發(fā)布時間：2020-10-26 02:26

　　 研究的目的和意義:胃癌作為全球最常見的惡性腫瘤之一,嚴重危害人類生命和健康。我國是胃癌高發(fā)區(qū),在我國惡性腫瘤的死因中,胃癌排列第二。目前,對于胃癌的治療仍以包括手術切除、放化療、靶向治療和免疫治療在內(nèi)的多學科綜合性治療為主,但預后不甚樂觀,5年總生存率不到3 0%。其中,腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移直接影響了胃癌的治療及預后。腫瘤的轉(zhuǎn)移是受多環(huán)節(jié)、多因素調(diào)控的復雜且多步驟的過程,腫瘤細胞向周圍正常組織浸潤并發(fā)生轉(zhuǎn)移是通過細胞外基質(zhì)(ECM)的降解這一基本途徑實現(xiàn)的。相關研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)在這一過程中發(fā)揮了重要作用,其中,作為MMPs家族中重要成員的MMP-2和MMP-9已被多數(shù)研究證實與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移最為密切相關。目前,中醫(yī)藥治療腫瘤在臨床上已經(jīng)獲得了顯著的療效,尤其在穩(wěn)定瘤體、降低腫瘤復發(fā)、減輕放化療的毒副作用、提高患者生活質(zhì)量、增強免疫力等方面展現(xiàn)出了獨特的優(yōu)勢。消癌解毒方是由國醫(yī)大師周仲瑛教授根據(jù)長期的臨床實踐及經(jīng)驗總結,并在其提出的癌毒學說指導下,所創(chuàng)制的具有化痰祛瘀、益氣養(yǎng)陰、抗癌祛毒等功效的抗腫瘤驗方。消癌解毒方已被證實在臨床治療具有顯著的優(yōu)勢;實驗研究證實消癌解毒方對肺癌、肝癌均有明顯的抗癌作用,但是其對胃癌的作用及機制尚有待進一步研究證實。麥冬作為組成此抗癌方劑中一味不可或缺的中藥,具有包括抗腫瘤作用在內(nèi)的多種藥理作用。甾體皂苷類、高異黃酮類、多糖類及氨基酸類等均是從麥冬中分離出的主要化合物。其中,麥冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)是從麥冬中分離提取的一種甾體皂苷類單體成分,具有明顯的抗癌作用,本實驗旨在觀察麥冬皂苷B對人胃癌細胞MGC-803增殖、侵襲轉(zhuǎn)移及凋亡的影響,并進一步探討其抗胃癌作用的機制。方法:通過查閱相關文獻資料,挑選出低分化人胃癌MGC-803細胞作為研究對象。體外培養(yǎng)人胃癌MGC-803細胞,利用CCK-8法觀察麥冬皂苷B對其增殖的影響;通過細胞侵襲實驗觀察麥冬皂苷B對人胃癌MGC-803細胞侵襲能力的變化;通過劃痕實驗檢測麥冬皂苷B對人胃癌MGC-803細胞遷移能力的影響;Western Blot技術從蛋白水平驗證麥冬皂苷B對人胃癌MGC-803細胞中MMP-2、MMP-9蛋白表達水平的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法結合流式細胞術檢測麥冬皂苷B對MGC-803細胞凋亡率的影響。結果:1.麥冬皂苷B作用人胃癌MGC-803細胞24 h,48 h后,相較于空白組,麥冬皂苷B能夠顯著地抑制MGC-803細胞增殖,并且表現(xiàn)出一定的濃度依賴效應。2.麥冬皂苷B作用MGC-803細胞24 h后,相較于空白對照組,麥冬皂苷B能明顯抑制MGC-803細胞的侵襲能力,在10μmol/L和15μmol/L濃度中,用藥組細胞侵襲數(shù)目明顯低于空白對照組,并且呈現(xiàn)出濃度依賴效應。3.細胞劃痕實驗顯示,相較于對照組,麥冬皂苷B對MGC-803細胞的遷移能力有顯著抑制,并表現(xiàn)出濃度依賴效應。4.Western Bolt實驗證明麥冬皂苷B能下調(diào)MGC-803細胞中MMP-2、MMP-9蛋白表達。5.麥冬皂苷B作用于MGC-803細胞后,顯示出顯著的促凋亡作用。結論:1.麥冬皂苷B能夠抑制人胃癌細胞MGC-803增殖。2.麥冬皂苷B可抑制MGC-803細胞的侵襲和遷移能力。3.麥冬皂苷B可能通過下調(diào)MGC-803細胞中MMP-2、MMP-9蛋白表達,從而發(fā)揮抗癌作用。4.麥冬皂苷B可以顯著增加MGC-803細胞的凋亡,這可能也是其抗胃癌作用的另一途徑。
【學位單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

當其濃度達到２０?ｐｍｏＩ／Ｌ時，對ＭＧＣ－８０３細胞２４?ｈ、４８?ｈ的抑制率分別達到了?６８．９０％ｔｌ．０１°／〇??和８４．４６％±０．３１％。與空白對照組相比較，該差異具有統(tǒng)計學意義（／）＜０．０５），結果見表??１和圖１。??表１不同濃度麥冬皂苷Ｂ對人胃癌ＭＧＣ－８０３細胞增殖抑制率（ｉ土ｓ，ｎ＝６）????２４ｈ?４８ｈ???２０?６８．９０％ｔｌ．０１°／〇＊?８４．４６％±０．３１％＊??１５?５２．５７％±２．３１％＊?５３．２０％ｔ２．６６°／〇＊??１０?４２．５５％ｔ２．５５％＊?２６．１４％±３．２５％＊??５?２６．１５％ｔ２．１１％＊?１６．７０％ｔｌ．７７°／〇＊??１?１８．４１％±４．１４％＊?７．９５％±１．０９％＊??０．１?１５．９１％ｔ５．５４％＊?６．０５％ｔ５．８９°／〇＊??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０．００％?０．００％??ｌｉ??

的麥冬皂苷Ｂ來進行對其侵襲和遷移能力的檢測。用麥冬皂苷Ｂ處理細胞２４?ｈ后，ＭＧＣ－８０３??細胞的穿膜數(shù)目相對于空白組明顯減少，差異具有統(tǒng)計學意義（ｐ＜〇．〇５），并且隨著ＯＰ－Ｂ??濃度的增加，其抑制作用增強，如圖２所示，５、１０、１５?ｐｍｏｌ／Ｌ麥冬皂苷Ｂ對細胞侵襲的??抑制率分別為１７．３％、４２．７％、６８％。由此可見，麥冬皂苷Ｂ能夠有效的抑制ＭＧＣ－８０３細??胞遷移能力。??Ａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?０Ｐ－Ｂ５ｍＭ?ＯＰ－Ｂ?１０ｐＭ?ＯＰ－Ｂ１５ｐＭ??ｍｍｍｍ??ｂ?，Ｓ］??〇?ｔ?＊??ＩＳ０５＇?？??一?．，－Ｔ－??〇－０ｌ．．．ｌ？－，Ｔ．．ｌｌＩｎｉ．．，．—■ｒ．．．Ｊ￣￣ｒ—＊??Ｃｃ？ｎｔｆ〇］?５ｐＭ?１０?１５｜｜Ｍ??＂ｏｐ＾ａ￣??圖２?ＯＰ－Ｂ對ＭＧＣ－８０３細胞侵襲能力的影響??Ａ：?ＯＰ－Ｂ作用２４?ｈ實驗組與空白組細胞侵襲圖，Ｂ：侵襲抑制率統(tǒng)計圖，＝＊＞＜０．０５。??３．２麥冬皂苷Ｂ可以抑制人胃癌ＭＧＣ－８０３細胞遷移??劃痕實驗結果顯示，質(zhì)量濃度分別為５、１０、１５?ｐｍｏｌ／Ｌ的麥冬皂苷Ｂ作用人胃癌??１６??

ｏｉｔｒ５ｊｉ＊?１〇｛＾?Ｓ＾ｖｌ??ＯＦ－Ｂ??圖３?ＯＰ－Ｂ對ＭＧＣ－８０３細胞遷移能力的影響??Ａ：?ＯＰ－Ｂ抑制胃癌細胞遷移能力的細胞劃痕實驗，Ｂ：劃痕結果統(tǒng)計圖，＊／７＜麥冬皂苷Ｂ可以下調(diào)人胃癌ＭＧＣ－８０３細胞中ＭＭＰ－２、
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 鞏克民;趙懷清;張鵬威;;RP-HPLC法測定麥冬中麥冬皂苷D’的含量[J];分析儀器;2014年02期

2 蔣鳳榮;張旭;洪艷麗;;麥冬皂苷D對過氧化氫造模的HUVEC保護作用機制研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2008年09期

3 鄧惠方;王東明;富瑤瑤;胡雪蓮;魚紅閃;金鳳燮;;麥冬皂苷D的分離提純[J];大連工業(yè)大學學報;2011年04期

4 樓黎明;金若敏;符勝光;沈嵐;馮怡;朱莉;;麥冬皂苷腸溶微球制劑對大鼠胃黏膜的影響[J];中藥新藥與臨床藥理;2008年04期

5 沈嵐,徐德生,馮怡,林曉,吳笑如;大鼠腸內(nèi)菌對麥冬皂苷D′代謝的研究[J];中國中藥雜志;2005年08期

6 沈嵐,徐德生,馮怡,姜玲海,劉玉敏,賴奕堅;液質(zhì)聯(lián)用研究麥冬皂苷腸溶微球在大鼠體內(nèi)的相對生物利用度[J];中草藥;2005年05期

7 陽美平;吳皓;尹蓮;張旭;段金廒;;麥冬皂苷和多糖類成分的研究進展[J];中華中醫(yī)藥學刊;2008年10期

8 沈嵐;何海英;馮怡;徐德生;林曉;;麥冬皂苷腸溶微球體外釋藥影響因素研究[J];中成藥;2009年11期

9 盧克剛;張紅霞;趙云龍;;川麥冬中麥冬皂苷D對照品的制備[J];中國當代醫(yī)藥;2009年20期

10 王亮;周子娟;詹紅微;雒東;陳大朋;王靖宇;;麥冬皂苷D對細菌脂多糖所致小腸上皮細胞損傷的保護作用[J];沈陽藥科大學學報;2017年06期

相關博士學位論文 前4條

1 武曉群;沙參麥冬湯和麥冬皂苷D延緩衰老的作用及機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2012年

2 陳美娟;麥冬皂苷類成分對NSCLC的體外抑制作用及相關機理研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2014年

3 吳茵;基于液質(zhì)聯(lián)用技術的麥冬化學成分分析與藥代動力學研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 王艷翠;麥冬化學和營養(yǎng)成分及其體外活性的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

相關碩士學位論文 前10條

1 楊婧;麥冬皂苷B對人胃癌MGC-803細胞抑制作用的研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2019年

2 鄧惠方;麥冬皂苷D的分離純化和麥冬多糖的研究[D];大連工業(yè)大學;2011年

3 任思嘉;麥冬皂苷D’致心臟毒性的發(fā)現(xiàn)及其機制研究[D];廣西醫(yī)科大學;2018年

4 解千;酶法分離提取麥冬寡糖和麥冬皂苷[D];大連工業(yè)大學;2012年

5 孟晨;麥冬皂苷D對阿霉素誘導心肌自噬損傷的保護作用[D];南京師范大學;2014年

6 油文亭;麥冬皂苷D通過CYP2J3/EETs系統(tǒng)發(fā)揮心肌保護作用的分子機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

7 朱業(yè)芹;湖北麥冬關鍵種植技術研究[D];湖北中醫(yī)學院;2007年

8 王遠;麥冬皂苷D誘導CYP2J產(chǎn)生抗心肌肥大機制研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

9 張紅曦;參麥注射液及其有效成分對藥物代謝酶的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

10 徐兢博;麥冬多糖及其酶水解產(chǎn)物分離純化和初級結構分析[D];大連工業(yè)大學;2010年

本文編號：2856349