人參皂苷Rg5(Rg5)是從天然草本植物人參中提取的三萜類皂苷,對一些癌細胞具有不同程度的抑制作用,是最有效的抗癌藥物之一。然而,Rg5的治療潛力受其低的生物利用度,短的生物半衰期和差的靶向性等因素的限制。在納米技術(shù)大背景下,研究工作者熱衷于將納米醫(yī)藥和腫瘤學(xué)相結(jié)合。納米藥物傳送系統(tǒng)具有靶向性,可降解性和生物相容性,有望克服Rg5的缺點。因此,我們制備了葉酸(FA)靶向的Rg5負載的牛血清白蛋白(BSA)納米顆粒,即FA-Rg5-BSA NPs。旨在增強Rg5藥效同時,提高藥物的靶向遞送能力�；诖�,本文主要的實驗研究結(jié)果如下:(1)通過采用去溶劑化法制備Rg5-BSA NPs,利用酰胺化反應(yīng)在Rg5-BSA NPs表面的活性氨基上修飾葉酸分子,制備新型的Rg5靶向藥FA-Rg5-BSA NPs。采用單因素實驗優(yōu)化Rg5-BSA NPs和FA-Rg5-BSA NPs的制備工藝。最終優(yōu)化的結(jié)果為:BSA濃度為15 mg/mL、BSA溶液pH值為9,水無水乙醇體積比1:3,Rg5與BSA摩爾比20:1,滴加乙醇速率為1.5-2.0 mL/min,攪拌轉(zhuǎn)速600 r/min,攪拌時間24 h,葉酸與BSA反應(yīng)的摩爾比為15:1,加入葉酸后反應(yīng)時間6 h,離心轉(zhuǎn)速10000 r/min。(2)制備出的FA-Rg5-BSA NPs水合直徑為201.4 nm,PDI為0.081,且zeta電位是負值。呈小圓球形、外表光滑。載藥量為12.64±4.02%,包封率為73.59±5.50%,葉酸偶聯(lián)量為94.6μg/mg BSA NPs。FA-Rg5-BSA NPs水溶液在4℃下能維持8周左右的穩(wěn)定性。在酸性(pH 5)條件,Rg5從顆粒中釋放速度要快于在中性環(huán)境。(3)體外細胞MTT毒性實驗證明,與Rg5-BSA NPs和Rg5相比,FA-Rg5-BSA NPs在MCF-7細胞中具有更高的抑制癌細胞增殖的能力,而在正常L929細胞中具通過有較高的細胞存活率。說明FA-Rg5-BSA NPs對不同種類的細胞有一定的選擇性。通過Hoechst 33342及AO/EB熒光染色實驗得出,在乳腺癌MCF-7細胞中FA-Rg5-BSA NPs比Rg5-BSA NPs和Rg5更能誘導(dǎo)細胞發(fā)生凋亡。觀察FITC標記Rg5-BSA NPs和FA-Rg5-BSA NPs進入MCF-7細胞的攝取分布情況顯示,細胞攝取FITC標記的FA-Rg5-BSA NPs的量要高于FITC標記的Rg5-BSA NPs,提前加入游離葉酸時,細胞攝取FITC標記的FA-Rg5-BSA NPs的量明顯下降。這表明葉酸修飾的納米顆�？梢酝ㄟ^葉酸受體介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑促進細胞攝取。(4)在MCF-7異種移植腫瘤模型中體內(nèi)藥效研究表明,FA-Rg5-BSA NPs比Rg5-BSA NPs和Rg5更能抑制腫瘤生長,有較好的體內(nèi)抗腫瘤活性。體內(nèi)實時生物成像表明,FA-Rg5-BSA NPs比Rg5-BSA NPs有更好的腫瘤靶向作用。
【學(xué)位單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TQ464;TB383.1;R285
【部分圖文】：

圖 1.1 人參皂苷 Rg5 的分子結(jié)構(gòu)式Figure 1.1 Molecular structure of ginsenoside Rg5們對人參皂苷 Rg5 的理化性質(zhì)研究的較少，主要停留在如何的制備提取方法上。主要制備人參皂苷 Rg5 的方法有高溫蒸輔助提取法[15]，酸堿催化法[16]，酶降解，微生物轉(zhuǎn)化等。制路大致分為兩個策略：第一個是將人參研磨成人參粉，提取二轉(zhuǎn)化得到人參皂苷 Rg5；第二個方法是將人參蒸制成紅參或黑苷 Rg5。常見的分離純化人參皂苷 Rg5 方法有制備型高效液相層析法，大孔吸附樹脂法，薄層板法等[17]。苷 Rg5 的主要藥理活性 Rg5 具有獨特的生物學(xué)特性，能夠治療皮膚炎癥，肺部炎癥經(jīng)、肝作用，治療和預(yù)防心腦血管疾病，增強記憶力方面更是抗腫瘤效果更是得到了研究者們的追捧。早些年發(fā)現(xiàn)人參皂

圖 1.2 納米顆粒的基本特點[25]Figure 1.2 Basic characteristics of nanoparticles[25]白載藥納米顆粒的制備質(zhì)主要包括明膠，膠原蛋白，酪蛋白，牛血清白蛋白，人血清白蛋清蛋白和重組蛋白。研究工作者對基于蛋白質(zhì)的載藥系統(tǒng)研究做了白蛋白是制備納米顆粒的理想候選物。經(jīng)過長時間的探索，白蛋白

圖 1.3 不同形式的白蛋白納米顆粒[30]Figure 1.3 Different forms of albumin nanoparticles[30]蛋白載藥納米顆粒的優(yōu)勢目前為止，已經(jīng)報道了很多水不溶性藥物用白蛋白作為藥物傳送系統(tǒng)略是具有吸引力的，由于其高載藥量，增強藥物的溶解性，保護藥物腫瘤藥物的功效，非抗原性，生物降解性和無毒無害的屬性[33]。Zha的以BSA為載體的超順磁性氧化鐵SPION 雜化納米團簇開發(fā)用于肝成像，在體內(nèi)和離體實驗中未觀察到毒性，具有生物相容性和穩(wěn)定性。備了兩種載有阿霉素的 HSA 納米顆粒，采用吸附或摻入基質(zhì)中的策略 150nm 和 500nm之間，負載率為 70-95%，與阿霉素溶液相比，載藥納不同的神經(jīng)母細胞瘤細胞系的抗癌作用增強。白蛋白納米顆粒制劑可射藥物時產(chǎn)生不好的反應(yīng)。一個成功的模型是商用 Abraxane 制劑，用
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本文編號：2861733