發(fā)布時間：2020-11-04 06:55

　　 本論文對同一季節(jié)不同品種及不同季節(jié)不同品種藍莓葉的活性成分及體外保健功能進行了系統(tǒng)評價,并對藍莓葉活性多酚和多糖的分離純化、結構鑒定及作用機理進行了研究,為藍莓葉資源的開發(fā)利用提供科學依據。主要研究方法及結果如下:(1)選取同一季節(jié)12個品種藍莓葉為材料,以總糖和總酚含量、α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶及胰脂肪酶抑制率、膽酸鹽結合率、DPPH·清除率為指標,對其活性成分含量和體外保健功效進行了系統(tǒng)評價。結果表明,不同品種中'杰兔'葉的總酚含量最高,為(12.85±0.18)%;'明星'葉的總糖含量最高,為(8.90±0.12)%。相同濃度提取液條件下,'澤西'和'錢德勒'葉抑制α-葡萄糖苷酶最好;‘奧尼爾'葉抑制α-淀粉酶最好;'薄霧'葉抑制胰脂肪酶和結合膽酸鈉能力最高;'明星'葉結合�；悄懰徕c能力最好;'杰兔'和'藍雨'葉清除DPPH·能力最好。(2)選取不同季節(jié)4個品種藍莓葉為材料,以原花青素、黃酮和總糖含量、DPPH·、ABTS+·和·OH清除率為指標,對其功效成分含量及活性進行比較。結果表明,從春、夏、秋到冬季,4個品種藍莓葉中原花青素、黃酮和總糖含量皆呈逐步增加的趨勢。其中冬季‘藍雨'葉的原花青素含量最高,為(14.14±0.03)%;冬季'杰兔'葉的黃酮含量最高,為(1.62±0.02)%;冬季'薄霧'葉的總糖含量最高,為(15.42±0.06)%。抗氧化能力測定結果表明,冬季'杰兔'葉多酚粗提液和多糖溶液的DPPH·清除能力顯著性最好,秋季‘杰兔'葉多酚粗提液、秋季'薄霧'葉和夏季'藍雨'葉多糖溶液的ABTS+·的清除能力顯著性最好;秋季'藍雨'葉多酚粗提液和秋季'薄霧'葉粗多糖溶液的.OH的清除能力顯著性最好(P0.05)。另外,在試驗濃度范圍內,抗氧化活性與多糖濃度呈線性依賴關系;抗氧化活性與原花青素及黃酮含量存在較大的正相關性,且與黃酮含量的相關性更大(相關系數(shù)r皆大于0.75)。(3)選取'杰兔'藍莓葉為材料,采用乙醇浸提、有機溶劑分級萃取、硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析等分離方法,并結合活性跟蹤法對藍莓葉多酚進行分離純化。利用核磁共振譜、質譜分析技術鑒定活性成分的結構。結果顯示,正丁醇萃取物(LBF)有最高的清除DPPH·、抑制α-葡糖苷酶和α-淀粉酶活性,其IC5o值分別為(11.08±0.21)μg/mL、(9.60±0.21)μg/mL 和(176.64±5.53)μg/mL。乙酸乙酯萃取物(LEAF)有最高的抑制胰肪脂酶和結合膽酸鹽活性,其IC50值分別為(0.59±0.01)mg/mL、(1.87±0.11)mg/mL(結合膽酸鈉)和(3.23±0.03)mg/mL(結合�；悄懰徕c)。從LEAF和LBF中分別純化得到7個和4個化合物,鑒定為β-谷甾醇(C1)、槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(C3)、槲皮素(C4)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷(C6)、1-O-咖啡�；鼘幩�(C7)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖(C8)和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(C11),其余化合物結構有待進一步鑒定。化合物C1,C3,C7和C8為首次從藍莓葉中分離得到。對上述單體化合物進行活性研究,結果表明,C1、C4和C5有較好的α-葡萄糖苷酶抑制活性;C1、C3、C4、C6、C7和C8表現(xiàn)出了不同強度的胰脂肪酶抑制活性,其中C4能力最強,且強于陽性對照-奧利司他;C1、C4、C5、C7和C8有較好的DPPH·清除能力,其中C4強于陽性對照-VC,C7與VC能力相當。進一步研究C4對胰脂肪酶的抑制類型和其動力學特征,其對酶-底物絡合物的抑制常數(shù)Ki’為0.32 mmol/L,對游離酶的抑制常數(shù)Ki為0.88mmol/L,為混合型可逆抑制。(4)選取'杰兔'藍莓葉為材料,采用Sevage法、膜分離法、DEAE離子交換和Sephadex G-100凝膠柱層析等分離方法,并結合活性跟蹤法對藍莓葉多糖進行提取、分離純化及結構分析。結果顯示,從藍莓葉粗多糖中分離得到BLP1-BLP4四個多糖組分,BLP3顯示出最好的清除DPPH·和α-葡萄糖苷酶抑制能力。BLP3純化后得均一多糖(BLP3-1),測得其重均分子量Mw為54192Da,數(shù)均分子量Mn為4880Da,Z均分子量Mz為1.19×108Da。紅外光譜對BLP3-1的特征官能團進行了分析,PMP衍生化后反相高效液相色譜法測得BLP3-1由半乳糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和巖藻糖五種單糖組成。
【學位單位】：浙江師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

?夏秋冬??季節(jié)??圖３．３不同季節(jié)、不同品種藍莓葉的總糖含量??Ｆｉｇ．３．３?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｏｆ?ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ?ｌｅａｖｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??２．４不同季節(jié)、不同品種藍莓葉的抗氧化活性??２．４．１清除ＤＰＰＨ．能力??２．４．１．１多酚粗提液清除ＤＰＰＨ．能力??不同季節(jié)４種藍莓葉多酚粗提液對ＤＰＰＨ？清除能力測定，結果如圖３．４所示，在??試驗濃度范圍內，隨著濃度的增加，對應的清除率增大，兩者呈明顯的量效關系，說??明藍莓葉多酚多酚粗提液有較好的ＤＰＰＨ？清除能力。??不同季節(jié)４種藍莓葉多酚粗提液對ＤＰＰＨ？清除率的ＩＣ５Ｑ值，如表３．１所示。由表??可知，對同一品種在不同季節(jié)，‘杰兔’、‘薄霧’和布里吉塔’葉的ＩＣ５〇值從春季到冬季??均呈現(xiàn)減小的趨勢，即從春季到冬季對ＤＰＰＨ？清除能力逐漸增強。而‘藍雨’葉在夏季??和秋季的ＩＣ５Ｇ值顯著小于春季和冬季，即在夏季和秋季的能力顯著較強〇Ｐ＜０．０５）。對??同一季節(jié)不同品種，在春季‘杰兔’和‘薄霧’葉的ＩＣ５（）值顯著小于其它２品種，ｇ卩‘杰兔’??和‘薄霧’葉的ＤＰＰＨ？清除能力顯著較強（Ｐ＜０．０５）；在夏季‘藍雨’葉的ＩＣ５Ｇ值顯著小于其??它

濃度／（嗎／ｍＬ）?濃度／（ｆｉｇ／ｍＬ）??圖３．５不同季節(jié)、不同品種藍莓葉粗多糖對ＤＰＰＨ？的清除率??Ｆｉｇ．３．５?ＤＰＰＨ?ｒａｄｉｃａｌ?ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ?ｒａｔｅ?ｏｆ?ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ?ｌｅａｖｅｓ?ｃｒｕｄｅ?ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??表３．２不同季節(jié)、不同品種藍莓葉粗多糖對ＤＰＰＨ？清酴率的ＩＣ５０值??Ｔａｂ．３．２?ＩＣ５０?ｖａｌｕｅｓ?ｏｆ?ＤＰＰＨ?ｒａｄｉｃａｌ?ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ?ｒａｔｅ?ｏｆ?ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ?ｌｅａｖｅｓ?ｃｒｕｄｅ?ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ??ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??ＩＣ５０?（ｆｉｇ／ｍＬ）??季節(jié)???＾?ｍｗ－?ＭＭ?布里吉塔??春?５２．１２±１．０７?２７．４４±３．８?３５．８７±１．０４?３３．５６±１．３１??夏?３６．４６±１．２２?３８．６０±１．３４?３３．８４±１．８２?２４．０６±１．２９??秋?６１．１０±１．２３?２６．４９±１．１３?４９．５３±０．７３?２１．６１±０．１２??冬?２１．０７±０．４１?３０．６６±１．２４?４０．１３±３．５７?２８．７９±０．１１??ＶＣ?７．７２±０．１１??２．４．２清除ＡＢＴＳ＋．能力??２．４．２．１多酚粗提液清除ＡＢＴＳ＋？能力??不同季節(jié)４種藍莓葉多酚粗提液對ＡＢＴＳ＋？清除能力測定結果，如圖３．６所示。??由圖可知

ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??２．４．３．２藍莓葉粗多糖清除．ＯＨ能力??不同季節(jié)４種藍莓葉粗多糖對＿ＯＨ清除能力，結果如圖３．９所示。在試驗濃度范??圍內，隨著粗多糖溶液濃度的增加，其清除‘ＯＨ能力增加，且兩者呈明顯的量效關系，??說明藍莓葉粗多糖溶液有較好的．０Ｈ清除能力。??不同季節(jié)４種藍莓葉粗多糖對＿〇Ｈ清除率的ＩＣ５〇值，如表３．５所示。對同一品種??藍莓葉在不同季節(jié)比較可知，‘杰兔’葉在冬季的ＩＣ５〇值顯著小于其它三季，即冬季的??清除＿〇Ｈ能力最強；‘薄霧’葉在秋季的ＩＣ５〇值顯著小于其它三季，即秋季的清除．ＯＨ??能力最強；‘藍雨’葉在夏季的ＩＣ５Ｇ值顯著小于其它三季，即夏季的清除．ＯＨ能力最強；??‘布里吉塔’葉在秋季的ＩＣ５〇值顯著小于其它三季，即秋季的清除．ＯＨ能力顯著最強??（Ｐ＜０．０５）。對同一季節(jié)種不同品種藍莓葉比較可知，在春季和夏季中，‘藍雨’葉的ＩＣ５０??值都顯著小于其它品種
【參考文獻】

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本文編號：2869785