目的研究三七醇提物降低秀麗隱桿線蟲脂肪沉積的作用以及可能的分子機制。方法本研究采用秀麗隱桿線蟲為模式生物,三七醇提物以不同劑量給藥后,觀察對線蟲的壽命、生殖和抗逆性的影響;采用油紅O染色法,觀察了線蟲體內(nèi)脂肪沉積的變化;同時,檢測了線蟲體內(nèi)的甘油三酯含量和脂肪代謝相關的基因acs-2、pod-2、fat-5的表達水平。結果與對照組比較:三七醇提物不同給藥劑量組均能延長線蟲的壽命,增強抗逆性,且高劑量組更為顯著(P 0.01);對線蟲生殖能力沒有影響;油紅O染色結果顯示,三七醇提物可顯著降低線蟲腸道脂肪沉積(P 0.01);三七醇提物高劑量組還能顯著降低甘油三酯的含量(P 0.05),并影響與脂肪代謝相關基因表達水平,其中acs-2 mRNA被上調(diào),pod-2、fat-5mRNA被下調(diào)(P 0.05)。結論三七醇提物在不影響線蟲生命特征的前提下,可減少線蟲體內(nèi)脂肪沉積,對甘油三酯水平及脂肪代謝相關的基因表達水平有調(diào)控作用。
【部分圖文】：

將同步化至L4期的線蟲給藥處理4 d后，破碎蟲體,Trizol法提取線蟲總RNA，測定總RNA的濃度及純度后，在逆轉(zhuǎn)錄酶催化下合成cDNA，繼而進行acs-2mRNA、pod-2 mRNA、fat-5 mRNA的RT-PCR含量測定[14-15]。所用的引物序列：acs-2 mRNA上游引物：5"-AGTGAGACTTGACAGTTCCG-3"，下游引物：5"-CTTGTAAGAGAGGAATGGCTC-3";Pod-2 mRNA上游引物：5"-TATGCGATGCCTGATGACTG-3"，下游引物：5"-TGTCTCCCAAACTGAACATAGC-3";Fat-5 mRNA上游引物：5"-TGAACTGGACCCGAGTATTGA-3"，下游引物：5"-ACAGCCGAACTTCTTGCACT-3"。擴增結束后計算擴增效率，采用2-ΔΔCT法計算相對基因表達。2.9 統(tǒng)計學分析

為了分析三七醇提物對秀麗隱桿線蟲抗逆性的影響，分別開展了熱應激實驗和氧化應激實驗。與對照組相比，熱應激條件下，不同劑量的三七醇提物均能使線蟲生存曲線右移，增強線蟲的耐熱能力，結果見圖3。與對照組相比，三七醇提物0.8 mg/mL劑量組線蟲平均壽命增加了25.30%(P<0.05),1.6 mg/mL劑量組線蟲平均壽命增加了40.05%(P<0.01）。與對照組相比，氧化應激條件下，不同劑量的三七醇提物均能使線蟲生存曲線右移，增強線蟲的抗氧化能力，結果見圖4。與對照組比較，三七醇提物0.8 mg/mL劑量組線蟲平均壽命增加25.77%(P<0.05),1.6 mg/mL劑量組線蟲平均壽命增加了35.88%(P<0.01）。由此可知，三七可顯著增強線蟲對熱應激和氧化應激耐受能力，改善線蟲的抗逆性。3.4 甘油三酯含量測定

如圖6 A所示，油紅O將線蟲腸道脂肪染為紅色，顏色鮮艷并且容易觀察，染色效果良好。對圖片應用ImageJ軟件進行灰度分析，以量化數(shù)據(jù)。研究結果表明，用三七醇提物處理的線蟲的脂肪沉積程度明顯低于對照線蟲。與對照組相比，陽性對照藥1.0 mg/mL絞股藍總皂苷處理的線蟲腸道脂質(zhì)含量下降了59.41%(P<0.05），用三七醇提物處理的線蟲在0.8mg/mL和1.6 mg/mL劑量下的腸道脂質(zhì)含量分別下降了21.20%和52.83%(P<0.05）；高劑量組與陽性藥比較無顯著差異，表明兩者效果相當（P>0.05）。圖4 氧化應激條件下三七對秀麗線蟲生存率的影響
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