論文一化瘀祛痰方對FFA誘導(dǎo)Hep G2細胞脂質(zhì)沉積及自噬的影響目的:采用血清藥理學(xué)方法觀察化瘀祛痰方對FFA誘導(dǎo)Hep G2細胞脂質(zhì)沉積及自噬水平的影響,探討化瘀祛痰方防治高脂血癥的可能作用機制。材料與方法:以摩爾比2:1不同終濃度油酸和棕櫚酸的混合液誘導(dǎo)培養(yǎng)Hep G2細胞24h,采用CCK-8、油紅O染色與光電比色法篩選出建立最佳Hep G2細胞脂質(zhì)沉積模型的誘導(dǎo)濃度;采用CCK-8法確定各組大鼠含藥血清作用度;實驗分為4組:空白對照組、模型組、化瘀祛痰方組和辛伐他汀組,采用油紅O染色和光電比色法觀察化瘀祛痰方對FFA誘導(dǎo)Hep G2細胞脂質(zhì)沉積的影響,采用Western Blot法檢測化瘀祛痰方對自噬相關(guān)指標Atg3與Atg5的影響。結(jié)果:1.CCK-8法顯示,經(jīng)不同終濃度油酸和棕櫚酸混合液誘導(dǎo)24h后,當其終濃度超過1mmol/L時對Hep G2細胞活力的抑制率較大。2.與胎牛空白血清組相比,經(jīng)濃度分別為5%、10%、15%的大鼠空白血清、化瘀祛痰方含藥血清及辛伐他汀含藥血清培養(yǎng)48h后,10%含藥血清濃度對細胞活力影響最小。3.油紅O法顯示,與空白對照組相比,模型組細胞內(nèi)脂滴形成顯著增多;與模型組相比,辛伐他汀組、化瘀祛痰方組細胞內(nèi)脂滴形成顯著減少。4.光電比色法顯示,與空白對照組相比,模型組細胞內(nèi)TG含量顯著增多(p0.05);與模型組相比,辛伐他汀組、化瘀祛痰方組細胞內(nèi)TG含量顯著降低(p0.05)。5.Western Blot法顯示,3h:與模型組比較,化瘀祛痰方組Atg3與Atg5表達顯著增加(p0.05);6h:與空白對照組相比,模型組Hep G2細胞內(nèi)Atg3與Atg5表達顯著增加(p0.05),與模型組比較,化瘀祛痰方組Atg3與Atg5表達顯著增加(p0.05);12h:各組間Atg3與Atg5表達含量無顯著差異。結(jié)論:1.Hep G2細胞經(jīng)濃度1mmol/L油酸和棕櫚酸(摩爾比2:1)混合液作用24h后能成功復(fù)制脂質(zhì)沉積模型。2.化瘀祛痰方能有效改善油酸和棕櫚酸混合液誘導(dǎo)Hep G2細胞脂質(zhì)沉積的水平。3.化瘀祛痰方可能通過上調(diào)Hep G2細胞自噬水平有效降低油酸和棕櫚酸混合液誘導(dǎo)Hep G2細胞脂質(zhì)沉積的水平。論文二化瘀祛痰方通過抑制PI3K/AKT/m TOR信號通路減輕FFA誘導(dǎo)的Hep G2細胞脂質(zhì)沉積目的:基于PI3K/AKT/m TOR信號通路探討化瘀祛痰方減輕FFA誘導(dǎo)Hep G2細胞脂質(zhì)沉積的可能作用機制。材料與方法:體外培養(yǎng)Hep G2細胞,隨機分為5組:正常對照組、模型組、LY294002組、化瘀祛痰方組、化瘀祛痰方聯(lián)合LY294002組。采用油紅O染色和細胞內(nèi)TG含量測定法檢測各組Hep G2細胞脂質(zhì)沉積情況;采用免疫熒光細胞化學(xué)染色法觀察各組LC3B的表達;采用Western Blot法檢測各組p-AKT、p-m TOR、LC3A/B、SREBP-1c的水平;采用Q-PCR法檢測SREBP-1c、LC3B m RNA表達水平。結(jié)果:1.油紅O法顯示,與正常對照組相比,模型組細胞內(nèi)的脂滴呈明顯增多趨勢;與模型組相比:LY294002組細胞內(nèi)的脂滴無顯著變化,化瘀祛痰方組、化瘀祛痰方聯(lián)合LY294002組的脂滴明顯減少。2.光電比色法顯示,與正常對照組相比,模型組細胞內(nèi)TG含量顯著增加(P0.05);與模型組相比:LY294002組細胞內(nèi)TG含量無顯著變化,化瘀祛痰方組、化瘀祛痰方聯(lián)合LY294002組TG含量顯著減少(P0.05)。3.免疫熒光法顯示,正常對照組和LY294002組細胞LC3B呈微弱表達,模型組呈陽性表達,化瘀祛痰方組、化瘀祛痰方聯(lián)合LY294002組LC3B呈強陽性表達。4.Western Blot法顯示,與正常對照組相比,模型組p-AKT、p-m TOR蛋白水平顯著降低(p0.05),SREBP-1c蛋白、LC3B蛋白表達水平顯著升高(P0.05);與模型組相比,LY294002組p-AKT、p-m TOR、LC3B蛋白水平顯著降低(p0.05),SREBP-1c蛋白表達無顯著變化,化瘀祛痰方組及化瘀祛痰方聯(lián)合LY294002組p-AKT、p-m TOR、SREBP-1c蛋白水平顯著降低(p0.05),LC3B蛋白表達水平顯著升高(P0.05)。5.Q-PCR法顯示,與正常對照組相比,模型組細胞內(nèi)SREBP-1c、LC3B m RNA表達水平顯著升高(P0.05);與模型組相比,LY294002組SREBP-1c m RNA表達水平無顯著變化,LC3B m RNA表達水平顯著降低(P0.05),化瘀祛痰方組和化瘀祛痰方聯(lián)合LY294002組SREBP-1c m RNA顯著降低(P0.05),LC3B m RNA表達水平顯著升高(P0.05)。結(jié)論:1.化瘀祛痰方有效改善油酸和棕櫚酸混合液誘導(dǎo)Hep G2細胞脂質(zhì)沉積水平的機制可能與抑制PI3K/AKT/m TOR信號通路相關(guān)蛋白表達有關(guān)。
【學(xué)位單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

化瘀祛痰方對 FFA 誘導(dǎo) HepG2 細胞脂質(zhì)沉積的影響及機制研究實驗結(jié)果積 HepG2 細胞模型最佳誘導(dǎo)濃度確定養(yǎng)細胞進行形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，油酸和棕櫚酸混合液作用24h后，其終濃度1mm浮細胞較少。CCK-8 實驗結(jié)果，見圖 1，當其終濃度超過 1mmol/L 時 OD對細胞活力的抑制率較大。細胞經(jīng)油紅 O 染色后光學(xué)顯微鏡觀察可見，對清晰，胞漿豐富，細胞內(nèi)未見紅色脂滴；實驗組則隨著誘導(dǎo)劑濃度的增加滴呈遞增趨勢，當誘導(dǎo)劑濃度等于 1mmol/L 脂滴形成最多，且細胞狀態(tài)良濃度大于 1mmol/L 時，部分細胞漂浮，脂滴形成開始減少，當誘導(dǎo)劑濃度 時，細胞數(shù)量顯著減少，無明顯脂滴形成，見圖 2。結(jié)合 CCK-8 實驗結(jié)果為 1mmol/L 的油酸和棕櫚酸混合液作為最佳作用濃度。

劑濃度大于 1mmol/L 時，部分細胞漂浮，脂滴形成開始減少，當誘導(dǎo)劑濃/L 時，細胞數(shù)量顯著減少，無明顯脂滴形成，見圖 2。結(jié)合 CCK-8 實驗結(jié)度為 1mmol/L 的油酸和棕櫚酸混合液作為最佳作用濃度。圖 1 CCK8 法觀察不同終濃度油酸和棕櫚酸混合液對 HepG2 細胞活力的

質(zhì)沉積模型特征，見表 1。 1mmol/L的油酸和棕櫚酸混合液誘導(dǎo)24h后的各組HepG2細胞內(nèi)TG 含量及培養(yǎng)液ST、ALT 含量變化檢測指標 空白對照組 模型組TG(mmol/L) 1.26±0.18 7.6±0.69*AST(U/L) 7.69±0.48 8.04±0.39ALT(U/L) 5.57±0.31 5.99±0.57.05 vs 空白對照組；瘀祛痰方對脂質(zhì)沉積 HepG2 細胞模型的影響CCK-8 法確定含藥血清無毒性給藥濃度與胎牛血清對照組相比，經(jīng)濃度分別為 5%、10%、15%的大鼠空白血清、化瘀祛痰藥血清及辛伐他汀含藥血清培養(yǎng) 48h 后，HepG2 細胞在各組 10%含藥血清濃度培養(yǎng)長狀況良好，見圖 3。
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本文編號：2856324