,利用RT2 Profiler PCR ArraysHuman Apoptosis基因芯片篩選與細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路中異常表達(dá)的基因。結(jié)果:1.芒果苷具有抑制BCBL-1細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,具有劑量依賴性(P0.05),計(jì)算出芒果苷對(duì)BCBL-1細(xì)胞的IC50分別為979.89μmol/L(24h)、739.19μmol/L(48h);2.芒果苷濃度在800μmol/L時(shí)IL-4分泌水平有上升的趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);3.Annexin V/PI-FITC標(biāo)記的細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)證明:與對(duì)照組相比,芒果苷組中的晚期死亡細(xì)胞(Annexin V+/PIFITC+)數(shù)量增加(P0.05),早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/PI-FITC-)的數(shù)量變化并沒(méi)有差異(P0.05);4.芒果苷處理細(xì)胞后病毒潛伏期基因LANA表達(dá)量變化不明顯,病毒裂解期基因ORF50和PAN表達(dá)量有上升的趨勢(shì)(P0.01);5.RT2 Profiler PCR Arrays基因芯片篩選出:細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因CASP5(-2.32,P=0.049)、FASLG(-2.69,P=0.040)表達(dá)量下調(diào)。結(jié)論:1.芒果苷對(duì)BCBL-1細(xì)胞具有抑制生長(zhǎng)增殖的作用,其機(jī)制可能與芒果苷促進(jìn)IL-4因子分泌有關(guān);2.芒果苷可以誘導(dǎo)BCBL-1細(xì)胞死亡壞死,但芒果苷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用較弱,其機(jī)制可能是病毒干擾作用使細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因CASP5和FASLG轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)有關(guān);3.芒果苷可以促進(jìn)BCBL-1細(xì)胞內(nèi)KSHV病毒部分進(jìn)入裂解期。
【學(xué)位單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

- 23 -圖 2-2 芒果苷處理 24h 后 Annexin V+/PI-FITC–和 Annexin V+/PI-FITC+細(xì)胞百分比Fig 2-2 The percentage of Annexin V+/PI-FITC–and Annexin V+/PI-FITC+cells treated withmangiferin after 24h

- 24 -圖 2-3 芒果苷處理 48h后 Annexin V+/PI-FITC–和 Annexin V+/PI-FITC+細(xì)胞百分比Fig 2-3 The percentage of Annexin V+/PI-FITC–and Annexin V+/PI-FITC+cells treated withmangiferin after 48h

- 26 -圖 2-4 LANA（內(nèi)參為 human cyclophilin）的標(biāo)準(zhǔn)曲線、溶解曲線和擴(kuò)增曲線Fig 2-4 The standard curve and melting curve and amplification curve for the gene of LANA
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2872750