目的:通過激素性股骨頭壞死造模實(shí)驗(yàn),觀察造模過程中成骨細(xì)胞的變化,以及中藥鎖陽對(duì)此模型下成骨細(xì)胞的影響,研究中藥鎖陽在股骨頭壞死治療中的積極作用,為新的治療方法提供參考依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)1:通過隨機(jī)抽簽法將24只成年的健康新西蘭大白兔分為3組,每組8只新西蘭大白兔,其中1組為正常對(duì)照組、1組為2周模型組,另外1組為4周模型組。3組動(dòng)物同時(shí)給予常規(guī)飼料正常喂養(yǎng),正常對(duì)照組不采取特殊處理,而在實(shí)驗(yàn)第1天,使用規(guī)格20μg/kg大腸桿菌內(nèi)毒素,通過耳緣靜脈,分別注射于2組兔模型組動(dòng)物體內(nèi)。在第一次注射大腸桿菌內(nèi)毒素24小時(shí)之后,即實(shí)驗(yàn)第2天的同一時(shí)間進(jìn)行第2次注射,注射途徑及藥物劑量保持一致,同時(shí)使用20mg/kg甲基強(qiáng)的松龍進(jìn)行臀部肌肉注射。之后每間隔1天,使用同樣劑量的甲基強(qiáng)的松龍對(duì)2組兔模型組進(jìn)行臀肌注射。2組兔模型在注射大腸桿菌內(nèi)毒素前,每天給予4萬U/rabbit青霉素肌肉注射,預(yù)防實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射內(nèi)毒素發(fā)生感染的情況,實(shí)驗(yàn)開始后每周進(jìn)行同量的青霉素肌注2次。實(shí)驗(yàn)開始第1天、14天(2周)、28天(4周),對(duì)3組兔子進(jìn)行抽取股動(dòng)脈血,觀察動(dòng)脈血氧分壓的差異。在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)、第2周及第4周,3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別隨機(jī)選取2只兔子進(jìn)行處死,進(jìn)行影像學(xué)檢查、組織病理學(xué)切片觀察,根據(jù)組間各項(xiàng)指標(biāo)的變化及差異性,同時(shí)對(duì)各組動(dòng)物模型的股骨頭進(jìn)行取樣,提取并培養(yǎng)股骨頭內(nèi)的成骨細(xì)胞,對(duì)照觀察其變化,最終證實(shí)造模成功。實(shí)驗(yàn)2:造模方法和實(shí)驗(yàn)1方法一致,在造模過程中,26只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予常規(guī)飼料正常喂養(yǎng),4周后即可造模成功。其中有一只兔子死于內(nèi)毒死中毒,造模成功的25只新西蘭大白兔采取隨機(jī)抽取,分為3組,分別為安慰對(duì)照組、小劑量鎖陽組、大劑量鎖陽組,每組8只。給予藥物干預(yù),每天給予小劑量鎖陽組中的新西蘭兔鎖陽提取液進(jìn)行灌胃,分早晚兩次進(jìn)行,灌胃劑量按照50ml/kg計(jì)算;大劑量鎖陽組中的新西蘭兔每天使用鎖陽提取液進(jìn)行兩次灌胃,灌胃劑量按照100ml/kg來換算,相當(dāng)于230g生藥,分兩次進(jìn)行灌胃;每天給予安慰對(duì)照組中的新西蘭兔進(jìn)行生理鹽水灌胃,分兩次進(jìn)行,規(guī)格為100ml/kg。實(shí)驗(yàn)干預(yù)前、實(shí)驗(yàn)干預(yù)4周后及實(shí)驗(yàn)8周后,對(duì)各組動(dòng)物模型的股骨頭進(jìn)行取樣,使用經(jīng)典的酶消化法-組織塊法分離,提取并培養(yǎng)股骨頭內(nèi)的成骨細(xì)胞,在同一時(shí)間段觀察各組成骨細(xì)胞增殖及傳代速率。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)1:實(shí)驗(yàn)造模的第5天,2周模型組中有1只兔子因內(nèi)毒素中毒而導(dǎo)致死亡,在實(shí)驗(yàn)造模第14天,4周模型組,其中有1只兔子因麻醉不適而死亡。造模4周期間通過影像學(xué)檢查、組織學(xué)切片檢查、股動(dòng)脈血氧分壓檢測(cè)的指標(biāo)變化、證實(shí)造模成功。1在實(shí)驗(yàn)開始、2周和4周分別對(duì)各組兔子拍攝雙側(cè)股骨頭X線片以及MRI檢查:正常對(duì)照組X線顯示股骨頭外觀無差異,形態(tài)正常,骨質(zhì)均勻,骨密度正常,未見變化,M RI檢查顯示未見明顯異常,關(guān)節(jié)信號(hào)正常;2周造模組X線顯示股骨頭形態(tài)未見明顯變化,但骨密度有所下降,MRI檢查顯示T1、T2加權(quán)像有不均勻低信號(hào)出現(xiàn),呈線樣征,關(guān)節(jié)腔內(nèi)伴有關(guān)節(jié)積液;4周造模組X線顯示股骨頭外觀不光滑圓整,關(guān)節(jié)面不清晰,骨密度明顯分布不均,MRI檢查顯示不均勻低信號(hào)區(qū)域面積增大,關(guān)節(jié)積液增多。2組織學(xué)切片檢查:正常對(duì)照組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示頭內(nèi)骨小梁結(jié)構(gòu)排列有序,密度均勻、骨細(xì)胞數(shù)量正常。2周模型組新西蘭兔子骨小梁差,骨細(xì)胞數(shù)量少,有空骨陷窩出現(xiàn)。4周模型組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示頭內(nèi)骨小梁排列紊亂、間隙明顯稀疏,骨細(xì)胞較2周模型組顯著減少,空骨陷窩數(shù)量明顯增多。3股動(dòng)脈血氧分壓檢測(cè):實(shí)驗(yàn)第1天,3組新西蘭大白兔的股動(dòng)脈血氧分壓無差別;實(shí)驗(yàn)第14天,2周模型組和4周模型組的股動(dòng)脈血氧分壓之間差別不明顯(P0.05),相對(duì)于正常對(duì)照組,2、4周模型組股動(dòng)脈血氧分壓明顯不足(P0.05);實(shí)驗(yàn)第28天,股動(dòng)脈血氧分壓情況,正常對(duì)照組2周模型組4周模型組,其中4周模型組的股動(dòng)脈血氧分壓明顯低于正常對(duì)照組(P0.01)。4酶消化法-組織塊法:此方法安全有效,分離,提取,培養(yǎng)股骨頭內(nèi)的成骨細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)第1天,3組新西蘭大白兔的成骨細(xì)胞數(shù)量無差別;實(shí)驗(yàn)第14天,2周模型組和4周模型組的成骨細(xì)胞數(shù)量差別不明顯(P0.05),2、4周模型組的成骨細(xì)胞數(shù)量相較于正常對(duì)照組明顯減少(P0.05);實(shí)驗(yàn)第28天,成骨細(xì)胞數(shù)量情況,正常對(duì)照組2周模型組4周模型組,4周模型組兔子監(jiān)測(cè)到的成骨細(xì)胞數(shù)量明顯低于正常對(duì)照組(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)2:造模過程和實(shí)驗(yàn)1過程一致,其中造模過程中有1只兔子因內(nèi)毒素中毒而導(dǎo)致死亡。在給予藥物干預(yù)觀察效果時(shí),小劑量鎖陽組有1只兔子在灌胃后死亡,第5周安慰對(duì)照組有1只兔子不明原因死亡。1在鎖陽提取液開始干預(yù)時(shí)、4周和8周分別對(duì)各組兔子拍攝雙側(cè)股骨頭X線片以及MRI檢查:安慰對(duì)照組X線顯示股骨頭外觀無改善,關(guān)節(jié)面不清晰,MRI檢查顯示不均勻低信號(hào)區(qū)域面積較之前未變小,關(guān)節(jié)積液較多;小劑量鎖陽組X線顯示股骨頭形態(tài)有所改善,MRI檢查顯示不均勻低信號(hào)區(qū)域面積較有所縮減,僅有少量關(guān)節(jié)積液;大劑量鎖陽組X線顯示股骨頭形態(tài)恢復(fù)正常,關(guān)節(jié)面清晰。MRI檢查顯示不均勻低信號(hào)區(qū)域面積基本修復(fù),之前的關(guān)節(jié)積液消失。2組織學(xué)切片檢查:安慰對(duì)照組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示頭內(nèi)骨小梁排列紊亂、間隙明顯稀疏等情況基本不變。小劑量鎖陽組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示骨小梁排列分布順序稍亂,骨細(xì)胞數(shù)量增多,骨小梁間隙減小。大劑量鎖陽組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示股骨頭壞死情況得到控制并恢復(fù)到正常水平,骨小梁結(jié)構(gòu)清晰,結(jié)構(gòu)正常。3股動(dòng)脈血氧分壓檢測(cè):使用鎖陽喂養(yǎng)后,同一時(shí)間段的3組兔子檢測(cè)顯示的股動(dòng)脈血氧分壓情況由低到高依次是安慰對(duì)照組、小劑量鎖陽組、大劑量鎖陽組,其中在藥物鎖陽干預(yù)8周,大劑量鎖陽組兔子的股動(dòng)脈血氧壓基本恢復(fù)到正常標(biāo)準(zhǔn)。4酶消化法-組織塊法:藥物鎖陽干預(yù)之前,3組新西蘭大白兔的成骨細(xì)胞數(shù)量均較低,無明顯差別;藥物鎖陽干預(yù)第4周及8周的成骨細(xì)胞數(shù)量情況,大劑量鎖陽組小劑量鎖陽組安慰對(duì)照組,(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中實(shí)驗(yàn)12周時(shí),大劑量鎖陽組的成骨細(xì)胞數(shù)量基本恢復(fù)正常水平。結(jié)論:激素性股骨頭壞死過程中,會(huì)有成骨細(xì)胞不足、被抑制,伴有缺血、缺氧等情況,可見壞死進(jìn)程及程度與成骨細(xì)胞增殖數(shù)量成負(fù)相關(guān)。中藥鎖陽中的有效成分具有清除自由基、抗氧化、增強(qiáng)免疫功能等作用,能夠作用于股骨頭壞死中的成骨細(xì)胞,其增殖效果和鎖陽劑量呈正相關(guān),和安慰對(duì)照組相比,作用特點(diǎn)更加明顯。
【學(xué)位單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
實(shí)驗(yàn)1 激素性股骨頭壞死兔子模型的造模實(shí)驗(yàn)
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果
        1 模型過程中的兔子一般狀況
        2 影像學(xué)觀察
        3 股動(dòng)脈血氧分壓檢測(cè)
        4 組織病理學(xué)觀察
        5 酶消化法-組織塊法監(jiān)測(cè)成骨細(xì)胞的情況
實(shí)驗(yàn)2 中藥鎖陽干預(yù)下對(duì)兔SANFH模型成骨細(xì)胞的影響
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
    結(jié)果
        1 實(shí)驗(yàn)過程中兔子一般狀況
        2 影像學(xué)觀察
        3 股動(dòng)脈血氧分壓檢測(cè)
        4 組織病理學(xué)觀察
        5 鎖陽藥物干預(yù)后成骨細(xì)胞培養(yǎng)監(jiān)測(cè)對(duì)比
討論
    1 中醫(yī)對(duì)SANFH的認(rèn)識(shí)
    2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)SANFH的認(rèn)識(shí)
    3 造模的可靠性
    4 藥物的作用探討
    5 問題與展望
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1：實(shí)驗(yàn)室圖片
    附錄2：影像學(xué)圖片
    附錄3：病理圖片
    附錄4：實(shí)驗(yàn)1造模中的成骨細(xì)胞圖片
    附錄5：實(shí)驗(yàn)2藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)中的成骨細(xì)胞圖片
    附錄6：文獻(xiàn)綜述
        參考文獻(xiàn)
    附錄7：在校期間論文論著和獲獎(jiǎng)情況

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2860620