皮膚是人體與環(huán)境接觸并保護(hù)人體免受外界逆境因素傷害的第一道防線(xiàn)。日光中紫外線(xiàn)輻射能引起多種皮膚損傷,其中中波紫外線(xiàn)(UVB)能量較高,能誘發(fā)色素沉著、DNA損傷甚至皮膚癌,顯得尤為關(guān)鍵。表沒(méi)食子酸兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)是茶葉中的一種生物活性物質(zhì),具有抗菌、抗病毒、抗輻射及抗腫瘤等功效。目前人們已對(duì)EGCG抗UV的作用展開(kāi)了廣泛研究,然而其中的許多細(xì)胞及分子生物學(xué)機(jī)制尚有待深入探索,涉及多少與EGCG發(fā)揮作用相關(guān)的信號(hào)通路亦未得知。本論文擬通過(guò)建立UVB誘導(dǎo)的裸鼠光損傷模型以及UVB誘導(dǎo)的L929細(xì)胞損傷模型,探究EGCG抗UVB輻射損傷的作用及其可能機(jī)制。獲得如下主要研究結(jié)果:1.UVB輻射使引起裸鼠背部皮膚老化、產(chǎn)生紅斑甚至表皮脫落;用0-50mg/mL的EGCG預(yù)處理對(duì)UVB輻射引起裸鼠皮膚損傷的保護(hù)作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)關(guān)系。2.EGCG預(yù)處理濃度達(dá)到10mg/mL以上時(shí),對(duì)抑制UVB輻射誘導(dǎo)的裸鼠表皮角質(zhì)層增厚產(chǎn)生顯著效果。3.UVB照射導(dǎo)致裸鼠細(xì)胞線(xiàn)粒體損傷、變性,高濃度EGCG(50mg/mL)預(yù)處理對(duì)線(xiàn)粒體的保護(hù)作用明顯,同時(shí)可抑制UVB誘導(dǎo)的裸鼠皮膚黑素體數(shù)量增加。4.體外小鼠成纖維細(xì)胞L929實(shí)驗(yàn)表明,UVB照射能誘發(fā)磷酸化P38MAPK表達(dá)上調(diào),顯著抑制細(xì)胞增殖;EGCG溶液處理可以抑制磷酸化P38MAPK表達(dá)上調(diào),減輕UVB對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。5.熒光定量PCR檢測(cè)表明,UVB照射引起細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Caspase-3、P53、C-jun、C-fos、NF-κB、Bax等表達(dá)上調(diào);EGCG溶液處理可抑制這些細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)。表明EGCG參與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控,減輕UVB輻射對(duì)皮膚細(xì)胞的傷害。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：R285
【部分圖文】：

輻射劑量時(shí)，細(xì)胞形態(tài)膨脹變圓，少數(shù)梭形，細(xì)胞數(shù)量呈減少趨勢(shì)（圖３．?１，?ｂ）；??４０ｍＪ／ｃｍ２輻射劑量時(shí)，細(xì)胞形態(tài)進(jìn)一步異常，出現(xiàn)許多不規(guī)則形狀，且體積明顯??變小，細(xì)胞呈現(xiàn)聚集趨勢(shì)（圖３．１，ｃ）；當(dāng)輻射劑量達(dá)到５０ｍＪ／ｃｍ２時(shí)，細(xì)胞形態(tài)??縮小變圓、普遍發(fā)生核濃縮（圖３．２，?ｄ）；輻射劑量為６０ｍＪ／ｃｍ２時(shí)，細(xì)胞數(shù)量顯??著減少，細(xì)胞體積進(jìn)一步變小，核質(zhì)濃縮，細(xì)胞大量死亡（圖３．２，?ｅ）。??ＭＴＴ?法檢測(cè)細(xì)胞增殖率顯不，在?３０ｍＪ／ｃｍ２、４０ｍＪ／？ｎ２、５０ｍＪ／ｃｍ２?及?６０ｍＪ／ｃｍ２??的情況下，細(xì)胞增殖率相對(duì)空白對(duì)照均顯著降低（尸＜〇．?０５）（圖３．?３）。表明ＵＶＢ輻??射對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，且由圖可得出抑制作用隨ＵＶＢ輻射劑量的提升而增??強(qiáng)。計(jì)箅結(jié)果顯示，當(dāng)輻射劑量為４０ｒａＪ／ｃｍ２時(shí)，細(xì)胞增殖率為４８．?０１％，已超過(guò)半?，??數(shù)

３．?３．?２?ＥＧＣＧ對(duì)Ｌ９２９細(xì)胞形態(tài)及增殖活性的影響??以ＥＧＣＧ處理Ｌ９２９細(xì)胞，在低濃度情況下，細(xì)胞數(shù)量未發(fā)生明顯變化，細(xì)胞??形態(tài)呈現(xiàn)變圓趨勢(shì)（圖３．３，?ｂ）。隨著ＥＧＣＧ濃度的提升，細(xì)胞數(shù)量開(kāi)始減少。在??１５０?ｕＭ?ＥＧＣＧ條件下，細(xì)胞數(shù)量相比對(duì)照組明顯減少，細(xì)胞形態(tài)呈橢圓形，仍有??少數(shù)呈梭形；當(dāng)ＥＧＣＧ濃度達(dá)到２００?ｕＭ時(shí)，細(xì)胞體積進(jìn)一步縮小，細(xì)胞核呈增大??趨勢(shì)，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞趨于死亡（圖３．３，?ｇ）；在高濃度條件下，ＥＧＣＧ產(chǎn)??生較強(qiáng)細(xì)胞毒性，使細(xì)胞數(shù)量顯著降低，細(xì)胞體積顯著變小，細(xì)胞大量死亡（圖??３．?３，?ｈ，ｉ）。??檢測(cè)各濃度ＥＧＣＧ處理下細(xì)胞相對(duì)增殖率，發(fā)現(xiàn)ＥＧＣＧ在一定范圍內(nèi)對(duì)Ｌ９２９??細(xì)胞增殖表現(xiàn)出抑制作用。當(dāng)ＥＧＣＧ濃度為２５?ｕ?Ｍ時(shí)，細(xì)胞增殖率是對(duì)照的９７．?２６％，??差異不顯著；當(dāng)ＥＧＣＧ濃度為１００?ｙＭ及１５０ｕＭ時(shí)

?７０??ＵＶＢ輻射劑量（ｍＪ／ｃｍ２）??圖３．?２不同劑量ＵＶＢ對(duì)Ｌ９２９細(xì)胞增殖活性的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｏｓｅｓ?ｏｆ?ＵＶＢ?ｏｎ?Ｌ９２９?ｃｅｌｌ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ??３．?３．?２?ＥＧＣＧ對(duì)Ｌ９２９細(xì)胞形態(tài)及增殖活性的影響??以ＥＧＣＧ處理Ｌ９２９細(xì)胞，在低濃度情況下，細(xì)胞數(shù)量未發(fā)生明顯變化，細(xì)胞??形態(tài)呈現(xiàn)變圓趨勢(shì)（圖３．３，?ｂ）。隨著ＥＧＣＧ濃度的提升，細(xì)胞數(shù)量開(kāi)始減少。在??１５０?ｕＭ?ＥＧＣＧ條件下，細(xì)胞數(shù)量相比對(duì)照組明顯減少，細(xì)胞形態(tài)呈橢圓形，仍有??少數(shù)呈梭形；當(dāng)ＥＧＣＧ濃度達(dá)到２００?ｕＭ時(shí)，細(xì)胞體積進(jìn)一步縮小，細(xì)胞核呈增大??趨勢(shì)，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞趨于死亡（圖３．３，?ｇ）；在高濃度條件下，ＥＧＣＧ產(chǎn)??生較強(qiáng)細(xì)胞毒性，使細(xì)胞數(shù)量顯著降低，細(xì)胞體積顯著變小，細(xì)胞大量死亡（圖??３．?３，?ｈ，ｉ）。??檢測(cè)各濃度ＥＧＣＧ處理下細(xì)胞相對(duì)增殖率
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本文編號(hào)：2869800