發(fā)布時間：2020-11-03 16:04

　　 [目的]觀察炎性環(huán)境下小白菊內(nèi)酯(PAR)對肌腱干細胞成骨分化的作用,探索其對骨肌腱接點損傷修復的作用及其信號通路。[方法]利用膠原酶法結(jié)合低密度接種法分離肌腱干細胞,體外驗證分離細胞的成骨、成脂分化能力;TNF-α構(gòu)建的炎性環(huán)境下,設(shè)置不同濃度組小白菊內(nèi)酯(PAR)刺激人肌腱干細胞,用qRT-PCR檢測炎癥相關(guān)基因以及肌腱、成骨相關(guān)基因的表達,及Western Blot檢測Run x2、β-catenin蛋白的表達以檢測相關(guān)細胞信號通路。[結(jié)果]成功從人肌腱組織分離培養(yǎng)出干細胞。qRT-PCR檢測顯示,100 ng/ml TNF-α可引發(fā)炎癥反應,PAR能抑制炎性相關(guān)基因COX-2、HIF-2α的表達,促進了成骨相關(guān)基因Run x2、OPN的表達,與TNF-α組對比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而肌腱相關(guān)基因Col I、Scleraxis的表達較復雜,與TNF-α組相比,下調(diào)了Col 1α水平,卻上調(diào)Scleraxis水平。Western Blot檢測結(jié)果顯示,與TNF-α組對比,PAR顯著增加蛋白Run x2、β-catenin的表達(P0.05)。肌腱干細胞在體外可被誘導向成骨細胞和脂肪細胞分化。鏡下觀察茜素紅S染色,PAR組均有紅色鈣鹽沉積,相比之下對照組及TNF-α組基本無或出現(xiàn)少量鈣鹽沉積。[結(jié)論]炎性環(huán)境下小白菊內(nèi)酯能控制TNF-α引起的炎性反應并可能通過β-catenin信號通路促進肌腱干細胞的成骨分化。
【部分圖文】：

結(jié)晶紫染色顯示約有1.3%分離出的細胞形成單細胞克隆，克隆內(nèi)細胞形態(tài)較為均一；原代細胞呈梭形，擴增傳代后，肌腱干細胞可呈特征性的旋渦狀生長（圖1）。2.2 qRT-PCR檢測結(jié)果

培養(yǎng)7 d后，成骨相關(guān)基因mRNA的qRT-PCR檢測結(jié)果見圖4，與對照組相比較，TNF-α+PAR 5μmol/L組均能上調(diào)Runx2、OPN的m RNA轉(zhuǎn)錄水平，分別為對照組的（1.43±0.06）、（3.07±0.29）倍（P<0.05),TNF-α+PAR 10μmol/L組也能上調(diào)Runx2、OPN的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，分別為對照組的（1.76±0.13）、（1.91±0.18）倍（P<0.05）。與TNF-α相比，TNF-α+PAR 5μmol/L組上調(diào)的Runx2、OPN的mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而TNF-α+PAR 10μmol/L組僅上調(diào)的Runx2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。圖3 肌腱相關(guān)基因mRNA的qRT-PCR檢測結(jié)果

肌腱相關(guān)基因mRNA的qRT-PCR檢測結(jié)果
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