目的:探討六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對人肝癌BEL-7402細胞凋亡及腫瘤血管生成的影響。方法:體外培養(yǎng)BEL-7402細胞,以不同質(zhì)量濃度的六味地黃醇提物作用于細胞,CCK-8法檢測其對細胞生長的影響,選擇后續(xù)實驗濃度。將BEL-7402細胞分為正常對照組、六味地黃醇提物100 mg/ml組、順鉑1 mg/ml組、六味地黃醇提物100 mg/ml+順鉑1 mg/ml組。CCK-8法檢測細胞增殖抑制率,細胞成像分析系統(tǒng)觀察BEL-7402細胞形態(tài)學變化,Hoechst染色法觀察細胞凋亡現(xiàn)象,免疫熒光法檢測腫瘤血管生成相關因子:血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、促血管生成素-2(Ang-2)、血小板反應素(TSP)、金屬蛋白酶-2組織抑制因子(TIMP-2)蛋白表達水平的影響。結果:六味地黃丸醇提物能呈劑量依賴性地抑制BEL-7402細胞活性,選擇100 mg/ml用于后續(xù)實驗。與正常對照組比較,各用藥組細胞抑制率均明顯升高;細胞胞質(zhì)回縮,漂浮的死細胞增多;胞核偏于一側,染色質(zhì)濃染,呈馬蹄形或月牙狀的典型凋亡特征;細胞內(nèi)VEGF、Ang-2蛋白表達明顯降低,而TSP、TIMP-2蛋白表達明顯升高(P0.05或P0.01)。與順鉑1 mg/ml組和六味地黃醇提物100 mg/kg組比較,順鉑1 mg/ml+六味地黃醇提物100 mg/ml組更能明顯抑制BEL-7402細胞增殖;細胞內(nèi)VEGF、Ang-2蛋白表達明顯降低,而TSP、TIMP-2蛋白表達明顯升高(P0.05或P0.01)。結論:六味地黃醇提物及其聯(lián)合順鉑能誘導BEL-7402細胞凋亡,并可能通過下調(diào)細胞內(nèi)腫瘤血管相關VEGF、Ang-2蛋白表達、上調(diào)TSP、TIMP-2蛋白表達增強對BEL-7402細胞的抑制作用。
【部分圖文】：

細胞形態(tài)學用細胞形態(tài)陽性率表示,細胞形態(tài)陽性率=正常細胞/細胞總數(shù)×100%。與正常對照組(陽性率為100%)比較,六味地黃醇提物組陽性率為(51.06±3.06)%、順鉑組陽性率為(40.31±2.87)%、聯(lián)合用藥組陽性率為(29.43±3.54)%。細胞胞質(zhì)回縮,細胞變成圓球形或不規(guī)則形,典型的正常形態(tài)細胞減少,細胞折光性降低,漂浮的死細胞增多。結果詳見圖1。2.3 六味地黃醇提物及聯(lián)合順鉑對BEL-7402細胞抑制率的影響

細胞凋亡程度用細胞凋亡率表示,細胞凋亡率=凋亡細胞/細胞總數(shù)×100 %。Hoechst染色結果顯示,與正常對照組比較(凋亡率為0 %),六味地黃醇提物組凋亡率為(25.36±3.65)%、順鉑組凋亡率為(34.68±2.74)%、聯(lián)合用藥組凋亡率為(63.15±1.97)%,凋亡的細胞顯著增多(P<0.05),凋亡細胞核偏于一側,染色質(zhì)濃染,呈馬蹄形或月牙狀的典型凋亡特征,提示六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑具誘導BEL-7402細胞凋亡的作用。結果詳見圖2。2.5 六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對VEGF、Ang-2、TSP、TIMP2蛋白表達水平的影響

表3 六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對VEGF、Ang-2、TSP、TIMP2蛋白表達水平的影響 ( x ˉ ±s,n=3) 組別 濃度/(mg/ml) D/OD VEGF Ang-2 TSP TIMP2 正常對照 2873±140 3546±255 1564±99 1121±63 順鉑 1 1669±102*△ 2605±165*△ 2172±122*△ 2565±143*△ 六味地黃醇提物 100 2126±134*△ 2827±150*△ 1961±138*△ 2354±132*△ 六味地黃醇提物+順鉑 100+1 1332±84* 1944±74* 2728±173* 3347±200*圖4 六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對BEL-7402細胞Ang-2蛋白表達的影響(免疫熒光,×200)
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 徐新;陳向凡;唐春梅;;七葉皂苷鈉體外抑制Bel-7402細胞增殖[J];江蘇醫(yī)藥;2013年24期

2 羅輝;汪亞君;陳杰;劉江琴;張海濤;;根皮素誘導肝癌BEL-7402細胞凋亡[J];南方醫(yī)科大學學報;2008年07期

3 羅輝;馬超;汪亞君;陳杰;劉江琴;張海濤;;高良姜素誘導肝癌BEL-7402細胞凋亡的研究[J];中藥材;2008年08期

4 姜艷霞;紀朋艷;王瑩;朱文赫;羅軍;徐俊杰;蘆曉晶;;海帶多糖對人肝癌bel-7402細胞存活和凋亡的影響[J];上海中醫(yī)藥雜志;2015年03期

5 路蕾;朱文淵;林國旺;梁康檐;;桂皮酸誘導Bel-7402人肝癌細胞凋亡的作用及機制[J];中山大學學報(醫(yī)學科學版);2013年04期

6 羅穎穎;陳蘭英;簡暉;崔亞茹;謝欣序;劉鵬;楊世林;郭建生;;白頭翁皂苷調(diào)節(jié)Bel-7402人肝癌異體移植瘤裸鼠能量代謝的研究[J];中草藥;2014年07期

7 皇甫超申;劉彬;馬永超;鄧錦波;;苦參堿誘導人肝癌細胞BEL-7402自吞噬性死亡[J];中草藥;2008年09期

8 韓曉;吳成愛;王偉;劉舒;王綠婭;;荷葉堿對bel-7402細胞膽固醇代謝的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2008年09期

9 郭昱;姚樹坤;;黃芩甙對人肝癌BEL-7402細胞系侵襲和轉(zhuǎn)移的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2006年06期

10 姜艷霞;紀朋艷;朱文赫;張巍;徐俊杰;李妍;雷鈞濤;;海帶多糖對人肝癌細胞Bel-7402增殖的抑制作用及其機制[J];食品科學;2015年15期

相關博士學位論文 前3條

1 簡序;酪絲亮肽在人肝癌BEL-7402細胞中的定位及其跨膜轉(zhuǎn)運機制的初步研究[D];天津醫(yī)科大學;2008年

2 蘆沖;尖葉假龍膽醇提物對H_(22)荷瘤小鼠及人肝癌Bel-7402細胞的影響和機制研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2016年

3 李衛(wèi)民;影響方劑中地黃功效發(fā)揮方向的諸因素研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2009年

相關碩士學位論文 前10條

1 李忠魁;漢黃芩苷對人肝癌細胞BEL-7402的抑制作用研究[D];中南大學;2007年

2 張銳;烏骨藤注射液對Bel-7402細胞增殖及血管生成作用的實驗研究[D];揚州大學;2009年

3 姬劍;秦皮乙素通過線粒體途徑誘導人肝癌BEL-7402細胞凋亡[D];遼寧醫(yī)學院;2015年

4 王小峰;苦參堿對肝癌細胞BEL-7402凋亡和自噬相關基因表達的影響[D];山西醫(yī)科大學;2014年

5 張睿蘇;龍枝配伍促H_(22)荷瘤小鼠腫瘤細胞及人肝癌Bel-7402細胞凋亡作用的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2017年

6 徐方野;甘草次酸類及甘草查爾酮類化合物對人肝癌Bel-7402細胞的抗癌活性及其機制的研究[D];新疆醫(yī)科大學;2013年

7 王巖;桂附地黃方多糖質(zhì)量控制與評價方法研究[D];沈陽藥科大學;2009年

8 楊曉丹;裙帶菜褐藻多糖硫酸酯對SMMC-7721腫瘤細胞凋亡的誘導及對BEL-7402的遷移抑制作用[D];大連醫(yī)科大學;2010年

9 李莉萍;白藜蘆醇對人肝癌細胞株Bel-7402作用的實驗研究[D];中南大學;2010年

10 周倩;地黃標準物質(zhì)及熟地黃質(zhì)量評價標準的研究[D];河南大學;2014年

本文編號：2854835