短梗五加(Acanthopanax sessiliflorus)屬于藥食兩用植物,我國該植物資源廣闊,目前主要散布于吉林省長白山地區(qū)、黑龍江省、遼寧省等地,韓國、日本等地也有區(qū)域散布。Chiisanoside是短梗五加中分離出的一種三萜皂苷,現(xiàn)代藥理學研究表明chiisanoside能夠起到抗病毒、抗炎、抑制胰脂肪酶和抗糖尿病的作用。本文對短梗五加葉中有效成分chiisanoside的提取工藝進行優(yōu)化、富集并制備chiisanoside這一成分,并對其抗腫瘤活性及藥代動力學進行研究。采取效應(yīng)面法優(yōu)化短梗五加葉中活性化合物chiisanoside的提取工藝。在單因素實驗探討的基礎(chǔ)上,通過Box-Behnken效應(yīng)面法研究乙醇體積分數(shù)、超聲時間、液固比對提取工藝的影響。提取最優(yōu)條件為:乙醇體積分數(shù)72%、超聲時間40min、固液比1:118。該條件下chiisanoside提取率為3.56%。大孔樹脂純化短梗五加葉中chiisanoside的工藝。通過靜態(tài)吸附與解吸附實驗篩選7種型號的大孔樹脂,并對所選型號樹脂工藝參數(shù)進行考察。實驗結(jié)果顯示D101型大孔樹脂對chiisanoside的吸附與解吸附效果最佳,最優(yōu)條件為以含生藥0.2 g/mL、上樣體積為柱體積的5倍、用50%乙醇溶液洗脫、7倍柱體積的洗脫液來進行最后洗脫。首次采取Box-Behnken效應(yīng)面法提取和大孔樹脂優(yōu)化富集工藝的聯(lián)用對目標性成分chiisanoside的提取進行優(yōu)化。在工藝優(yōu)化的基礎(chǔ)上,對5 kg短梗五加葉進行提取、富集有效成分chiisanoside,純化后過硅膠柱,得到9.58 g樣品。純化后的化合物應(yīng)用于抗腫瘤藥理活性實驗中,結(jié)果顯示chiisanoside能顯著抑制H22荷瘤小鼠實體瘤生長,對免疫器官沒有損害。給藥后血清細胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ均有所升高,而VEGF則受到抑制。此外,從HE、TUNEL染色和免疫組織化學分析中我們可以發(fā)現(xiàn)chiisanoside能夠使腫瘤細胞凋亡,其機制或許與上調(diào)Bax、Caspase-3,下調(diào)Bcl-2、VEGF有關(guān)。進一步研究chiisanoside在大鼠體內(nèi)藥代動力學及組織分布,結(jié)果顯示chiisanoside在體內(nèi)吸收速度快。此外,chiisanoside在肝臟和小腸中含量最高,這表明chiisanoside對肝臟和小腸有良好的靶向性。
【學位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

1.2.1.1 色譜條件CXTH-3000 高效液相色譜儀，色譜柱為 Odyssll C18（200mm×4.6mm，5μm）相：乙腈-水（35:65，v/v）；流速：1mL·min-1；檢測波長：205nm；柱溫：40℃；20 μL。1.2.1.2 對照品的制備及標準曲線的繪制用甲醇精確配制 4mg/mL 的 chiisanoside 標準液，備用。吸取少量上述標準液進樣 2、4、8、10、12 μL，按“1.2.1.1”項中的色譜條件進行分析，以各體積對照液的峰面積為縱坐標（Y），進樣量為橫坐標（x）來繪制標準曲線，回歸Y=2555799.70x-2144924.50（r2=0.9991），結(jié)果表明當進樣量在 8~28 μg 的范圍內(nèi)系良好。1.2.1.3 供試品溶液制備精密稱取短梗五加葉粉末 1.0 g，置于具塞三角瓶中，根據(jù)不同的實驗提取條梗五加葉進行提取，提取液先在 3000 r/min 的條件下離心 10 min，再將上清液過 0濾膜，濾液作為供試品溶液。采用高效液相色譜法對供試品溶液中 chiisanoside 的行分析，每次進樣 10 μL，樣品色譜圖如圖 1-1。

實驗分別對乙醇的體積分數(shù)、超聲提取的時間及液固比這 3 個因素采取考素對 chiisanoside 提取率的影響。實驗具體設(shè)計如下，即將乙醇的體積分%、30%、50%、70%及 90% 5 組，超聲時間分別為 5、15、30、60、90比為 1:20、1:40、1:80、1:100、1:120 和 1:150 這 6 組。實驗中，固定 2 一因素進行單因素實驗的考察并且每個實驗重復(fù)三次提取。.5 響應(yīng)曲面實驗設(shè)計響應(yīng)曲面實驗的設(shè)計是在單因素實驗的基礎(chǔ)上，依據(jù) Box-Behnken 這一方素三水平的 17 個試驗的響應(yīng)面分析并考察這 3 個因素對提取效果的影響n-Expert trial version 8.0.6 統(tǒng)計軟件對結(jié)果采取分析。 Chiisanoside 單因素實驗結(jié)果.1 乙醇體積分數(shù)對 chiisanoside 提取率的影響固定超聲提取時間為 60min，固液比為 1:120，乙醇的體積分數(shù)依次設(shè)定為70%及 90%，進行 5 組實驗，結(jié)果如圖 1-2。

圖 1-3 超聲提取的時間對 chiisanoside 提取率的影響Fig.1-3 Effects of ultrasonic extraction time on extraction rate of chiisanoside 1-3 可知，在 5 ~ 30min，chiisanoside 的提取率隨時間的延長而顯著提 min 時，chiisanoside 含量達到峰值，30 min 以后 chiisanoside 含量隨著超慢下降。由于 30 ~ 120 min 時 chiisanoside 的提取率變化不是很明顯，超聲提取的時間確定在 5 ~ 60 min 為宜。固液比對 chiisanoside 提取率的影響乙醇的體積分數(shù)為50%，超聲提取的時間為60 min，固液比依次設(shè)定為:100、1:120 和 1:150，進行 6 組實驗，結(jié)果如圖 1-4 所示。
【參考文獻】

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本文編號：2865840