研究背景鐵線蓮屬(Clematis)植物屬毛茛科(Ranunculaceae),在我國分布廣泛,化學(xué)成分復(fù)雜,在民間主要用于風(fēng)濕風(fēng)寒、疼痛感染等疾病的治療。甘青鐵線蓮(Clematis tangutica)為鐵線蓮屬植物的一種,主要分布于我國西部地區(qū),在藏醫(yī)藥中用于治療活血通瘀和消化不良等病癥。課題組前期對(duì)甘青鐵線蓮中的皂苷和黃酮類成分進(jìn)行系統(tǒng)分離鑒定,并對(duì)得到的物質(zhì)進(jìn)行了活性篩選,發(fā)現(xiàn)其中一種黃酮苷成分—芹菜素-7-O-β-D-(-6''-p-香豆酰基)-吡喃葡萄糖苷(APG)具有明顯的抗氧化活性。目前,關(guān)于APG心血管保護(hù)作用及機(jī)制的研究已經(jīng)取得進(jìn)展,關(guān)于其腦保護(hù)作用的研究正在推進(jìn),并已在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證,具備進(jìn)一步開發(fā)為治療藥物的可能性。本課題主要從提取和合成兩個(gè)方面對(duì)APG的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化和探索,并對(duì)合成產(chǎn)物的腦保護(hù)作用進(jìn)行驗(yàn)證,為APG的生產(chǎn)和研究提供了一定理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取甘青鐵線蓮總黃酮工藝:在乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、液料比三個(gè)單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)總黃酮提取率建立Box-Behnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),模擬二次回歸模型,通過響應(yīng)面分析,對(duì)超聲提取甘青鐵線蓮總黃酮工藝進(jìn)行優(yōu)化。2.化學(xué)合成活性成分APG:通過查閱文獻(xiàn)和實(shí)驗(yàn)探索,設(shè)計(jì)了以芹菜素、乙酰溴代葡萄糖、香豆酸乙烯酯為起始原料的APG合成路線,并對(duì)催化劑、溶劑等反應(yīng)條件進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)比較,在此基礎(chǔ)上合成目標(biāo)產(chǎn)物APG。3.合成產(chǎn)物的腦保護(hù)作用研究:建立大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型,分為假手術(shù)組、缺血模型組、溶劑組、陽性對(duì)照組(r-tPA)、產(chǎn)物干預(yù)組。通過觀察實(shí)驗(yàn)大鼠的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分及TTC染色腦梗死面積,對(duì)合成產(chǎn)物芹菜素-7-O-(-6''-p-香豆�；�)-吡喃葡萄糖苷的腦保護(hù)作用進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果1.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取甘青鐵線蓮總黃酮工藝:通過模型分析和可行性修正,發(fā)現(xiàn)乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)于總黃酮提取率影響最為顯著,得到最佳提取條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)80%,提取時(shí)間44 min,液料比30.5:1,最大提取率可達(dá)1.266%。2.化學(xué)合成活性成分APG:通過比較實(shí)驗(yàn),確定第三步反應(yīng)采用Lipolase 100T脂肪酶作為催化劑、CH_3CN作為溶劑、反應(yīng)時(shí)間為76h,采用黃酮特征反應(yīng)、ESI-MS,結(jié)合~1H-NMR和~(13)C-NMR等理化數(shù)據(jù)驗(yàn)證合成結(jié)果,最終芹菜素-7-O-(-6''-p-香豆�；�)-吡喃葡萄糖苷合成產(chǎn)率為42.27%。3.合成產(chǎn)物的腦保護(hù)作用研究:與MCAO組相比,合成產(chǎn)物干預(yù)組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著升高,腦梗死面積顯著減少(P0.05),表明通過此合成路線得到的APG具有腦保護(hù)作用。結(jié)論本課題利用響應(yīng)面、催化合成等方法分別從提取和合成兩方面對(duì)于甘青鐵線蓮中活性成分APG的制備工藝進(jìn)行了探索和優(yōu)化,利用大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型驗(yàn)證了合成反應(yīng)中產(chǎn)物的腦保護(hù)作用,對(duì)于APG的量化生產(chǎn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),為甘青鐵線蓮的開發(fā)利用以及心腦血管新藥進(jìn)一步研發(fā)提供了理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

中發(fā)現(xiàn)（70）。Zhao Mei[19]等從粗齒鐵線蓮（C. argentilucida）根部的正丁醇萃取部位中分離得到 1 個(gè)烏蘇烷型三萜皂苷類化合物（68）和 1 個(gè)蒲公英賽烷型三萜皂苷類化合物（69），均為新化合物，化合物 68 的 20 位雙鍵烏蘇烷型苷元結(jié)構(gòu)在鐵線蓮屬植物中首次被發(fā)現(xiàn)，另有 4 個(gè)齊墩果烷型三萜皂苷類化合物（43-46）為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)。張倩[20]等從大葉鐵線蓮（C. heracleifolia）全草的正丁醇萃取部位中分離得到 4 個(gè)齊墩果烷型三萜皂苷類化合物，其中化合物 47 為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)。Zhao Min[21]等從甘青鐵線蓮（C. tangutica）全草甲醇提取物的正丁醇萃取部位中分離鑒定了 16 個(gè)齊墩果烷型三萜皂苷類化合物（9、10、12、48-60），其中化合物 48-55 為新化合物，且化合物 51-54 的 C23，28 位雙糖鏈結(jié)構(gòu)在鐵線蓮屬植物中較為少見。衛(wèi)柯[22]等從美花鐵線蓮（C. potaninii）地上部分正丁醇萃取部位中分離鑒定了 5 個(gè)齊墩果烷型三萜皂苷類化合物（8、61-64），均為首次從該種植物中分離得到，其中化合物 64 為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)�；衔锝Y(jié)構(gòu)見圖 1 及表 1。

空軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文黃酮類線蓮屬植物中的黃酮類成分主要以黃酮苷的形式存在，近年研究中發(fā)主要為芹菜素、木犀草素、山柰酚、槲皮素等。牛江進(jìn)[16]等從甘青鐵酯萃取部位中首次分離得到木犀草素（74）、芹菜素（71）。袁琳[23]等（C. connata）的正丁醇萃取部位中分離鑒定了 11 個(gè)黃酮苷類化合物， 4 個(gè)（76-79）、槲皮素類 2 個(gè)（80、81）、染料木素類 1 個(gè)（88、89），（85）、異牡荊素（86）和過山蕨素（87），均為首次在該種植物中分離4]等從甘青鐵線蓮（C. tangutica）全草的正丁醇萃取部位中分離鑒定了化合物，其中芹菜素類 2 個(gè)（72、73）、木犀草素類 1 個(gè)（75）、槲皮2、83）、異葒草素（85），其中化合物 73 為首次從鐵線蓮屬植物中得到次在該種植物中分離得到。蘇琨[25]等從大瓣鐵線蓮（C. macropetala）萃取部位中首次分離得到槲皮素-7-O-蕓香苷（84）�；衔锝Y(jié)構(gòu)見圖 2

等從東北鐵線蓮（C. manshurica）干燥根莖的乙醇提取物中分離得到兩個(gè)新的木脂素 Clemomanshurinane C（99）和ClemomanshurinaneD（100），對(duì)脂氧化酶具有中度抑制作用�；衔锝Y(jié)構(gòu)見圖3及表3。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2855483