中藥成分復(fù)雜,將有效成分富集并測定其含量是研究開發(fā)中藥的重要環(huán)節(jié)。qNMR方法無需被測物的高純標(biāo)準(zhǔn)品,只需常用的幾種內(nèi)標(biāo)和氘代試劑就可完成定量分析,但存在檢測靈敏度和干擾問題。SPE作為一種方便有效的樣品前處理技術(shù),具有濃縮(富集)和樣品凈化功能,操作簡便、回收率高。本文將SPE與qNMR結(jié)合,利用SPE的富集作用顯著拓展了 qNMR用于低含量復(fù)雜樣品的定量分析范圍。本文以板藍(lán)根飲片、乳增寧膠囊和雙黃連膠囊為樣品,分別建立了 SPE-qNMR測定三種中藥中有效成分含量的方法,對所建立的方法進(jìn)行了驗(yàn)證,并在無需待測物高純標(biāo)準(zhǔn)品的情況下分別測定了板藍(lán)根飲片中表告依春、乳增寧膠囊中淫羊藿苷和雙黃連膠囊中綠原酸的含量。1.建立了 SPE-qNMR測定板藍(lán)根飲片中的有效成分表告依春含量的方法。樣品用水兩次60℃超聲提取,以Poly-Sery MCX(混合型強(qiáng)陽離子交換)型SPE柱對提取液富集濃縮后,用qNMR測定表告依春的含量�？疾炝顺晻r間、SPE樣品前處理?xiàng)l件的選擇以及定量核磁共振技術(shù)的實(shí)驗(yàn)條件對定量結(jié)果的影響。選擇氘代二甲基亞砜為氘代溶劑,2,3,5-三碘苯甲酸作為內(nèi)標(biāo),并且用基準(zhǔn)試劑鄰苯二甲酸氫鉀對其進(jìn)行標(biāo)定。選擇脈沖寬度P1=14.1μs,延遲時間d1=5s,掃描次數(shù)NS=256為qNMR定量表告依春的實(shí)驗(yàn)條件。表告依春的定量峰為δ5.365～5.399 (H-7b, d,1H)。結(jié)果顯示,所建方法的日內(nèi)精密度的RSD為0.47%,日間精密度RSD為0.80%,表告依春與三碘苯甲酸峰面積比與質(zhì)量比的零截距標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)為0.9991,且斜率與理論值相符。該法測定表告依春的LOD為0.05 mg/g; LOQ為0.19mg/g。包括樣品預(yù)處理過程的表告依春的回收率為97.4%～101.7%。實(shí)際測定板藍(lán)根飲片樣品中的表告依春的含量為0.19 ～1.26 mg/g。2.建立了 SPE-qNMR測定乳增寧膠囊中有效成分淫羊藿苷含量的方法。樣品用10%乙醇室溫超聲提取,以HC-C18型SPE柱對提取液進(jìn)行濃縮除雜后,用qNMR測定淫羊藿苷的含量�？疾炝顺晻r間、SPE樣品前處理?xiàng)l件以及定量核磁共振實(shí)驗(yàn)條件對定量結(jié)果的影響。選擇氘代二甲基亞砜為氘代溶劑,2,3,5-三碘苯甲酸作為內(nèi)標(biāo),并且用基準(zhǔn)試劑鄰苯二甲酸氫鉀對其進(jìn)行標(biāo)定。選擇脈沖寬度P1=14.1μs,延遲時間d1=1s,掃描次數(shù)NS=256為qNMR定量淫羊藿苷的實(shí)驗(yàn)條件。淫羊藿苷的定量峰為δ7.890～7.909(2',6'-H,d,2H)。結(jié)果顯示,所建方法的日內(nèi)精密度的RSD為0.43%,日間精密度RSD為0.75%,淫羊藿苷與三碘苯甲酸峰面積比與質(zhì)量比的零截距標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)為0.9999,且斜率與理論值相符。該法測定淫羊藿苷的LOD為0.122mg/g; LOQ為0.368mg/g。包括樣品預(yù)處理過程的淫羊藿苷的回收率為99.9%～102.9%。實(shí)際測定乳增寧膠囊中的淫羊藿苷的含量為3.947～4.392mg/g。3.建立了 SPE-qNMR測定雙黃連膠囊中有效成分綠原酸含量的方法。樣品用純水室溫超聲提取,以HC-C18型SPE柱對提取液進(jìn)行濃縮除雜后,用qNMR測定綠原酸的含量。考察了超聲時間、SPE樣品前處理?xiàng)l件以及定量核磁共振實(shí)驗(yàn)條件對定量結(jié)果的影響。選擇氘代二甲基亞砜為氘代溶劑,對苯二甲醛作為內(nèi)標(biāo),并且用基準(zhǔn)試劑鄰苯二甲酸氫鉀對其進(jìn)行標(biāo)定。選擇脈沖寬度P1=14.1μs,延遲時間d1=1s,掃描次數(shù)NS=512為qNMR定量綠原酸的實(shí)驗(yàn)條件。綠原酸的定量峰為δ6.149-6.182(H-8',d,1H)。結(jié)果顯示,所建方法的日內(nèi)精密度的RSD為1.2%,日間精密度RSD為1.5 %,綠原酸與對苯二甲醛峰面積比與質(zhì)量比的零截距標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)為0.9999,且斜率與理論值相符。該法測定綠原酸的LOD為0.0017mg/g; LOQ為0.0791mg/g。包括樣品經(jīng)SPE預(yù)處理過程的綠原酸的回收率為101.3%～104.4%。實(shí)際測定雙黃連膠囊中的綠原酸的含量為9.68～10.35 mg/g。
【學(xué)位單位】：上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R286.0;O657.2
【部分圖文】：

超聲時間?ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ?ｔｉｍｅ（ｍｉｎ）??圖２．１超聲時間與響應(yīng)值的關(guān)系??Ｆｉｇ．２．１?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ?ｔｉｍｅ?ａｎｄ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ?ｖａｌｕｅ??，表告依春直接ＨＰＬＣ測定的峰面積較高，繼續(xù)增加時間響間為４５ｍｉｎ。??，本實(shí)驗(yàn)最終選擇的提取方法為：超聲提��；提取２次第一

？／Ａｘ５６??ｓ，??圖２．２表告依春結(jié)構(gòu)式??Ｆｉｇ．?２．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｆｏｒｍｕｌａ?ｏｆ?Ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ??Ａ」?ｊＬｉＬＩ?．?ｌ??ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??１０?５?０??５?ｌ?ｌ?ＪＵｌ?Ｌ??ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?｜?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?｜??１０?５?０??＇?１１?ｉ?ｉ?ｉｌｌ??ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??１０?５?０??Ｓ（ｐｐｍ）??圖２．３表告依春和內(nèi)標(biāo)２３＾５？三碘苯甲酸的ＮＭＲ譜圖（Ａ：表告依春；８：２３，５＊三碘苯甲酸；Ｃ：?Ａ和Ｂ??的混合物）??Ｆｉｇ．２．３?ＮＭＲ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ?ａｎｄ?ｉｎｔｅｒｎａｌ?ｓｔａｎｄａｒｄ?２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｉｉｚｏａｔｅ?（Ａ：?Ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ；?Ｂ：??２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅ；?Ｃ：?ｔｈｅ?ｍｉｘｔｕｒｅ?ｏｆ?Ａ?ａｎｄ?Ｂ）??２３．４．２定量峰確認(rèn)??取樣品１，用２．２．２節(jié)的方法得到待測樣品，測得核磁共振圖譜（圖２．４Ａ），與表告依春??和內(nèi)標(biāo)混合物圖譜（圖２．４Ｄ）比較。此時，內(nèi)標(biāo)峰的出峰位置出現(xiàn)了明顯的變化，由原來的??５７．７４８？７．７４６?（ｄ，ｌＨ）和５８．３３３？８．３３５?（ｄ，ｌＨ）移至５７．３１３？７．３１４?（（ＵＨ）和５７．９９４?（ｄ，ｌＨ）�？紤]到??洗脫液為堿性，我們在樣品中加入氘代硫酸后再測試ＮＭＲ譜圖進(jìn)行比較，結(jié)果加入少量??氖代硫酸即可以恢復(fù)到原來的化學(xué)位移

?４??５（ｐｐｍ）??圖２．４板藍(lán)根提取樣品與混合對照品的ＮＭＲ譜圖（Ａ：樣品；Ｂ：?Ａ的放大圖；Ｃ：?Ａ中加入內(nèi)標(biāo)；Ｄ：??表告依春與內(nèi)標(biāo)物混合物）。??Ｆｉｇ．?２．４?ＮＭＲ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?Ｒａｄｉｘ?Ｉｓａｔｉｄｉｓ?ｓａｍｐｌｅ?ａｎｄ?ｍｉｘｅｄ?ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ?（Ａ：?Ｒａｄｉｘ?Ｉｓａｔｉｄｉｓ?ｓａｍｐｌｅ；?Ｂ：??Ｔｈｅ?ｅｎｌａｒｇｅ?ｐａｒｔ?ｏｆ?Ｆｉｇ．?Ａ；?Ｃ：?ｍｉｘｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｒａｄｉｘ?ｌｓａｔｉｄｉｓ?ｓａｍｐｌｅ?ａｎｄ?２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅ；?Ｄ：?ｍｉｘｔｕｒｅ?ｏｆ??ｅｐｉｇｏｉｔｒｉｎ?ａｎｄ?２，３，５－ｔｒｉｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅ）??２．３．５核磁實(shí)驗(yàn)參數(shù)的影響??分別考察了脈沖寬度ＰＩ、掃描次數(shù)ＮＳ和延遲時間ｄｌ對積分面積的影響。當(dāng)ＰＩ彡??１４．１叫ｄｌ＝５ｓ，?ＮＳ彡２５６時，信噪比可以達(dá)到定量要求（Ｓ／Ｎ彡１５０），且Ａｒ與Ａｓ趨于穩(wěn)定。??故選定核磁參數(shù)?Ｐｌ＝１４．１０ｊｘｓ，?ｄｌ＝５ｓ，?ＮＳ＝２５６。??２．３．６對２，３，５－三碘苯甲酸和表告依春純品的含量校正??在２．２．２的實(shí)驗(yàn)條件下，以ＤＭＳＯ為溶劑，基準(zhǔn)物質(zhì)鄰苯二甲酸氫鉀的ＮＭＲ峰Ｈ４，??５?（５７．４９３３？７．５１１，ｄｄ，２Ｈ）與三碘苯甲酸ＮＭＲ定量峰互不干擾。所以選擇鄰苯二甲酸氫鉀作??為校準(zhǔn)２
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2872652