目的:運(yùn)用LC-MS/MS分析技術(shù),探究“桔梗-甘草”與羥基喜樹堿(Hydroxycamptothecin,HCPT)聯(lián)合用藥前后大鼠血漿藥代動力學(xué)和小鼠組織分布的差異性,并結(jié)合“桔梗-甘草”與羥基喜樹堿聯(lián)合應(yīng)用對lewis肺癌荷瘤小鼠的藥效作用,以此闡明“桔梗-甘草”增強(qiáng)羥基喜樹堿肺部輸送作用及抗腫瘤作用,以期為肺癌臨床治療方案提供一種新的策略。方法:(1)以SD大鼠為研究對象,隨機(jī)分2組,分別為HCPT組和“桔梗-甘草”聯(lián)合HCPT組,給藥后,于不同時間點采集其血漿,進(jìn)行樣品處理,運(yùn)用LC-MS/MS技術(shù)測定羥基喜樹堿在血漿中的含量,分析“桔梗-甘草”與羥基喜樹堿聯(lián)合用藥前后在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)差異。(2)以C57BL/6小鼠為研究對象,隨機(jī)分為2組,分別為羥基喜樹堿組和“桔梗-甘草”聯(lián)合羥基喜樹堿組,給藥后,于不同時間點采小鼠組織(心、肝、脾、肺、腎)。樣品處理后,運(yùn)用LC-MS/MS技術(shù)測定羥基喜樹堿在不同組織中的含量。(3)以C57BL/6小鼠為研究對象,建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,選取造模成功的小鼠隨機(jī)分為5組,給藥期間,每日給小鼠稱重,于給藥后第1、4、7、11、13、15天用游標(biāo)卡尺測量小鼠瘤徑,用于計算瘤體積;給藥后第16天,先取小鼠眼眶血用于血常規(guī)的測定,以及使用ELISA試劑盒測定小鼠血清中IL-2、IFN-γ、IL-10的含量;剝?nèi)×鼋M織,稱重,計算抑瘤率;取小鼠心、肝、脾、肺、腎組織用于計算小鼠臟器指數(shù)。結(jié)果:(1)本實驗建立的測定大鼠血漿中羥基喜樹堿的LC-MS/MS定量分析方法結(jié)果顯示,大鼠空白血漿不加羥基喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)溶液中未檢測到羥基喜樹堿及內(nèi)標(biāo)物,各成分分離良好;羥基喜樹堿在1.36~2728ng/ml范圍內(nèi)線性良好;回收率和基質(zhì)效應(yīng)均在80%以上;日內(nèi)、日間精密度(RSD)范圍為0.72~3.77%,準(zhǔn)確度(RE)范圍為6.83~10.29%;穩(wěn)定性(RSD)范圍為2.25~7.60%。藥動學(xué)實驗顯示,“桔梗-甘草”聯(lián)合羥基喜樹堿后的藥動學(xué)參數(shù)AUC_((0-t))(1176.268±343.014)ug/L*h和C_(max)(2604.4±865.009)ug/L較羥基喜樹堿單獨組的AUC_((0-t))(926.356±231.58)ug/L*h和C_(max)(2139.2±668.692)ug/L都增大了,但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(2)建立了測定C57BL/6小鼠組織中羥基喜樹堿的含量的LC-MS/MS方法,專屬性較好,其它成分對羥基喜樹堿及內(nèi)標(biāo)喜樹堿均沒有干擾。各個組織標(biāo)準(zhǔn)曲線在一定線性范圍為線性良好,回收率和基質(zhì)效應(yīng)均大于75%,日內(nèi)、日間精密度(RSD)范圍為1.2~9.58%,準(zhǔn)確度(RE)范圍為-13.4~11.45%,穩(wěn)定性(RSD)范圍為0.47~12.56%�！敖酃�-甘草”和羥基喜樹堿聯(lián)合運(yùn)用后,藥動學(xué)參數(shù)顯示,與羥基喜樹堿單獨給藥比較,在肺組織中AUC_((0-t))增大約2.41倍,且肺組織中的藥物峰濃度增大了約1.41倍;在心組織中AUC_((0-t))增大了1.76倍;在肝組織中,AUC_((0-t))增大了1.42倍;在脾組織中AUC_((0-t))增大了約1.99倍;;并且聯(lián)合給藥組中心、肝、脾、肺組織的CLz較羥基喜樹堿單獨給藥組顯著減小(P0.01)。(3)“桔梗-甘草”聯(lián)合羥基喜樹堿的抗肺癌作用結(jié)果顯示,在抑瘤率方面,給藥第16天,羥基喜樹堿單獨給藥組的抑瘤率為32.93%,而“桔梗-甘草”低、中、高劑量分別聯(lián)合羥基喜樹堿給藥組的抑瘤率為33.79%、47.14%和50.36%;小鼠外周血常規(guī)結(jié)果顯示,與羥基喜樹堿單獨給藥組相比,“桔梗-甘草”高劑量與羥基喜樹堿聯(lián)合應(yīng)用可顯著增加紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板水平(P0.05)。ELISA試劑盒檢測結(jié)果顯示,與羥基喜樹堿單獨給藥組比較,“桔梗-甘草”中、高劑量聯(lián)合羥基喜樹堿給藥組小鼠血清中IL-2的含量具有顯著性提升(P0.01),而IL-10的含量顯著性降低(P0.01);“桔梗-甘草”高劑量聯(lián)合羥基喜樹堿給藥組小鼠血清中IFN-γ的含量具有顯著性提升(P0.01)。結(jié)論:(1)建立的測定大鼠血漿中羥基喜樹堿的LC-MS/MS定量分析方法可靠、靈敏度好、快速準(zhǔn)確,可適用于大鼠血漿中羥基喜樹堿的藥動學(xué)研究和濃度測定。藥動學(xué)實驗結(jié)果顯示,“桔梗-甘草”有一定的提高羥基喜樹堿在大鼠血漿藥物濃度的作用,“桔梗-甘草”對羥基喜樹堿在大鼠血漿中的藥代動力學(xué)行為有一定的影響。(2)建立的測定小鼠組織中羥基喜樹堿的LC-MS/MS定量分析方法符合生物樣品檢測要求,可用于檢測小鼠組織中羥基喜樹堿的含量。組織分布實驗結(jié)果顯示,“桔梗-甘草”顯著地提高了羥基喜樹堿在心、肺、肝、脾組織中的分布濃度,延長了羥基喜樹堿在心、肺、肝、脾組織中的消除過程,表明“桔梗-甘草”可能不僅可以增強(qiáng)羥基喜樹堿在肺的分布,同時還增強(qiáng)了羥基喜樹堿在心、肝和脾的分布。(3)Lewis肺癌荷瘤小鼠模型的藥效研究結(jié)果表明,“桔梗-甘草”可以提高羥基喜樹堿的抑瘤率,其作用可能與聯(lián)合給藥后IL-10表達(dá)下降,IL-2、IFN-γ表達(dá)提高,紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板水平顯著增加,機(jī)體免疫增強(qiáng),藥物毒副作用降低有關(guān)。綜上所述,“桔梗-甘草”與羥基喜樹堿合用后,可以促進(jìn)羥基喜樹堿在心、肝、肺、脾組織的分布,提高羥基喜樹堿對Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤率,增強(qiáng)Lewis肺癌荷瘤模型小鼠的免疫力。這些研究結(jié)果在一定程度上證實了“桔梗-甘草”藥對在中醫(yī)理論上的引經(jīng)作用,同時,可為“桔梗-甘草”與抗癌藥物臨床方案的制定提供新的策略。
【學(xué)位單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1.1 羥基喜樹堿（A）和喜樹堿（B）的結(jié)構(gòu)式Fig.1.1 Structure of Hydroxycamptothecin(A) and Camptothecin(B)圖 1.2 羥基喜樹堿(A)和喜樹堿(B)的質(zhì)譜圖ig.1.2 Mass spectrogram of Hydroxycamptothecin(A)and Camptothecin(B)方法學(xué)考察1 方法專屬性密吸取大鼠空白血漿 50μL 于 1.5ml 管中，除了不加內(nèi)標(biāo)外，其余按“2品處理”項下操作，進(jìn)樣分析可以得空白血漿樣品色譜圖；然后在 5020 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360m/z, Da365.1321.0203.0185.0258.7 302.9218.9293.1100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340m/z Da0.02.0e64.0e66.0e68.0e61.0e71.2e71.4e71.6e71.8e72.0e72.2e7Intnestiy,cps349.1114.0314.1109.1123.0209.0 305.0240.1258.1228.0322.1137.8115.0 257.2112.2152.0 166.1 209.8 340.3AB

大鼠單次尾靜脈注射羥基喜樹堿注射液和“桔梗-甘草”聯(lián)合羥注射液的平均血藥濃度-時間曲線（Mean±SD，n=6）.4 Mean plasma concentration-time curve in rats following single taadministration of HCPT or JGGC-HCPT (Mean±SD，n=6)譜條件的建立及優(yōu)化驗建立及優(yōu)化了羥基喜樹堿的質(zhì)譜條件，實驗中考察了正離子掃離子峰度，確定一級檢測離子。然后對所監(jiān)測離子進(jìn)行選擇離源的最優(yōu)條件，同時通過產(chǎn)物離子掃描，分析裂解規(guī)律，確定最優(yōu)去簇電壓（DP）、碰撞電壓（CE）等質(zhì)譜參數(shù)。譜條件的確定

AUC(0-t)ug/L*h 398.35±79.36 497.01±54.23AUC(0-∞)ug/L*h 417.49±73.61 536.83±82.26MRT(0-t)h 1.70±0.03 1.92±0.162MRT(0-∞)h 2.18±0.29 2.63±1.03t1/2h 2.08±0.74 2.07±1.07Tmaxh 0.60±0.22 0.45±0.11CLz L/h/kg 9.59±1.79 7.39±1.06Cmaxug/L 280.30±94.07 405.79±133.81注：與羥基喜樹堿單獨給藥組相比，*P<0.05，**P<0.01Compared with the HCPT alone drug group, *P<0.05，**P<0.01
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 羅厚蔚;;一種分離羥基喜樹堿的新工藝—連續(xù)層析[J];中草藥通訊;1975年01期

2 趙永康;;抗癌藥10-羥基喜樹堿鑒定會在黃石市召開[J];中草藥通訊;1977年08期

3 ;喜樹果中的抗癌有效成分喜樹堿與10-羥基喜樹堿[J];中草藥通訊;1975年05期

4 侯建成;劉洋;魏雪苗;趙容;張巍;;羥基喜樹堿臨床抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報;2017年04期

5 郭喜明;郭斌;陳業(yè)宏;;四(對-乙酰氧醚-10-羥基喜樹堿)苯基卟啉的合成及結(jié)構(gòu)表征[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報;2013年03期

6 戴漢松;王家文;王濤;;喜樹果中喜樹堿和羥基喜樹堿的快速分離[J];中國西部科技;2013年05期

7 趙金良;唐曉丹;運(yùn)達(dá);杭海洋;;正交設(shè)計優(yōu)選喜樹堿及10-羥基喜樹堿的提取工藝[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年18期

8 孟光榮;李嘉俊;張倩;馬紅梅;;微波技術(shù)在10-羥基喜樹堿醚化反應(yīng)中的應(yīng)用[J];有機(jī)化學(xué);2012年12期

9 王秀莉;董春光;姜鵬;;羥基喜樹堿誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的實驗設(shè)計及分析[J];實驗室研究與探索;2011年01期

10 沈少華;劉姬艷;胡江琴;陳博;王利琳;;喜樹堿和10-羥基喜樹堿提取方法的比較與優(yōu)化[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年21期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐琴;黃酮類化合物與羥基喜樹堿的聯(lián)合抗癌作用及機(jī)理研究[D];大連理工大學(xué);2017年

2 施斌;羥基喜樹堿隱形納米囊泡腫瘤靶向研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 張玉田;羥基喜樹堿用于放射增敏治療局部晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

4 陳巖;羥基喜樹堿硅質(zhì)體制劑的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2016年

5 沈瑞雄;羥基喜樹堿誘導(dǎo)大鼠器官移植免疫耐受的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 熊付;羥基喜樹堿脂質(zhì)體抑制肝癌介入栓塞后缺氧應(yīng)答的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2013年

7 袁哲鋒;羥基喜樹堿治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤的研究[D];浙江大學(xué);2009年

8 王奇;載羥基喜樹堿聚乳酸羥基乙酸微球的制備及抑制肝癌栓塞后血管生成的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2013年

9 洪鳴凰;聚乙二醇化羥基喜樹堿轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾隱形納米載藥系統(tǒng)的腫瘤靶向研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

10 西娜;羥基喜樹堿長循環(huán)納米粒及其兩親性載體的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 魏志豪;羥基喜樹堿與槲皮素聯(lián)合用藥納米混懸劑的體內(nèi)外抗腫瘤活性研究[D];河南大學(xué);2019年

2 李木蘭;“桔梗—甘草”聯(lián)合羥基喜樹堿的藥動學(xué)及抗肺癌作用研究[D];江西中醫(yī)藥大學(xué);2019年

3 陳業(yè)宏;抗腫瘤藥物卟啉羥基喜樹堿二聯(lián)體的合成及表征[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2012年

4 閔長莉;喜樹內(nèi)生真菌的分離及其代謝產(chǎn)物10-羥基喜樹堿的研究[D];上海師范大學(xué);2009年

5 楊臻博;液態(tài)藥物載藥法制備10-羥基喜樹堿白蛋白納米粒以及其初步體內(nèi)外評價[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

6 耿濤;新型水溶性羥基喜樹堿環(huán)烷胺醇衍生物的合成與生物學(xué)初評[D];大連理工大學(xué);2013年

7 李蕾;7-乙基-10-羥基喜樹堿合成工藝研究及其新衍生物的合成和體外抗腫瘤活性[D];東北林業(yè)大學(xué);2007年

8 張偉;7-乙基-10-羥基喜樹堿磷脂的合成與組裝[D];東南大學(xué);2016年

9 江濤;硒酸酯多糖聯(lián)合羥基喜樹堿對HepG-2細(xì)胞生長及細(xì)胞周期的影響[D];吉林大學(xué);2017年

10 李香莉;喜樹生長過程中喜樹堿及10-羥基喜樹堿的代謝規(guī)律研究[D];貴州師范大學(xué);2007年

本文編號：2861613