糖蛋白是一種糖類與蛋白質(zhì)通過共價鍵結(jié)合在一起的生物大分子。糖蛋白種類繁多,廣泛存在于自然界的動植物和微生物中,以多種形式存在于生物體內(nèi),在機(jī)體生命活動中起著復(fù)雜而重要的功能。研究表明,糖蛋白具有多種生物學(xué)活性,在免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤等方面有著重要的作用。因此,糖蛋白在功能性食品及藥物研究等領(lǐng)域有著廣闊的開發(fā)前景。本文以蘭州百合作為研究對象,以超聲輔助緩沖溶液提取得到蘭州百合糖蛋白組分,對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征及理化性質(zhì)研究,并以小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7為細(xì)胞模型,研究了蘭州百合糖蛋白純化組分在細(xì)胞水平的免疫調(diào)節(jié)活性。論文主要包括以下幾個部分:(1)新鮮蘭州百合鱗片經(jīng)一系列預(yù)處理后,石油醚回流脫脂,以pH 7.4的0.01 mol/L PBS緩沖溶液提取,鹽析分離糖蛋白組分,透析、冷凍干燥得到蘭州百合糖蛋白粗品LGP,得率為2.09%;粗品復(fù)溶后,使用Sephadex G-200凝膠柱及DEAE-Cellulose 52陰離子交換柱進(jìn)一步純化,HPLC和Sephadex G-100進(jìn)行純度鑒定,得到了糖蛋白的兩個純化組分LGP-1和LGP-2。(2)對純化得到的LGP-1和LGP-2進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征及理化性質(zhì)研究。LGP-1的糖含量和蛋白質(zhì)含量分別為55.80%和43.04%,LGP-2的糖含量和蛋白質(zhì)含量分別為62.52%和35.28%;紅外光譜(FT-IR)結(jié)果表明,LGP-1和LGP-2均具有糖和蛋白質(zhì)的特征吸收峰;分子量測定結(jié)果為,LGP-1的重均分子量(Mw)為3.639×10~4,而LGP-2則為9.311×10~4,分散系數(shù)LPG-1為1.950,較LGP-2的2.927更小;β-消去反應(yīng)結(jié)果表明,LGP-1和LGP-2均含有O-連接的糖肽鍵;氣相-質(zhì)譜聯(lián)用測得LGP-1由甘露糖和葡萄糖組成,其摩爾比為1.07:1.01,LGP-2則由甘露糖、葡萄糖和半乳糖三種單糖組成,其摩爾比為1.04:4.64:5.43;氨基酸組成分析結(jié)果表明,LGP-1由16種氨基酸組成,不含有甲硫氨酸,而LGP-2則由15種氨基酸組成,缺少甲硫氨酸和酪氨酸,LGP-1和LGP-2中均含有大量的人體必需氨基酸;圓二色譜圖表明,LGP-1與LGP-2的蛋白質(zhì)主鏈二級結(jié)構(gòu)均以β-折疊為主;掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),LGP-1呈現(xiàn)大小比較均一、表面光滑的球型或橢球型,而LGP-2則呈現(xiàn)出立方體的表觀形態(tài),LGP-1的粒徑分布在0.3~0.9μm范圍之內(nèi),LGP-2的粒徑分布在0.6~1.8μm范圍之內(nèi)。(3)以小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7研究LGP-1和LPG-2的免疫調(diào)節(jié)活性。CCK-8實驗研究對細(xì)胞活力的影響,結(jié)果表明,兩者均可顯著促進(jìn)RAW 264.7細(xì)胞的增殖,且呈現(xiàn)濃度依賴性。Griess法測定NO的釋放能力、ELISA法測定TNF-α的分泌,判斷LGP對RAW 264.7細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明,當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)時間為48 h,加樣濃度達(dá)到100μg/mL時,NO釋放量和TNF-α含量達(dá)到最大。由此可知,LGP-1和LGP-2均能促進(jìn)RAW 264.7細(xì)胞的增殖,并且能夠激活該細(xì)胞的免疫功能,由此推測蘭州百合糖蛋白組分有著很好的免疫調(diào)節(jié)活性和抗腫瘤活性。上述蘭州百合糖蛋白的結(jié)構(gòu)表征及免疫調(diào)節(jié)活性的研究,迄今尚未見相同文獻(xiàn)報道。
【學(xué)位單位】：西北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285.5
【部分圖文】：

以共價鍵形式連接在一起而形成的復(fù)合蛋白，其中的糖鏈變化較大，含有豐富的結(jié)構(gòu)信息[1]。糖蛋白種類繁多，不僅在動植物體內(nèi)和微生物體中廣泛分布，甚至在病毒中也含有糖蛋白，糖蛋白是一種具有多重生物學(xué)功能的生物活性大分子[2]。其一般結(jié)構(gòu)可用圖 1.1 表示。

圖 1.2 構(gòu)成糖蛋白寡糖鏈的主要單糖.2 The principal monosaccharide found in the oligosaccharide chains of glycop鍵的類型中的糖鏈與蛋白質(zhì)中的某一特定氨基酸以共價鍵的形式

圖 1.3 N-糖肽鍵和 O-糖肽鍵的結(jié)構(gòu)Fig.1.3 The structure of N-glycans and O-glycans（1）N-糖肽鍵：N-糖肽鍵是β-N-乙酰葡萄糖胺與天冬酰胺連接，在糖蛋中只有 N-乙酰-β-D-葡萄糖胺殘基連接天冬酰胺，生成的鍵是 4-N-(2-乙酰氨基-
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2867491