背景:支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是新生兒科臨床工作中最常見到的發(fā)生于早產(chǎn)兒的慢性肺部疾病。隨著醫(yī)學的進步,新生兒重癥監(jiān)護病房(NICU)的廣泛建立,早產(chǎn)兒和極低出生體重兒存活率明顯提高,從而使得支氣管肺發(fā)育不良成為早產(chǎn)兒最常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病。因肺泡發(fā)育停滯所導致的對早產(chǎn)兒呼吸系統(tǒng)的影響可以從患兒出生持續(xù)到成年,甚至影響其子代的肺泡發(fā)育。支氣管肺發(fā)育不良的病死率較高,經(jīng)治療存活者也合并多種并發(fā)癥,對兒童的生存質量造成嚴重影響。BPD是復雜多因素作用的結果,吸入高濃度氧是BPD發(fā)病的主要危險因素,吸入高濃度氧后機體內會形成大量高活性的氧自由基,而早產(chǎn)兒自身抗氧化系統(tǒng)發(fā)育不完善、產(chǎn)生的抗氧化物質的水平較少,生物活性較低,不能及時清除體內大量高活性氧自由基,從而引起嚴重氧化應激,炎性反應,最終肺纖維化,導致產(chǎn)生BPD。所以抗氧化劑的應用及抗炎治療是BPD治療的熱點之一。當前的觀點認為炎性損傷是BPD發(fā)病機制的關鍵環(huán)節(jié),因此生后應用腎上腺糖皮質激素,是最早廣泛用于預防和治療BPD的,但是糖皮質激素副作用大。迄今為止,BPD的各種治療在不同程度上能改善患者癥狀與預后,但療效均不確定,未能證明使BPD的發(fā)病率有所下降。白藜蘆醇(Resveratrol,Res)被認為是茋類物質單體中最重要的生物活性物質�？寡字委熜Чc激素相當,但無激素的副作用。因此,白藜蘆醇可能成為治療BPD的一種新型藥物。本實驗使用白藜蘆醇干預實驗動物,觀察療效,為BPD防治提供理論依據(jù)。目的:1.建立BPD大鼠動物模型,為白藜蘆醇對BPD大鼠保護機制的研究奠定基礎。2.檢測BPD大鼠模型體內氧化應激反應及炎性損傷情況,證實氧化應激及炎性損傷在BPD肺損傷中的作用。3.給予白藜蘆醇干預BPD大鼠模型,進一步探索白藜蘆醇對BPD大鼠的可能保護機制。方法:1.建立大鼠模型:(1)通過高氧誘導建立BPD大鼠模型;(2)檢測指標:一般情況及體重變化、肺組織大體觀察、肺組織石蠟切片HE染色、Masson染色、肺泡間隔厚度、輻射狀肺泡計數(shù)(radial alveolar counts,RAC)。2.大鼠模型體內實驗:(1)將大鼠分為三組:高氧RES組(Fi02=60%,24只)、高氧對照組(Fi02=60%,24只)及正常對照組(24只);(2)氧化損傷指標測定:檢測肺組織環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、LOX表達、ROS水平、過氧化氫酶、還原型谷胱甘肽(GSH)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)(3)測定大鼠肺組織內Keap-1和Nrf2的mRNA表達;(4)Western Blot測定大鼠肺組織NF-κB、AMPK的蛋白質表達。結果:1.BPD大鼠模型的建立、分組及相關指標的檢測:(1)成功建立BPD大鼠模型;(2)HE染色:第3天在光鏡下觀察對照組及高氧組大鼠的肺組織未見明顯病理改變,兩組均表現(xiàn)為:肺泡結構清楚、肺泡大小均一,無滲出。之后,隨著暴露于高氧的時間延長,與對照組相比,高氧組肺組織形態(tài)逐漸發(fā)生改變:肺泡壁、肺泡間隔變薄,部分肺泡融合、體積增加,肺泡大小不均,在肺泡腔內及肺泡間隔內可見炎性細胞滲出,局部可觀察到肺間質膠原樣物質和成纖維細胞增加,提示肺的發(fā)育受阻。(3)Masson染色:相比于對照組,隨著暴露于高氧時間延長,高氧組大鼠的肺間質出現(xiàn)較多的膠原纖維,出現(xiàn)不同程度的膠原纖維增生。(4)肺泡間隔厚度的對比:結果顯示高氧組肺泡間隔厚度隨新生大鼠日齡的逐漸增加而逐漸增寬;而對照組的肺泡間隔厚度逐漸變薄(P0.01),3d高氧組同對照組比較無明顯差異;7d高氧組肺泡間隔較同期對照組明顯增寬(P0.05);14d時差異更為顯著(P0.01)。(5)輻射狀肺泡計數(shù)(radial alveolar counts,RAC):第 7天、第14天高氧組的RAC較對照組明顯減少,P0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。2.白藜蘆醇對氧化應激的抑制作用:(1)COX-2、LOX在SD大鼠模型肺組織中的表達情況:在3d時高氧對照組肺組織中COX-2、LOX表達開始增加,高氧RES組COX-2、LOX表達雖然較正常對照組增加,但較高氧對照組其表達量逐漸減少,具有統(tǒng)計學意義。(2)大鼠模型肺組織細胞內活性氧檢測:三組間比較,高氧對照組肺組織細胞內活性氧水平顯著高于高氧RES組和正常對照組(P0.01),高氧RES組肺組織細胞內活性氧水平高于正常對照組(P0.05)。(3)檢測各組SD大鼠模型肺組織細胞內GSH、H2O2酶、SOD酶活性并比較,結果顯示:高氧對照組大鼠肺組織細胞內的GSH、H2O2酶、SOD酶等抗氧化應激相關酶活性顯著低于正常對照組及高氧RES組(P0.05);高氧RES組肺組織細胞內GSH、H2O2酶、SOD酶活性等抗氧化應激相關酶活性較高氧對照組大鼠明顯升高,并具有顯著性差異(P0.05)。(4)高氧對照組肺組織細胞內Keap-1 mRNA表達水平明顯高于正常對照組(P0.05),高氧RES組肺組織細胞內Keap-1 mRNA表達水平明顯低于高氧對照組(P0.05);高氧對照組肺組織細胞內Nrf2 mRNA表達水平明顯低于正常對照組(P0.05),高氧RES組肺組織細胞內Nrf2mRNA表達水平明顯升高(P0.05)。(5)高氧對照組肺組織細胞內NF-κ B蛋白表達水平明顯高于正常對照組(P0.05),AMPK蛋白表達水平低于正常對照組(P0.05);高氧RES組肺組織細胞內NF-κB蛋白表達水平明顯低于高氧對照組(P0.05),AMPK蛋白表達水平高于高氧對照組(P0.05)。結論:1.本研究成功建立大鼠BPD動物模型。2.白藜蘆醇能夠顯著改善BPD大鼠肺組織的病理改變,對BPD大鼠具有治療作用。3.白藜蘆醇對BPD治療作用機制可能與白藜蘆醇促進Keap1降解、活化Nrf2發(fā)揮其抗氧化應激及抑制NF-κB,減少炎癥反應有關。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5;R-332
【部分圖文】：

氧暴露７ｄ后高氧組肺組織體積稍大，顏色較對照組蒼白，呈水腫狀態(tài)，并且肺組??織表面出現(xiàn)點狀出血灶；氧暴露１４ｄ后雙肺體積縮小，表面顏色呈蒼白色、略水??腫，但內部組織呈暗紅色，實性改變。見圖１－１？６。??零攀，釋??圖Ｍ對照組３天肺組織大體形態(tài)?圖１－２高氧組３天肺組織大體形態(tài)??１４??

對照組3dHE染色

?見炎性細胞滲出，局部可觀察到肺間質膠原樣物質和成纖維細胞增加，提示肺的??發(fā)育受阻。見圖１－７？圖１－１２。??圓??圖１－７對照組３ｄ?ＨＥ染色??＿??圖１－８高氧組３ｄ?ＨＥ染色??１６??
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本文編號：2869047