目的:參考中醫(yī)古籍關于元氣的論述,通過手術切除右腎作為元氣虧虛模型,并以切除左腎作為對照組,使用培元固本健腦法進行干預,觀察klotho(kl)蛋白及相關蛋白在腎和海馬的表達和培元固本健腦法的干預效果,探討元氣虧虛對腎功能、記憶功能的影響,培元固本健腦法對腎和海馬的干預作用及機制。方法:1.理論探討:通過整理中醫(yī)古籍文獻和研究進展,分析中醫(yī)學元氣的作用,現(xiàn)代疾病與元氣的關系,其他虛證動物模型對元氣虧虛動物模型的借鑒意義,為元氣虧虛動物模型的建立提供理論基礎。2.實驗研究:以空白組作為對照組,以單側腎切除大鼠作為元氣虧虛動物模型,使用培元固本健腦法進行干預,隨機分為模型組、左腎組、固本健腦方高劑量組(固高組)、固本健腦方中劑量組(固中組)和固本健腦方低劑量組(固低組)。以kl蛋白為切入點,探索單側腎切除作為元氣虧虛動物模型的可行性;以左側、右側分別腎切除,探索命門與腎的關系;觀察單側腎切除腎功能、血常規(guī);通過自發(fā)活動、Morris水迷宮,探討元氣虧虛動物模型的學習、記憶能力;使用ELISA方法檢測kl蛋白、TNF-α、IL-6和8-OHDG的變化;使用Real-time PCR和western blot方法,檢測腎臟、海馬kl、NF-κB和MAPK1 mRNA和蛋白表達;觀察元氣虧虛大鼠腎臟和海馬的病理改變。結果:1.(1)一般情況單側腎切除大鼠普遍出現(xiàn)毛發(fā)枯黃、活動減少,部分出現(xiàn)躁動、大便稀溏、喘息;左腎切除與右腎切除兩者之間一般情況沒有明顯差別。(2)各組不同時間點體重和處死后腎重的比較:術前各組體重比較,無明顯差異(p0.05);術后1周,固高組低于固低組(p0.05);術后2周、4周、6周、8周體各組間體重沒有明顯改變(p0.05)。8周處死后,腎重比較,模型組、左腎組、固高組、固中組和固低組均大于空白組(p0.05)。(3)各組大鼠腎功能、血常規(guī)檢測與模型組比較:尿素氮比較,各組之間沒有明顯差異(p0.05)。血肌酐比較,模型組、左腎組、固低組高于空白組(p0.05);左腎組、固低組低于模型組(p0.05);固中組、固高組低于模型組、左腎組和固低組(p0.05)。各組血WBC、RBC沒有差異(p0.05);Hb比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.05);固高組、固中組高于模型組、左腎組(p0.05)。2.元氣虧虛大鼠行為學研究及培元固本健腦法的干預作用:(1)自發(fā)活動檢測結果:自發(fā)活動總路程比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組低于空白組(p0.05),固高組、固中組高于模型組和左腎組(p0.05);平均速度比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組低于空白組,高于模型組和左腎組(p0.05);休息時間比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組高于空白組,少于模型組和左腎組(p0.05);中央時間,模型組、左腎組少于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組少于空白組,多與模型組和左腎組(p0.05)。(2)大鼠Morris水迷宮定位航行和空間探查實驗結果:90s游泳找到平臺總路程比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組高于空白組,低于模型組和左腎組(p0.05);平均速度比較,模型組和左腎組比空白組慢(p0.01),固高組、固中組、固低組比空白組慢(p0.05),固高組比模型組和左腎組快(p0.05);第一次抵原平臺時間,模型組、左腎組多與空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組比空白組慢(p0.05),比模型組和左腎組快(p0.05);穿越平臺次數(shù),模型組、左腎組少于空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組少于空白組(p0.05),固高組、固中組多于模型組和左腎組(p0.05)。3.元氣虧虛大鼠炎癥因子及氧化應激反應及培元固本健腦法的干預作用:ELISA法檢測血清結果:各組血清kl蛋白濃度比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01);固高組、固中組、固低組低于空白組,高于模型組和左腎組(p0.05)。血清TNF-α濃度比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組和固低組低于模型組和左腎組(p0.05)。血清IL-6濃度比較,模型組、左腎組分別高于空白組(p0.01,0.05);固高組、固中組、固低組高于空白組和模型組(p0.05);固高組低于左腎組(p0.05)。血清8-OHDG濃度比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01);固高組低于模型組和左腎組、固低組(p0.05);固中組、固低組高于空白組、低于模型組和左腎組(p0.05)。4.元氣虧虛大鼠腎臟、海馬kl、MAPK1、NF-κB的表達及培元固本健腦法的干預作用Real-time PCR檢測腎臟組織結果:(1)kl mRNA比較,模型組、左腎組、固低組低于空白組(p0.01),固中組和固高組低于空白組(p0.05);固中組和固高組高于模型組和左腎組(p0.05)。(2)NF-κB mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組高于空白組(p0.05),低于模型組和左腎組(p0.05)。(3)MAPK1 mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固高組、固中組、固低組高于空白組(p0.05),固中組、固高組低于模型組和左腎組(p0.05)。Real-time PCR檢測海馬組織結果:(1)Kl mRNA比較,模型組、左腎組、固低組、固中組低于空白組(p0.01),固高組低于空白組(p0.05);固低組、固中組和固高組高于模型組(p0.05),固中組、固高組高于左腎組(p0.05)。(2)NF-κB mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01);固高組、固中組、固低組高于空白組,低于左腎組(p0.05)。(3)MAPK1 mRNA比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.05),固低組、固中組和固高組低于模型組(p0.05)。western blot檢測腎臟組織結果:(1)Kl比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01),固低組、固中組和固高組低于空白組(p0.05);固中組、固高組高于模型組和左腎組(p0.05)。(2)NF-κB P65比較,模型組、左腎組高于空白組(p0.01),固低組、固中組、固高組高于空白組(p0.05),低于模型組和左腎組(p0.05)。(3)MAPK1比較,模型組、空白組高于空白組(p0.05);固低組、固中組和固高組低于模型組、左腎組(p0.05)。western blot檢測海馬組織結果:(1)Kl比較,模型組、左腎組低于空白組(p0.01)、固低組、固中組低于空白組(p0.05);固低組、固中組、固高組高于模型組和左腎組(p0.05)。(2)NF-κB比較,模型組和左腎組高于空白組(p0.01),固低組高于空白組(p0.05);固低組、固中組、固高組低于模型組和左腎組(p0.05)。(3)MAPK1比較,模型組、左腎組、固低組、固中組和固高組均高于空白組(p0.05)。5.元氣虧虛大鼠腎和海馬病理改變及培元固本健腦法的干預作用光鏡下觀察腎臟組織:空白組大鼠腎小球形態(tài)正常,腎小管形態(tài)正常。模型組腎小球增生,系膜基質(zhì)增生,細胞增生,胞漿可見紅染顆粒,近曲小管上皮細胞壞死、腫脹。左腎組腎小球肥大,細胞增多,鮑曼氏腔狹窄,腎小管形態(tài)基本正常,刷狀緣清晰。固低組腎小球肥大,紅細胞增多,毛細血管內(nèi)內(nèi)皮細胞增生,毛細血管擴張,腎間質(zhì)無明顯改變。固中組腎小球肥大,系膜基質(zhì)增生,腎間質(zhì)無明顯改變。固高組腎小球肥大,系膜增生,毛細血管內(nèi)皮細胞增生明顯,腎間質(zhì)充血。光鏡下觀察海馬組織:空白組錐體細胞層次排列整齊,無明顯病理改變;模型組局部可見錐體細胞層次排列欠整齊,可見錐體細胞變性(細胞腫脹,胞漿淡染),壞死(核固縮);左腎組錐體細胞排列層次尚可,變性、壞死程度比模型組輕;固低組錐體細胞層次尚可,變性、壞死程度較模型組、左腎組輕;固中組錐體細胞層次尚可,變性、壞死程度較固低組輕;固高組錐體細胞排列層次尚可,變性壞死程度較輕。結論:(1)單側腎切除大鼠表現(xiàn)出與元氣虧虛相似的癥狀,可以作為元氣虧虛動物模型的其中一種。(2)培元固本健腦法可以改善元氣虧虛大鼠腎臟、腦的功能,其機制可能與促進kl蛋白表達,從而抑制炎癥和氧化應激有關。(3)Kl蛋白或可作為反映元氣盛衰的參考指標之一,而炎癥和氧化可能是損害元氣的主要因素之一。(4)左腎和右腎在腎功能、kl蛋白表達、對學習記憶的影響等方面無明顯的差別,因此左腎為腎,右腎為命門的說法仍需要進一步研究來證實。
【學位單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

表 1-1 各組大鼠不同時間點體重和處死后腎臟重的比較（x±s,g）組別 術前 術后 1 周 術后 2 周 術后 4 周 術后 6 周 術后 8 周 處死后腎重空白組 369.20±25.64388.40±27.09440.00±22.15461.80±32.53487.20±35.77491.20±34.122.56±0.14模型組 361.00±25.77380.00±23.74406.40±21.92454.80±19.38489.20±28.03424.20±43.823.0440±0.22*左腎組 348.80±26.82370.00±18.66428.00±24.50459.20±29.57480.40±35.13436.00±34.863.1080±0.13*固低組 373.60±30.17408.00±22.63434.60±28.59473.40±29.51440.20±33.58447.80±32.983.0600±0.18*固中組 346.20±26.11378.00±31.64449.80±36.187470.00±37.39495.00±36.67461.60±40.423.1500±0.28*固高組 337.60±19.16354.60±17.61410.40±28.96436.40±31.64456.40±36.22486.60±40.403.0020±0.23*注：與空白組比較，*p＜0.05，與固低組比較， p＜0.05

±26.11±31.64±36.187±37.39±36.67±40.42±固高組 337.60±19.16354.60±17.61410.40±28.96436.40±31.64456.40±36.22486.60±40.403.±注：與空白組比較，*p＜0.05，與固低組比較， p＜0.05 圖 1-1 不同時間點各組大鼠體重的比較200

（p＜0.05）；固中組 固高組低于模型組 左腎組和固低組（p＜0.05） 各組血 WBC RBC 沒有差異（p＞0.05）；Hb 比較，模型組 左腎組低于空白組（p＜0.05）；固高組 固中組高于模型組 左腎組（p＜0.05） （見表 2，圖 1-3 和 1-4）表 1-2 各組大鼠腎功能、血常規(guī)的比較（x±s）組別腎功能 血常規(guī)尿素氮（mmol/L）肌酐（μmoI/L）WBC（*109/L） RBC（*1012/L）Hb（g/L）空白組 3.38±1.18 64.26±13.29 7.10±2.56 8.59±0.28 155.50±4.95模型組 4.17±1.25 86.46±14.99* 8.35±1.49 8.55±0.56 135.00±4.24*左腎組 3.78±1.65 72.21±15.53* 9.75±1.56 8.68±0.57 132.08±4.57*固低組 4.13±0.83 73.35±11.02* 10.30±2.83 9.95±1.22 146.66±8.50固中組 4.46±0.99 65.39±10.64 9.63±2.75 9.64±1.43 153.00±4.24 固高組 3.91±0.52 68.50±11.45 7.43±1.25 9.09±1.36 151.33±5.13 注：與空白組比較，*p＜0.05；與模型組比較， p＜0.05；與左腎比較， p＜0.05；與固低組比較， p＜0.05
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