Ⅱ型糖尿病(T2DM)已成為全球流行性疾病之一,胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)是T2DM發(fā)生和發(fā)展的驅(qū)動性因素,因此尋找通過改善IR治療T2DM的活性物質(zhì)是糖尿病藥物開發(fā)的重要策略和方向。滇結(jié)香花是民族藥用植物,在降血糖、降血脂的輔助治療方面呈現(xiàn)出良好的功效,已有相關研究報道滇結(jié)香花提取物通過抑制α-葡萄糖苷酶活性、激活過氧化酶體增殖受體(PPARβ/γ)等方面治療T2DM。本研究在課題組前期的工作基礎上,結(jié)合滇結(jié)香活性成分的研究報道,提出其可能通過改善IR達到降糖效果從而治療T2DM。因此,本文建立肌細胞IR細胞模型,嘗試從滇結(jié)香花不同溶劑提取物中篩選可以改善IR的組分,并對其體內(nèi)、外降糖機制進行研究,為滇結(jié)香花治療T2DM提供依據(jù)。主要研究工作如下:(1)建立肌細胞IR模型并評價滇結(jié)香花不同溶劑提取物的體外降糖活性。首先比較五種不同分化培養(yǎng)基誘導C2C12成肌細胞分化為肌細胞,通過細胞形態(tài)、肌酸激酶活力和肌分化過程中基因及蛋白表達等指標,確定含2%馬血清的高糖DMEM培養(yǎng)基作用成肌細胞5-7天為最佳誘導分化條件;然后利用0.75 mM棕櫚酸作用肌細胞16 h建立穩(wěn)定的IR細胞模型并評價滇結(jié)香花不同溶劑提取物的降糖活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)滇結(jié)香花正己烷提取物(EGH)具有良好的降糖活性,在濃度為25-200μg/m L范圍內(nèi)可顯著增加C2C12/IR細胞對葡萄糖的消耗和攝取,且具有明顯的劑量依賴性。(2)采用兩種T2DM小鼠模型對EGH進行體內(nèi)降糖活性評價。其一是利用高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量鏈脲佐菌素腹腔注射誘導C57BL/6J小鼠建立化學誘導型T2DM小鼠模型;其二是選用db/db小鼠作為自發(fā)型T2DM小鼠模型。EGH設置三個劑量(40、80和160 mg/kg/day),灌胃治療4周后,小鼠空腹血糖值、口服糖耐量、糖化血紅蛋白均下降且呈劑量依賴性,表明EGH具有較好的降糖活性;檢測IR相關指標(空腹胰島素、胰島素抵抗指數(shù)、胰島素分泌指數(shù)和胰島素敏感指數(shù))及HE染色發(fā)現(xiàn)EGH能夠修復損傷胰島組織促進胰島素釋放,提高組織對胰島素的敏感性從而改善IR;EGH治療后小鼠血清游離脂肪酸、總膽固醇和甘油三酯含量顯著降低說明EGH可有效調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝。同時EGH可促進小鼠肌組織中胰島素受體(IRs)和胰島素受體底物-1(IRS-1)發(fā)生磷酸化,促進葡萄糖轉(zhuǎn)運體4(Glut4)的表達,增加肌組織對葡萄糖的攝取。(3)篩選EGH中的降糖活性組分并探究其作用機制。對EGH的降糖機制進行初步探究后采用硅膠柱層析對EGH進行分離得到5個組分(Fr.1-Fr.5),采用肌細胞IR模型對Fr.1-Fr.5進行體外降糖活性評價。濃度為12.5-100μg/mL的Fr.1、Fr.3和Fr.5均能提高C2C12/IR細胞對葡萄糖的消耗量和攝取量,其中Fr.1效果最佳,Fr.3次之。進一步探究Fr.1降糖作用機制,發(fā)現(xiàn)Fr.1可以促進IRs、IRS-1磷酸化激活胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶(PI3K),抑制下游負調(diào)節(jié)抑癌基因蛋白(PTEN)磷酸化并促進磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1(PDK1)磷酸化,進一步促進下游蛋白蛋白激酶B(AKT)和糖原合成酶激酶3β(GSK 3β)磷酸化,激活PI3K/AKT信號通路。Fr.1還能促進腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)及其底物乙酰輔酶A羧化酶(ACC)磷酸化激活AMPK信號通路。綜上所述,Fr.1可以激活PI3K/AKT和AMPK信號通路促進Glut4對葡萄糖的轉(zhuǎn)運從而改善IR達到治療T2DM的目的。
【學位單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

T2DM）、妊娠型糖尿病（Gestaional diabetes me尿病[2]，其中 T2DM 患者最多，占 DM 總?cè)藬?shù)的 90%人患 DM，其中 T2DM 患者達 3.7 億[4, 5]。IR 和胰島素分泌相對不足，導致機體不能有效利用胰島臨床上主要表現(xiàn)為高血糖[7]，機體長期處于高血糖狀態(tài)病（足部水腫、壞疽）、腎�。I功能損傷、衰竭）、眼腦血管病變）、動脈硬化性心臟病、皮膚病、口腔病變等DM 主要有兩個因素：①遺傳（子宮內(nèi)環(huán)境、表觀遺傳變運動缺乏、高脂肪的膳食結(jié)構、年齡、線粒體功能障礙發(fā)病早期有兩個階段，第一階段機體出現(xiàn) IR，隨著葡萄在體內(nèi)逐漸堆積進入第二階段，機體胰島素代償性分泌，表現(xiàn)為血糖持續(xù)升高演變?yōu)?T2DM。由此可見 IR 先致其他病理、生理發(fā)生改變。同時現(xiàn)代醫(yī)學己經(jīng)從分子M 發(fā)病的基本環(huán)節(jié)和顯著特性，貫穿于 T2DM 發(fā)展的始主要因素[9]。

能力下降[13]。如圖 1-2[14]，促炎細胞因子、類酶，包括細胞因子信號抑制物（SOCS），絲氨c-Jun 氨基末端激酶 JNK、核因子 κB 抑制劑激酶可以抑制胰島素受體（IRs）與胰島素受體磷脂酰肌醇激酶/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶（PI3糖異生，減弱葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白 2（Glut2）轉(zhuǎn)運

圖 1-3 骨骼肌 IR 的分子作用機制[15]Fig.1-3 Molecular mechanisms of skeletal muscle IR組織作為能量儲存的主要器官參與多種病理生理過程，脂肪組的敏感性下降。如圖 1-4[16]，一方面脂肪細胞釋放游離脂產(chǎn)物（二�；视停窠�(jīng)酰胺）并大量積累。脂質(zhì)代謝產(chǎn) 及 JNK 蛋白激酶，從而抑制下游 PI3K/AKT 信號轉(zhuǎn)導產(chǎn)生的炎癥細胞因子白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（轉(zhuǎn)錄激活因子 3（STAT3）從而增加 SOCS3 蛋白的表達，絲氨酸磷酸化使脂肪組織產(chǎn)生 IR。
【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李斌;范源;李鑫;;基于PI3K/Akt信號通路的中藥治療2型糖尿病胰島素抵抗研究進展[J];中成藥;2017年01期

2 陳書;張耀丹;魯碧楠;宋新龍;蘇冷高娃;楊坤寶;龐宗然;;菩人丹對ob/ob肥胖小鼠血清內(nèi)脂素及脂肪細胞形態(tài)的影響[J];中成藥;2016年12期

3 王濤;印曉星;;2型糖尿病治療藥物研究進展[J];藥學進展;2016年05期

4 康麗;郭琪;毛昕宇;王冠群;王夢露;;營養(yǎng)素配比與減肥干預對2型糖尿病的影響[J];中國慢性病預防與控制;2015年08期

5 Iqra Hameed;Shariq R Masoodi;Shahnaz A Mir;Mudasar Nabi;Khalid Ghazanfar;Bashir A Ganai;;Type 2 diabetes mellitus:From a metabolic disorder to an inflammatory condition[J];World Journal of Diabetes;2015年04期

6 郭春芳;馬秀艷;;益氣滋陰活血方治療糖尿病患者療效觀察[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2015年07期

7 何勝;鄧曉珍;潘霖;鐘涓;寧梅;林美情;許小林;張樹球;;鐵皮石槲對衰老糖尿病小鼠模型生化指標的影響[J];中國當代醫(yī)藥;2015年09期

8 任秋霞;胡志鋒;;基于體表參數(shù)的2 h口服葡萄糖耐量試驗各時間點血糖分析[J];中國全科醫(yī)學;2014年26期

9 王秋玉;許泓瑜;許正宏;陸震鳴;劉敏;史勁松;;滇結(jié)香花水提物對2型糖尿病小鼠降血糖作用的初步研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2014年09期

10 曾位森;黃源堅;邵聰文;梁寶煥;魏鋮;許萬福;蘇亞茹;;高脂飲食誘導的2型糖尿病模型小鼠的生化及病理分析[J];南方醫(yī)科大學學報;2014年08期

相關博士學位論文 前2條

1 吳乃君;二甲雙胍對AMPK、PPARγ的影響與胰島素抵抗的研究[D];天津醫(yī)科大學;2011年

2 扈曉佳;四種藥用植物的化學成分及活性研究[D];上海交通大學;2009年

相關碩士學位論文 前6條

1 周愛玉;藏藥綠蘿花化學成分及降糖生物活性的研究[D];廣東工業(yè)大學;2016年

2 朱海雯;藏藥綠蘿花的化學成分和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[D];重慶大學;2015年

3 王賽;藏藥綠蘿花對高血脂糖癥動物模型治療的實驗研究[D];西南民族大學;2015年

4 韓佳;結(jié)香花化學成分的提取分離及其抑菌、抗氧化活性研究[D];西南交通大學;2012年

5 王麗霞;調(diào)控胰島素信號對成肌細胞增殖與分化的影響[D];西華大學;2007年

6 盧昉;氣陰兩虛證及脾虛痰濕證2型糖尿病動態(tài)血糖譜的特點[D];廣州中醫(yī)藥大學;2007年

本文編號：2868771