痤瘡是由多種因素引起的毛囊皮脂腺慢性炎癥性疾病,與皮脂分泌過多、雄激素水平升高、毛囊皮脂腺導(dǎo)管的異常角化、細(xì)菌感染、炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)等諸多因素密切相關(guān)�；瘜W(xué)藥物治療存在諸多問題,而植物揮發(fā)油或中草藥提取物表現(xiàn)出了許多優(yōu)異特質(zhì),可針對痤瘡發(fā)病的多因素同時(shí)發(fā)揮作用。中藥復(fù)方成分復(fù)雜、效應(yīng)成分不明和生物利用度低是導(dǎo)致中藥起效慢、用藥時(shí)間長的主要原因,解決該問題的根本是合理中醫(yī)藥理論基礎(chǔ)上的中藥制劑技術(shù)的突破。歸芎祛瘀乳膏含有當(dāng)歸、川芎、丁香和桂枝四味中藥,脂溶性和揮發(fā)性成分具有去腐生肌、鎮(zhèn)痛、抗菌、抑制血小板聚集和免疫調(diào)節(jié)等作用,用于痤瘡的臨床治療。把傳統(tǒng)湯劑改為乳膏劑有利于更好發(fā)揮療效,便于臨床應(yīng)用。第一部分:歸芎祛瘀乳膏的中藥材提取工藝研究目的:考察處方中各組分的提取方法,優(yōu)化萃取工藝。方法:比較各組分的水蒸氣蒸餾法、石油醚滲漉法和CO2超臨界萃取法的揮發(fā)油得率,以選擇適宜的萃取方法。采用正交實(shí)驗(yàn)法,以揮發(fā)油得率和主要成分含量為指標(biāo),對CO2超臨界萃取法的萃取壓力、溫度和時(shí)間進(jìn)行考察。結(jié)果與結(jié)論:藁本內(nèi)酯、桂皮醛和丁香酚為歸芎祛瘀乳膏主要成分,分別建立HPLC檢測方法。色譜條件:色譜柱:Iinertsil ODS-3色譜柱(4.6 mm×150mm,5μm),流動(dòng)相:甲醇-水(70∶30),流速:1.0 mL?min-1,檢測波長:280 nm,柱溫:室溫,進(jìn)樣量:20μL。結(jié)果表明藁本內(nèi)酯、丁香酚、桂皮醛分別在5.202~208.1μg?m L-1、3.797~759.4μg?mL-1、8.781~439.0μg?mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,精密度良好,在12h內(nèi)穩(wěn)定,HPLC法可以用于測定樣品中藁本內(nèi)酯、桂皮醛及丁香酚的含量。使用三種方法當(dāng)歸揮發(fā)油得率分別為0.5%、1.5%、5.2%;川芎揮發(fā)油得率為0.7%、6.7%、10.2%;丁香揮發(fā)油得率為1.8%、4.2%、2.3%;桂枝揮發(fā)油得率為0.8%、1.2%、3.8%。綜合考慮,選用CO2超臨界萃取法。分別以萃取揮發(fā)油得率和藁本內(nèi)酯、丁香酚、桂皮醛含量為指標(biāo),使用正交試驗(yàn)對對當(dāng)歸、川芎、丁香和桂枝的CO2超臨界萃取法進(jìn)行優(yōu)化對萃取壓力、萃取溫度、萃取時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果確定當(dāng)歸的最佳萃取工藝為萃取壓力為35 MPa,溫度為45℃,萃取時(shí)間3 h。提取物得率為5.04%,藁本內(nèi)酯含量(100g藥材)689.9mg。川芎最佳工藝萃取壓力為35 MPa,溫度為50℃,萃取時(shí)間2.5 h。提取物得率為10.24%,藁本內(nèi)酯含量(100g藥材)4607.0mg。丁香最佳工藝為萃取壓力為25 MPa,溫度為40℃,萃取時(shí)間2.5 h。桂枝最佳工藝為萃取壓力為20 MPa,溫度為40℃,萃取時(shí)間2 h。驗(yàn)證試驗(yàn)證明正交試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠。第二部分:歸芎祛瘀乳膏制備工藝研究目的:研究歸芎祛瘀乳膏的制備工藝。方法:通過物理性質(zhì)考察乳膏劑中乳化劑的用量,使用正交實(shí)驗(yàn)考察乳化條件。結(jié)果與結(jié)論:研究發(fā)現(xiàn)以Labrasol和TEFOSE63作為乳化劑,結(jié)果比例為2:1時(shí)制備的乳膏稠度適中。以加入主藥時(shí)基質(zhì)溫度、乳化劑用量、攪拌速度及乳化時(shí)間作為可變因素,每因素各列三水平(四因素三水平正交表)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以藁本內(nèi)酯和桂皮醛的含量為考察指標(biāo),結(jié)果確定乳化條件為溫度65℃,乳化劑用量10%,攪拌速度300r/min,乳化時(shí)間30min。中試結(jié)果表明制備工藝重復(fù)性好,方法可行。第三部分:歸芎祛瘀乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究目的:擬定川芎祛瘀乳膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案。方法與結(jié)果:乳膏樣品與丁香酚和桂皮醛對照品使用HPLC檢測顯示相同位置的色譜峰,可以用于定性檢測。粒度、裝量、微生物限量均符合《中華人民共和國藥典》2015年版要求。藁本內(nèi)酯(C21H25NO4)為君藥當(dāng)歸、川芎主要活性成分,用HPLC法測定其在乳膏中的含量方法可靠,重現(xiàn)性好,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定為每克乳膏中含量大于0.130mg。加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在恒溫恒濕培養(yǎng)箱(溫度40℃±2℃,相對濕度75%±5%)中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),時(shí)間為6個(gè)月,分別在第0、1、2、3、6個(gè)月末取樣,結(jié)果顯示,歸芎祛瘀乳膏采用聚乙烯塑料瓶包裝,在加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中各項(xiàng)指標(biāo)均符合“歸芎祛瘀乳膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案”規(guī)定。對三批次歸芎祛瘀乳膏樣品進(jìn)行為期24個(gè)月的質(zhì)量考察,結(jié)果表明,歸芎祛瘀乳膏質(zhì)量比較穩(wěn)定,各項(xiàng)指標(biāo)未見發(fā)生明顯變化,均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)規(guī)定,因此暫定歸芎祛瘀乳膏的有效期為24個(gè)月。第四部分:歸芎祛瘀乳膏的皮膚滲透動(dòng)力學(xué)研究目的:考察歸芎祛瘀乳膏的皮膚透皮吸收情況。方法:將離體巴馬小香豬皮放置于Franz擴(kuò)散池中間,以30%乙醇-生理鹽水溶液作為接收液,37℃恒溫水浴,恒速攪拌。分別取1%、2.5%、5%的歸芎祛瘀乳膏0.5g均勻涂于供藥池皮膚上,分別于1h、3h、5h、7h、9h、12h各精密吸取1m L接收液為測定樣品,HPLC法分別測定接收液中藁本內(nèi)酯、桂皮醛、丁香酚的含量,分別計(jì)算Higuchi方程,得透皮速率常數(shù)(Jss)。結(jié)果與結(jié)論:1%、2.5%、5%歸芎祛瘀乳膏的藁本內(nèi)酯Higuchi方程r值分別為0.9538、0.8805、0.9193,Jss值分別為0.7995μg·cm-2·h-1、1.094μg·cm-2·h-1、2.313μg·cm-2·h-1;桂皮醛Higuchi方程r值分別為0.9762、0.9221、0.9527,Jss值分別為27.85μg·cm-2·h-1、47.16μg·cm-2·h-1、110.2μg·cm-2·h-1;丁香酚Higuchi方程r值分別為0.9513、0.9014、0.9500,Jss分別為1.239μg·cm-2·h-1、1.804μg·cm-2·h-1、3.355μg·cm-2·h-1。結(jié)果表明藥物含量越大,藁本內(nèi)酯、桂皮醛與丁香酚的透皮吸收越快,累積滲透量(Qn)與時(shí)間t呈良好線性關(guān)系。第五部分:歸芎祛瘀乳膏的藥效學(xué)研究目的:研究歸芎祛瘀乳膏對金黃地鼠皮脂腺斑的治療效果。方法:雄性金黃地鼠按照體重隨機(jī)分為6組:異維A酸組、冰黃軟膏組、1%歸芎祛瘀乳膏組、2.5%歸芎祛瘀乳膏組、5%歸芎祛瘀乳膏組和空白基質(zhì)組。剃去4cm×6cm露出皮脂腺斑,分別涂以相應(yīng)藥物。結(jié)果與結(jié)論:空白基質(zhì)組皮膚無明顯變化,具有明顯的皮脂腺斑。冰黃軟膏組金黃地鼠給藥后第6天開始涂藥皮膚區(qū)域有大量皮屑脫落、皮膚表面粗糙,皮脂腺斑顏色變淺,數(shù)量減少,觸摸感覺皮膚厚硬;異維A酸組平均6出現(xiàn)涂藥區(qū)域不同程度皮膚損傷,平均10天結(jié)痂,平均16天掉痂,平均20天出現(xiàn)用藥區(qū)域第二次損傷,平均23天第二次結(jié)痂,平均30天第二次退痂。使用不同濃度的歸芎祛瘀乳膏后,皮膚皮脂腺斑均有不同程度改善,皮膚變光滑,皮脂腺斑數(shù)量減少、顏色變淺,5%濃度作用優(yōu)于2.5%濃度,優(yōu)于1%濃度。組織切片結(jié)果顯示異維A酸凝膠引起金黃地鼠背部皮膚組織大量炎細(xì)胞浸潤,壞死,水腫;冰黃軟膏對金黃地鼠皮脂腺增生無治療作用;基質(zhì)組與空白組皮膚組織無明顯異常,真皮淺、中、深層有少量炎細(xì)胞浸潤;與空白組相比,歸芎祛瘀乳膏組皮膚有明顯改善的作用。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R286.0;R285.5
【部分圖文】：

c d圖 1-1 含量測定色譜圖（a 藁本內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品，b 當(dāng)歸提取物，c 川芎提取物，d 空白試劑）2.1.1.4 線性關(guān)系精密吸取上述對照品溶液適量，加甲醇配制成濃度梯度為 0.5202、1.040、5.202、20.81、41.61、62.42、104.0、208.1μg mL-1的溶液，吸取 20μL，注入高效液相色譜儀，測定色譜峰的面積，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 y = 47.84x + 42.31（R2= 0.9997）。結(jié)果顯示藁本內(nèi)酯進(jìn)樣濃度在 0.5202~ 208.1μg mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系，見圖 1-2。

c d圖 1-1 含量測定色譜圖（a 藁本內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品，b 當(dāng)歸提取物，c 川芎提取物，d 空白試劑）.1.1.4 線性關(guān)系密吸取上述對照品溶液適量，加甲醇配制成濃度梯度為 0.5202、1.04041.61、62.42、104.0、208.1μg mL-1的溶液，吸取 20μL，注入高效液定色譜峰的面積，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)方程 y = 47.84x + 42.31（R2= 0.9997）。結(jié)果顯示藁本內(nèi)酯進(jìn)樣濃度在1μg mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系，見圖 1-2。

c圖 1-3 丁香酚含量測定色譜圖酚對照品色譜圖，b 丁香提取物色譜圖，c 空白試劑系：品溶液，用甲醇稀釋成梯度濃度為 3.797、7.599.4μg mL-1的溶液。分別取 20μL 注入高效液相色面積積分值分別為橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲= 23.60x - 34.35（R2 = 0.9999），表明丁香酚進(jìn)內(nèi)線性關(guān)系良好。
【相似文獻(xiàn)】

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1 韓旭亮;歸芎祛瘀乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及藥效學(xué)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2017年

2 張穎;紅色毛癬菌對三種抗真菌外用藥敏感性的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2017年

3 宋麗;長白山野菊花油提取工藝研究及成分分析[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 李趙;超臨界二氧化碳處理油基鉆井固體廢棄物研究[D];西南石油大學(xué);2016年

5 魏天征;須癬毛癬菌對三種外用抗真菌藥物敏感性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號：2863010