目的:通過激素性股骨頭壞死造模實驗,觀察造模過程中成骨細胞的變化,以及中藥鎖陽對此模型下成骨細胞的影響,研究中藥鎖陽在股骨頭壞死治療中的積極作用,為新的治療方法提供參考依據(jù)。方法:實驗1:通過隨機抽簽法將24只成年的健康新西蘭大白兔分為3組,每組8只新西蘭大白兔,其中1組為正常對照組、1組為2周模型組,另外1組為4周模型組。3組動物同時給予常規(guī)飼料正常喂養(yǎng),正常對照組不采取特殊處理,而在實驗第1天,使用規(guī)格20μg/kg大腸桿菌內(nèi)毒素,通過耳緣靜脈,分別注射于2組兔模型組動物體內(nèi)。在第一次注射大腸桿菌內(nèi)毒素24小時之后,即實驗第2天的同一時間進行第2次注射,注射途徑及藥物劑量保持一致,同時使用20mg/kg甲基強的松龍進行臀部肌肉注射。之后每間隔1天,使用同樣劑量的甲基強的松龍對2組兔模型組進行臀肌注射。2組兔模型在注射大腸桿菌內(nèi)毒素前,每天給予4萬U/rabbit青霉素肌肉注射,預防實驗動物注射內(nèi)毒素發(fā)生感染的情況,實驗開始后每周進行同量的青霉素肌注2次。實驗開始第1天、14天(2周)、28天(4周),對3組兔子進行抽取股動脈血,觀察動脈血氧分壓的差異。在實驗開始時、第2周及第4周,3組實驗動物分別隨機選取2只兔子進行處死,進行影像學檢查、組織病理學切片觀察,根據(jù)組間各項指標的變化及差異性,同時對各組動物模型的股骨頭進行取樣,提取并培養(yǎng)股骨頭內(nèi)的成骨細胞,對照觀察其變化,最終證實造模成功。實驗2:造模方法和實驗1方法一致,在造模過程中,26只實驗動物給予常規(guī)飼料正常喂養(yǎng),4周后即可造模成功。其中有一只兔子死于內(nèi)毒死中毒,造模成功的25只新西蘭大白兔采取隨機抽取,分為3組,分別為安慰對照組、小劑量鎖陽組、大劑量鎖陽組,每組8只。給予藥物干預,每天給予小劑量鎖陽組中的新西蘭兔鎖陽提取液進行灌胃,分早晚兩次進行,灌胃劑量按照50ml/kg計算;大劑量鎖陽組中的新西蘭兔每天使用鎖陽提取液進行兩次灌胃,灌胃劑量按照100ml/kg來換算,相當于230g生藥,分兩次進行灌胃;每天給予安慰對照組中的新西蘭兔進行生理鹽水灌胃,分兩次進行,規(guī)格為100ml/kg。實驗干預前、實驗干預4周后及實驗8周后,對各組動物模型的股骨頭進行取樣,使用經(jīng)典的酶消化法-組織塊法分離,提取并培養(yǎng)股骨頭內(nèi)的成骨細胞,在同一時間段觀察各組成骨細胞增殖及傳代速率。結(jié)果:實驗1:實驗造模的第5天,2周模型組中有1只兔子因內(nèi)毒素中毒而導致死亡,在實驗造模第14天,4周模型組,其中有1只兔子因麻醉不適而死亡。造模4周期間通過影像學檢查、組織學切片檢查、股動脈血氧分壓檢測的指標變化、證實造模成功。1在實驗開始、2周和4周分別對各組兔子拍攝雙側(cè)股骨頭X線片以及MRI檢查:正常對照組X線顯示股骨頭外觀無差異,形態(tài)正常,骨質(zhì)均勻,骨密度正常,未見變化,M RI檢查顯示未見明顯異常,關(guān)節(jié)信號正常;2周造模組X線顯示股骨頭形態(tài)未見明顯變化,但骨密度有所下降,MRI檢查顯示T1、T2加權(quán)像有不均勻低信號出現(xiàn),呈線樣征,關(guān)節(jié)腔內(nèi)伴有關(guān)節(jié)積液;4周造模組X線顯示股骨頭外觀不光滑圓整,關(guān)節(jié)面不清晰,骨密度明顯分布不均,MRI檢查顯示不均勻低信號區(qū)域面積增大,關(guān)節(jié)積液增多。2組織學切片檢查:正常對照組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示頭內(nèi)骨小梁結(jié)構(gòu)排列有序,密度均勻、骨細胞數(shù)量正常。2周模型組新西蘭兔子骨小梁差,骨細胞數(shù)量少,有空骨陷窩出現(xiàn)。4周模型組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示頭內(nèi)骨小梁排列紊亂、間隙明顯稀疏,骨細胞較2周模型組顯著減少,空骨陷窩數(shù)量明顯增多。3股動脈血氧分壓檢測:實驗第1天,3組新西蘭大白兔的股動脈血氧分壓無差別;實驗第14天,2周模型組和4周模型組的股動脈血氧分壓之間差別不明顯(P0.05),相對于正常對照組,2、4周模型組股動脈血氧分壓明顯不足(P0.05);實驗第28天,股動脈血氧分壓情況,正常對照組2周模型組4周模型組,其中4周模型組的股動脈血氧分壓明顯低于正常對照組(P0.01)。4酶消化法-組織塊法:此方法安全有效,分離,提取,培養(yǎng)股骨頭內(nèi)的成骨細胞,實驗第1天,3組新西蘭大白兔的成骨細胞數(shù)量無差別;實驗第14天,2周模型組和4周模型組的成骨細胞數(shù)量差別不明顯(P0.05),2、4周模型組的成骨細胞數(shù)量相較于正常對照組明顯減少(P0.05);實驗第28天,成骨細胞數(shù)量情況,正常對照組2周模型組4周模型組,4周模型組兔子監(jiān)測到的成骨細胞數(shù)量明顯低于正常對照組(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。實驗2:造模過程和實驗1過程一致,其中造模過程中有1只兔子因內(nèi)毒素中毒而導致死亡。在給予藥物干預觀察效果時,小劑量鎖陽組有1只兔子在灌胃后死亡,第5周安慰對照組有1只兔子不明原因死亡。1在鎖陽提取液開始干預時、4周和8周分別對各組兔子拍攝雙側(cè)股骨頭X線片以及MRI檢查:安慰對照組X線顯示股骨頭外觀無改善,關(guān)節(jié)面不清晰,MRI檢查顯示不均勻低信號區(qū)域面積較之前未變小,關(guān)節(jié)積液較多;小劑量鎖陽組X線顯示股骨頭形態(tài)有所改善,MRI檢查顯示不均勻低信號區(qū)域面積較有所縮減,僅有少量關(guān)節(jié)積液;大劑量鎖陽組X線顯示股骨頭形態(tài)恢復正常,關(guān)節(jié)面清晰。MRI檢查顯示不均勻低信號區(qū)域面積基本修復,之前的關(guān)節(jié)積液消失。2組織學切片檢查:安慰對照組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示頭內(nèi)骨小梁排列紊亂、間隙明顯稀疏等情況基本不變。小劑量鎖陽組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示骨小梁排列分布順序稍亂,骨細胞數(shù)量增多,骨小梁間隙減小。大劑量鎖陽組新西蘭兔子股骨頭組織切片顯示股骨頭壞死情況得到控制并恢復到正常水平,骨小梁結(jié)構(gòu)清晰,結(jié)構(gòu)正常。3股動脈血氧分壓檢測:使用鎖陽喂養(yǎng)后,同一時間段的3組兔子檢測顯示的股動脈血氧分壓情況由低到高依次是安慰對照組、小劑量鎖陽組、大劑量鎖陽組,其中在藥物鎖陽干預8周,大劑量鎖陽組兔子的股動脈血氧壓基本恢復到正常標準。4酶消化法-組織塊法:藥物鎖陽干預之前,3組新西蘭大白兔的成骨細胞數(shù)量均較低,無明顯差別;藥物鎖陽干預第4周及8周的成骨細胞數(shù)量情況,大劑量鎖陽組小劑量鎖陽組安慰對照組,(P0.05),有統(tǒng)計學意義,其中實驗12周時,大劑量鎖陽組的成骨細胞數(shù)量基本恢復正常水平。結(jié)論:激素性股骨頭壞死過程中,會有成骨細胞不足、被抑制,伴有缺血、缺氧等情況,可見壞死進程及程度與成骨細胞增殖數(shù)量成負相關(guān)。中藥鎖陽中的有效成分具有清除自由基、抗氧化、增強免疫功能等作用,能夠作用于股骨頭壞死中的成骨細胞,其增殖效果和鎖陽劑量呈正相關(guān),和安慰對照組相比,作用特點更加明顯。
【學位單位】：河南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
實驗1 激素性股骨頭壞死兔子模型的造模實驗
    材料與方法
        1 實驗材料
        2 實驗方法
    結(jié)果
        1 模型過程中的兔子一般狀況
        2 影像學觀察
        3 股動脈血氧分壓檢測
        4 組織病理學觀察
        5 酶消化法-組織塊法監(jiān)測成骨細胞的情況
實驗2 中藥鎖陽干預下對兔SANFH模型成骨細胞的影響
    材料與方法
        1 實驗材料
        2 實驗方法
    結(jié)果
        1 實驗過程中兔子一般狀況
        2 影像學觀察
        3 股動脈血氧分壓檢測
        4 組織病理學觀察
        5 鎖陽藥物干預后成骨細胞培養(yǎng)監(jiān)測對比
討論
    1 中醫(yī)對SANFH的認識
    2 現(xiàn)代醫(yī)學對SANFH的認識
    3 造模的可靠性
    4 藥物的作用探討
    5 問題與展望
結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
    附錄1：實驗室圖片
    附錄2：影像學圖片
    附錄3：病理圖片
    附錄4：實驗1造模中的成骨細胞圖片
    附錄5：實驗2藥物干預實驗中的成骨細胞圖片
    附錄6：文獻綜述
        參考文獻
    附錄7：在校期間論文論著和獲獎情況

【參考文獻】

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本文編號：2860620