皮膚是人體與環(huán)境接觸并保護人體免受外界逆境因素傷害的第一道防線。日光中紫外線輻射能引起多種皮膚損傷,其中中波紫外線(UVB)能量較高,能誘發(fā)色素沉著、DNA損傷甚至皮膚癌,顯得尤為關(guān)鍵。表沒食子酸兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是茶葉中的一種生物活性物質(zhì),具有抗菌、抗病毒、抗輻射及抗腫瘤等功效。目前人們已對EGCG抗UV的作用展開了廣泛研究,然而其中的許多細胞及分子生物學(xué)機制尚有待深入探索,涉及多少與EGCG發(fā)揮作用相關(guān)的信號通路亦未得知。本論文擬通過建立UVB誘導(dǎo)的裸鼠光損傷模型以及UVB誘導(dǎo)的L929細胞損傷模型,探究EGCG抗UVB輻射損傷的作用及其可能機制。獲得如下主要研究結(jié)果:1.UVB輻射使引起裸鼠背部皮膚老化、產(chǎn)生紅斑甚至表皮脫落;用0-50mg/mL的EGCG預(yù)處理對UVB輻射引起裸鼠皮膚損傷的保護作用呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。2.EGCG預(yù)處理濃度達到10mg/mL以上時,對抑制UVB輻射誘導(dǎo)的裸鼠表皮角質(zhì)層增厚產(chǎn)生顯著效果。3.UVB照射導(dǎo)致裸鼠細胞線粒體損傷、變性,高濃度EGCG(50mg/mL)預(yù)處理對線粒體的保護作用明顯,同時可抑制UVB誘導(dǎo)的裸鼠皮膚黑素體數(shù)量增加。4.體外小鼠成纖維細胞L929實驗表明,UVB照射能誘發(fā)磷酸化P38MAPK表達上調(diào),顯著抑制細胞增殖;EGCG溶液處理可以抑制磷酸化P38MAPK表達上調(diào),減輕UVB對細胞增殖的抑制作用。5.熒光定量PCR檢測表明,UVB照射引起細胞凋亡相關(guān)基因Caspase-3、P53、C-jun、C-fos、NF-κB、Bax等表達上調(diào);EGCG溶液處理可抑制這些細胞凋亡相關(guān)基因表達上調(diào)。表明EGCG參與細胞凋亡相關(guān)基因表達調(diào)控,減輕UVB輻射對皮膚細胞的傷害。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

輻射劑量時，細胞形態(tài)膨脹變圓，少數(shù)梭形，細胞數(shù)量呈減少趨勢（圖３．?１，?ｂ）；??４０ｍＪ／ｃｍ２輻射劑量時，細胞形態(tài)進一步異常，出現(xiàn)許多不規(guī)則形狀，且體積明顯??變小，細胞呈現(xiàn)聚集趨勢（圖３．１，ｃ）；當輻射劑量達到５０ｍＪ／ｃｍ２時，細胞形態(tài)??縮小變圓、普遍發(fā)生核濃縮（圖３．２，?ｄ）；輻射劑量為６０ｍＪ／ｃｍ２時，細胞數(shù)量顯??著減少，細胞體積進一步變小，核質(zhì)濃縮，細胞大量死亡（圖３．２，?ｅ）。??ＭＴＴ?法檢測細胞增殖率顯不，在?３０ｍＪ／ｃｍ２、４０ｍＪ／？ｎ２、５０ｍＪ／ｃｍ２?及?６０ｍＪ／ｃｍ２??的情況下，細胞增殖率相對空白對照均顯著降低（尸＜〇．?０５）（圖３．?３）。表明ＵＶＢ輻??射對細胞生長具有抑制作用，且由圖可得出抑制作用隨ＵＶＢ輻射劑量的提升而增??強。計箅結(jié)果顯示，當輻射劑量為４０ｒａＪ／ｃｍ２時，細胞增殖率為４８．?０１％，已超過半?，??數(shù)

３．?３．?２?ＥＧＣＧ對Ｌ９２９細胞形態(tài)及增殖活性的影響??以ＥＧＣＧ處理Ｌ９２９細胞，在低濃度情況下，細胞數(shù)量未發(fā)生明顯變化，細胞??形態(tài)呈現(xiàn)變圓趨勢（圖３．３，?ｂ）。隨著ＥＧＣＧ濃度的提升，細胞數(shù)量開始減少。在??１５０?ｕＭ?ＥＧＣＧ條件下，細胞數(shù)量相比對照組明顯減少，細胞形態(tài)呈橢圓形，仍有??少數(shù)呈梭形；當ＥＧＣＧ濃度達到２００?ｕＭ時，細胞體積進一步縮小，細胞核呈增大??趨勢，細胞形態(tài)不規(guī)則，細胞趨于死亡（圖３．３，?ｇ）；在高濃度條件下，ＥＧＣＧ產(chǎn)??生較強細胞毒性，使細胞數(shù)量顯著降低，細胞體積顯著變小，細胞大量死亡（圖??３．?３，?ｈ，ｉ）。??檢測各濃度ＥＧＣＧ處理下細胞相對增殖率，發(fā)現(xiàn)ＥＧＣＧ在一定范圍內(nèi)對Ｌ９２９??細胞增殖表現(xiàn)出抑制作用。當ＥＧＣＧ濃度為２５?ｕ?Ｍ時，細胞增殖率是對照的９７．?２６％，??差異不顯著；當ＥＧＣＧ濃度為１００?ｙＭ及１５０ｕＭ時

?７０??ＵＶＢ輻射劑量（ｍＪ／ｃｍ２）??圖３．?２不同劑量ＵＶＢ對Ｌ９２９細胞增殖活性的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｏｓｅｓ?ｏｆ?ＵＶＢ?ｏｎ?Ｌ９２９?ｃｅｌｌ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ??３．?３．?２?ＥＧＣＧ對Ｌ９２９細胞形態(tài)及增殖活性的影響??以ＥＧＣＧ處理Ｌ９２９細胞，在低濃度情況下，細胞數(shù)量未發(fā)生明顯變化，細胞??形態(tài)呈現(xiàn)變圓趨勢（圖３．３，?ｂ）。隨著ＥＧＣＧ濃度的提升，細胞數(shù)量開始減少。在??１５０?ｕＭ?ＥＧＣＧ條件下，細胞數(shù)量相比對照組明顯減少，細胞形態(tài)呈橢圓形，仍有??少數(shù)呈梭形；當ＥＧＣＧ濃度達到２００?ｕＭ時，細胞體積進一步縮小，細胞核呈增大??趨勢，細胞形態(tài)不規(guī)則，細胞趨于死亡（圖３．３，?ｇ）；在高濃度條件下，ＥＧＣＧ產(chǎn)??生較強細胞毒性，使細胞數(shù)量顯著降低，細胞體積顯著變小，細胞大量死亡（圖??３．?３，?ｈ，ｉ）。??檢測各濃度ＥＧＣＧ處理下細胞相對增殖率
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本文編號：2869800