阿爾茲海默癥(AD)作為世界第一大老年性的神經(jīng)退行性疾病,給家庭和社會(huì)帶來(lái)難以承受的負(fù)累,因此,發(fā)現(xiàn)與研發(fā)有效的抗AD藥物一直是研究熱點(diǎn)。文獻(xiàn)顯示,大馬士革玫瑰精油具有顯著的抗氧化活性,同時(shí)能夠極大地抑制乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶活性。另外,它也能夠顯著提升大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力,這些結(jié)果提示玫瑰精油具有抗AD的潛力。本研究利用轉(zhuǎn)入Aβ1-42基因的人源化秀麗隱桿線蟲作為AD病理模型,探討苦水玫瑰精油對(duì)于AD線蟲的治療作用,同時(shí)解析其抗AD作用機(jī)制。秀麗隱桿線蟲CL4176株系因轉(zhuǎn)入了人源Aβ1-42蛋白基因,在其體壁肌肉細(xì)胞中可過(guò)度表達(dá)Aβ1-42蛋白從而導(dǎo)致線蟲產(chǎn)生AD樣癥狀的麻痹表型,以苦水玫瑰精油處理CL4176株系線蟲,結(jié)果顯著抑制了受試線蟲的AD樣病理癥狀,且呈明顯的濃度依賴關(guān)系。但是,苦水玫瑰精油的兩個(gè)主要成分香茅醇和香葉醇對(duì)于AD線蟲麻痹作用的逆轉(zhuǎn)作用不及精油本身。另一轉(zhuǎn)基因秀麗隱桿線蟲株系CL2355的神經(jīng)細(xì)胞中大量表達(dá)Aβ1-42蛋白,導(dǎo)致該株系線蟲對(duì)外源性5-HT超敏感,以苦水玫瑰精油處理CL2355,結(jié)果顯示苦水玫瑰精油能夠顯著地扭轉(zhuǎn)因Aβ毒性造成的線蟲對(duì)于外源性5-HT的超敏感,這些結(jié)果支持苦水玫瑰精油對(duì)AD線蟲具有顯著的治療作用。采用肌肉細(xì)胞中組成型表達(dá)人源Aβ1-42蛋白的CL2006株系線蟲模擬AD的進(jìn)行性病程,檢測(cè)苦水玫瑰精油對(duì)Aβ蛋白在線蟲體內(nèi)異常沉積的影響。結(jié)果表明苦水玫瑰精油能夠顯著地抑制Aβ的異常沉積。采用RNAi敲低CL4176株系線蟲skn-1、daf-16和hsf-1基因表達(dá),結(jié)果顯示苦水玫瑰精油對(duì)于skn-1被敲低后的線蟲麻痹行為的逆轉(zhuǎn)作用消失,而daf-16和hsf-1基因敲低則無(wú)影響。同時(shí),苦水玫瑰精油可顯著誘導(dǎo)SKN-1核轉(zhuǎn)位激活及其下游gst-4基因的表達(dá)上調(diào)。最后,WB實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明苦水玫瑰精油顯著下調(diào)秀麗隱桿線蟲體內(nèi)高毒的Aβ寡聚體的水平,以此減輕Aβ蛋白對(duì)機(jī)體的損傷。采用RNAi敲低skn-1的表達(dá),這一作用消失。這些研究結(jié)果表明SKN-1信號(hào)通路參與苦水玫瑰精油對(duì)AD線蟲的治療作用。本研究的結(jié)果將為苦水玫瑰精油的二次開發(fā)及應(yīng)用提供有力的數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 芳香類精油概況
    1.2 芳香類物質(zhì)的藥理學(xué)活性研究概況
    1.3 阿爾茲海默癥及抗阿爾茲海默癥藥物研究進(jìn)展
    1.4 芳香類物質(zhì)抗AD研究進(jìn)展
    1.5 玫瑰精油藥理學(xué)活性概況
    1.6 立論依據(jù)
第二章 苦水玫瑰精油對(duì)AD線蟲的治療作用研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        2.2.1. 實(shí)驗(yàn)生物材料
        2.2.2 試劑、培養(yǎng)基及儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 苦水玫瑰精油藥液的制備
        2.3.2 含有苦水玫瑰精油的NGM培養(yǎng)基的制備
        2.3.3 LB固體培養(yǎng)基的制備
        2.3.4 大腸桿菌OP50的培養(yǎng)
        2.3.5 秀麗隱桿線蟲的同步化
        2.3.6 麻痹實(shí)驗(yàn)
        2.3.7 苦水玫瑰精油對(duì)秀麗隱桿線蟲體內(nèi)轉(zhuǎn)基因外源蛋白GFP表達(dá)的影響
        2.3.8 5-HT敏感性實(shí)驗(yàn)
        2.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 苦水玫瑰精油對(duì)AD線蟲麻痹表型的影響
        2.4.2 苦水玫瑰精油對(duì)線蟲體內(nèi)轉(zhuǎn)基因外源蛋白GFP表達(dá)的影響
        2.4.3 苦水玫瑰精油對(duì)AD秀麗隱桿線蟲 5-HT超敏感性的影響
        2.4.4 苦水玫瑰精油GC-MS分析
        2.4.5 苦水玫瑰精油主要成分citronellol和geraniol對(duì)AD線蟲麻痹表型的影響
    2.5 討論
第三章 苦水玫瑰精油抗AD作用的機(jī)制研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)生物材料
        3.2.2 試劑、培養(yǎng)基及儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 不同濃度苦水玫瑰精油的制備
        3.3.2 含有苦水玫瑰精油的NGM培養(yǎng)基的制備
        3.3.3 RNAi實(shí)驗(yàn)LB固體培養(yǎng)基的制備
        3.3.4 RNAi實(shí)驗(yàn)干擾菌的培養(yǎng)
        3.3.5 秀麗隱桿線蟲的同步化
        3.3.6 秀麗隱桿線蟲體內(nèi)Aβ 蛋白沉積物數(shù)量的分析
        3.3.7 秀麗隱桿線蟲RNAi實(shí)驗(yàn)
        3.3.8 秀麗隱桿線蟲DAF-16::GFP核轉(zhuǎn)位實(shí)驗(yàn)
        3.3.9 秀麗隱桿線蟲SKN-1b::GFP核轉(zhuǎn)位實(shí)驗(yàn)
        3.3.10 秀麗隱桿線蟲gst-4p::GFP基因表達(dá)強(qiáng)度分析實(shí)驗(yàn)
        3.3.11 western blot實(shí)驗(yàn)
        3.3.12 數(shù)據(jù)處理與分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 苦水玫瑰精油對(duì)秀麗隱桿線蟲咽部肌肉組織中淀粉樣斑數(shù)量的影響
        3.4.2 苦水玫瑰精油對(duì)SKN-1 分子信號(hào)通路的影響
        3.4.3 苦水玫瑰精油對(duì)DAF-16 分子信號(hào)通路的影響
        3.4.4 苦水玫瑰精油對(duì)HSF-1 分子信號(hào)通路的影響
        3.4.5 苦水玫瑰精油對(duì)AD線蟲體內(nèi)Aβ 寡聚體的水平的影響
    3.5 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在校期間研究成果
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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