目的:研究已證實玉屏風(fēng)顆粒(YPF)具有良好的抗炎、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)作用,但其作用機(jī)制還未完全闡明。本研究主要探究PGC-1α-PPARγ通路是否介導(dǎo)PM2.5聯(lián)合低氧暴露對人支氣管上皮細(xì)胞損傷的機(jī)制及YPF的保護(hù)作用。方法:1.觀察PM2.5、低氧及PM2.5聯(lián)合低氧對人支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2B中PGC-1α、PPARγmRNA表達(dá)的影響:分別以PM2.5(0、25、50、100μg/mL)、低氧、PM2.5聯(lián)合低氧3種方法干預(yù)細(xì)胞6、12、24h后,qPCR法檢測PGC-1α、PPARγmRNA水平以篩選PM2.5聯(lián)合低氧合適的暴露時間及濃度;2.探究YPF對PM2.5聯(lián)合低氧暴露的BEAS-2B細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制:CCK8法觀察不同濃度YPF溶液干預(yù)后細(xì)胞的活性,設(shè)立正常對照組、PM2.5+低氧組、PM2.5+低氧+YPF組、PM2.5+低氧+siCONTROL+YPF組、PM2.5+低氧+siPGC-1α+YPF組,qPCR、Western法分別測定PGC-1α、PPARγmRNA及蛋白水平,Western法測定β-防御素2(β-defension 2)、核因子κB(NF-κB)p65蛋白水平,ELISA法測定單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)蛋白水平。結(jié)果:1.PM2.5、低氧兩種因素單獨或聯(lián)合干預(yù)后PGC-1α、PPARγmRNA水平均低于正常對照組(P均0.01);PM2.5+低氧組PGC-1α、PPARγ蛋白水平均低于正常對照組(P均0.01),PM2.5+低氧+YPF組PGC-1α、PPARγmRNA及蛋白水平均高于PM2.5+低氧組(P均0.05);PM2.5+低氧+siPGC-1α+YPF組PGC-1α、PPARγmRNA及蛋白水平均低于PM2.5+低氧+siCONTROL+YPF組(P均0.01);2.PM2.5+低氧組β-defension 2蛋白水平均低于正常對照組(P0.01),PM2.5+低氧+YPF組β-defension 2蛋白水平均高于PM2.5+低氧組(P0.05);PM2.5+低氧+siPGC-1α+YPF組β-defension 2蛋白水平低于PM2.5+低氧+siCONTROL+YPF組(P0.01);3.PM2.5+低氧組MCP-1蛋白水平高于正常對照組(P0.01),PM2.5+低氧+YPF組MCP-1蛋白水平均低于PM2.5+低氧組(P0.05);PM2.5+低氧+siPGC-1α+YPF組MCP-1蛋白水平高于PM2.5+低氧+siCONTROL+YPF組(P0.01)。4.PM2.5+低氧組NF-κBp65蛋白水平高于正常對照組(P0.01),PM2.5+低氧+YPF組NF-κBp65蛋白水平低于PM2.5+低氧組(P0.05);PM2.5+低氧+siPGC-1α+YPF組NF-κBp65蛋白水平與PM2.5+低氧+siCONTROL+YPF組相比,無明顯差異。結(jié)論:PM2.5聯(lián)合低氧能抑制BEAS-2B細(xì)胞中PGC-1α-PPARγ通路的表達(dá),并引發(fā)免疫炎癥反應(yīng),YPF可改善這種影響,并可能通過PGC-1α-PPARγ通路而起保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

不同濃度不同時間PM2.5暴露后BEAS-2B中PGC-1α和PPARγmRNA水平

圖 1 不同濃度不同時間 PM2.5 暴露后 BEAS-2B 中 PGC-1α和 PPARγmRNA 水平Fig.1 Levels of PGC-1α and PPARγ mRNA in BEAS-2B cells exposed todifferent concentrations of PM2.5 for different timeNote:(A)PGC-1α mRNAlevels (B)PPARγ mRNAlevels.*P<0.01 vs 0μg/mL,6h;**P<0.01vs 0μg/mL,12h;▼P<0.01 vs 0μg/mL,24h;△P<0.01 vs 25μg/mL,6h;☆P<0.01 vs50μg/mL,6h;▽P<0.05 vs 100μg/mL,6h；▲P<0.01 vs 100μg/mL,12 h.A. B.

圖 3 PM2.5 聯(lián)合低氧暴露后 BEAS-2B 中 PGC-1α和 PPARγ mRNA 水平Fig.3 Levels of PGC-1α and PPARγ mRNAin BEAS-2B cells exposed to 50μg/mL PM2.5 combined hypoxia in in different timeNote:(A)PGC-1α mRNAlevels (B)PPARγ mRNAlevels.*P<0.01 vs Control 6h;**P<0.01vs Control 12h;***P<0.01 vs Control 24h;△P<0.01 vs PM+Hypoxia 6h.A. B.
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2865304