發(fā)布時(shí)間：2020-10-25 02:13

　　 目的研究益氣逐瘀解毒顆粒調(diào)節(jié)Girdin表達(dá)治療大鼠肝纖維化的作用機(jī)制。方法將123只SD雄性大鼠隨機(jī)分成模型對(duì)照組和空白對(duì)照組,模型對(duì)照組予以CCL4、橄欖油混合液(2:3),皮下注射造模,7周后將模型組大鼠隨機(jī)分成中藥高、中、低劑量組,陽(yáng)性對(duì)照組,模型對(duì)照組,原空白對(duì)照組不變。中藥組即益氣逐瘀解毒顆粒高、中、低三個(gè)劑量組,陽(yáng)性對(duì)照組用扶正化瘀膠囊干預(yù),模型對(duì)照組和空白對(duì)照組等體積蒸餾水灌胃,5周后處死大鼠,取肝臟、血清標(biāo)本,進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè):(1)采用HE、MASSON染色法檢測(cè)肝組織損傷及肝纖維化病理指標(biāo);(2)ELISA法檢測(cè)血清HA、LN表達(dá)水平;(3)生化實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)血清肝功指標(biāo)ALT、AST、γ-GT水平;(4)RT-PCR法檢測(cè)肝纖維化相關(guān)因子MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、Col1A1、Col1A2的表達(dá);(5)RT-PCR法檢測(cè)肝纖維化相關(guān)通路中關(guān)鍵因子PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3、PKA、CREB的表達(dá);(6)RT-PCR法、Western Blot、免疫組化法檢測(cè)Girdin的表達(dá)(7)免疫組化法檢測(cè)肝組織中α-SMA表達(dá);結(jié)果1、CCL4造模結(jié)果(1)一般情況:除空白對(duì)照組外,模型對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)及飲食變化明顯,大小便異常,注射藥物部位皮膚潰爛,毛發(fā)臟亂、粗糙,脫落明顯,有死亡情況。肝標(biāo)本大體情況:造模結(jié)束可見肝標(biāo)本萎縮,體積變小,色暗、無(wú)光澤,表面顆粒樣凸起明顯,質(zhì)硬。(2)造模病理結(jié)果:肝纖維化形成,纖維間隔由中央靜脈和匯管區(qū)向周圍延伸,分割肝小葉,并有明顯形成假小葉的趨勢(shì),肝纖維化分級(jí)達(dá)到3級(jí)或以上。2、益氣逐瘀解毒顆粒治療結(jié)果(1)一般情況:治療組大鼠的精神狀態(tài)良好、飲食可、皮毛及色澤較造模時(shí)有顯著改善,皮下潰爛逐漸好轉(zhuǎn),大鼠體重均明顯增加。(2)肝臟標(biāo)本大體情況:益氣逐瘀解毒顆粒各劑量組,肝臟色紅,有光澤,表面光滑,無(wú)顆粒樣凸起,質(zhì)地均勻,邊緣稍鈍;陽(yáng)性對(duì)照組少數(shù)肝臟色暗,無(wú)光澤,質(zhì)較硬,萎縮、邊緣鈍;模型對(duì)照組大多數(shù)肝標(biāo)本色暗,無(wú)光澤,萎縮,質(zhì)硬,周圍圓鈍;空白對(duì)照組肝臟標(biāo)本色鮮紅,有光澤,質(zhì)軟,邊緣銳利。(3)病理指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:益氣逐瘀解毒顆粒各劑量組,膠原纖維含量與模型對(duì)照組比較明顯減少,肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,纖維組織主要分布在匯管區(qū)、中央靜脈及其周圍,低劑量組部分病理切片可見形成較細(xì)條索狀結(jié)構(gòu)甚至向周圍延伸;陽(yáng)性對(duì)照組中僅有少數(shù)出現(xiàn)小葉結(jié)構(gòu)被較粗的纖維間隔分割;模型對(duì)照組多數(shù)肝臟病理切片的肝小葉被較粗的纖維間隔分割;空白對(duì)照組僅少數(shù)膠原纖維分布于匯管區(qū)、中央靜脈。MASSON染色半定量評(píng)分結(jié)果:益氣逐瘀解毒顆粒高劑量組與模型對(duì)照組比較,評(píng)分顯著降低(p0.01)。(4)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:各組肝功均在正常范圍。與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組AST、ALT、γ-GT水平顯著升高(p0.05);與模型對(duì)照組比較,益氣逐瘀解毒顆粒高劑量組AST、ALT、γ-GT的水平顯著降低(p0.05);(5)ELISA法檢測(cè)肝纖維化指標(biāo)LN水平的結(jié)果:模型對(duì)照組與空白對(duì)照組比較,LN水平顯著升高(p0.01);與模型對(duì)照組比較,各個(gè)藥物干預(yù)組中均可見LN顯著降低(p0.05);益氣逐瘀解毒顆粒低劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組(扶正化瘀組)比較,LN含量顯著下降(p0.05).(6)RT-PCR法檢測(cè)大鼠肝組織中MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13、TIMP-1、Col1A1、Col1A2表達(dá)的結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13表達(dá)量顯著下降(p0.05),TIMP-1、Col1A1、Col1A2表達(dá)顯著升高(p0.05);與模型對(duì)照組比較,益氣逐瘀解毒顆粒高劑量組MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13表達(dá)量顯著升高(p0.05),TIMP-1、Col1A1、Col1A2表達(dá)顯著下降(p0.05);(7)RT-PCR法檢測(cè)大鼠肝組織中Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3、PKA、CREB表達(dá)結(jié)果:(1)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3的表達(dá)顯著升高(p0.05),PKA、CREB的表達(dá)顯著下降(p0.05);(2)與模型對(duì)照組比較,益氣逐瘀解毒顆粒高劑量組Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3表達(dá)顯著下降(p0.05),PKA、CREB的表達(dá)顯著顯著升高(p0.05);(3)與陽(yáng)性對(duì)照組比較,中藥高劑量組Girdin、PI3K、AKT、FOXO1、TGF-β1、SMAD2、SMAD3表達(dá)顯著下降(p0.05),PKA、CREB的表達(dá)顯著顯著升高(p0.05);(8)Western Blot、免疫組化法檢測(cè)肝組織中Girdin的表達(dá)結(jié)果:(1)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組Girdin表達(dá)量顯著升高(p0.01);(2)與模型對(duì)照組比較,中藥高劑量組Girdin表達(dá)量顯著下降(p0.05);(9)免疫組化法檢測(cè)肝組織中α-SMA表達(dá)結(jié)果:(1)與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組α-SMA表達(dá)量顯著升高(p0.01);(2)與模型對(duì)照組比較,各個(gè)治療組α-SMA表達(dá)量顯著下降(p0.01);(3)與陽(yáng)性對(duì)照組比較,益氣逐瘀解毒顆粒高、中劑量組α-SMA表達(dá)量顯著下降(p0.05);(4)益氣逐瘀解毒顆粒低劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比較,無(wú)顯著差異(p0.05);結(jié)論1、皮下注射CCL4成功構(gòu)建肝纖維化大鼠模型;2、益氣逐瘀解毒顆粒具有抗肝纖維化作用;3、益氣逐瘀解毒顆粒能通過(guò)下調(diào)Girdin表達(dá),使促纖維化信號(hào)通路受抑,最終起到治療肝纖維化的作用;
【學(xué)位單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
縮略詞及中英文全稱
中文摘要
Abstract
前言
1、實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
    1.3 主要試劑
    1.4 主要試劑的配制
    1.5 實(shí)驗(yàn)儀器、器材
2、實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 CCL4肝纖維化大鼠模型制備
    2.2 益氣逐瘀解毒顆粒灌胃治療
    2.3 大鼠一般情況及肝標(biāo)本的大體觀察
    2.4 標(biāo)本收集
    2.5 指標(biāo)檢測(cè)
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 肝纖維化模型制備結(jié)果
    3.2 治療期間觀察
    3.3 益氣逐瘀解毒顆粒治療的結(jié)果
討論
    1、益氣逐瘀解毒顆粒的來(lái)源及藥物組成
        1.1 益氣逐瘀解毒顆粒的來(lái)源
        1.2 益氣逐瘀解毒顆粒的方解
        1.3 益氣逐瘀解毒顆粒的藥物組成
    2、關(guān)于陽(yáng)性藥物選擇依據(jù)
    3、模型制備方法的選擇
    4、HE、MASSON染色及血清HA、LN、ALT、AST、γ-GT在肝纖維化診療中的意義
        4.1 HE、MASSON染色在肝纖維化診斷中的意義
        4.2 血清HA、LN在肝纖維化診斷中的意義
        4.3 ALT、AST、γ-GT在肝纖維化中的作用討論
    5、肝纖維化發(fā)生機(jī)制探討
        5.1 肝纖維化與α-SMA、TGF-β1 的相關(guān)性
        5.2 肝纖維化與MMPs、TIMPs的相關(guān)性
    6、肝纖維化與Girdin的相關(guān)性
        6.1 Girdin與HSCs的相關(guān)性
        6.2 Girdin對(duì)肝纖維化相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控
總結(jié)及展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附圖
實(shí)驗(yàn)路線圖
綜述
    參考文獻(xiàn)
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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2855305