目的:探討六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對(duì)人肝癌BEL-7402細(xì)胞凋亡及腫瘤血管生成的影響。方法:體外培養(yǎng)BEL-7402細(xì)胞,以不同質(zhì)量濃度的六味地黃醇提物作用于細(xì)胞,CCK-8法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,選擇后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。將BEL-7402細(xì)胞分為正常對(duì)照組、六味地黃醇提物100 mg/ml組、順鉑1 mg/ml組、六味地黃醇提物100 mg/ml+順鉑1 mg/ml組。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,細(xì)胞成像分析系統(tǒng)觀察BEL-7402細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,Hoechst染色法觀察細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,免疫熒光法檢測(cè)腫瘤血管生成相關(guān)因子:血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、促血管生成素-2(Ang-2)、血小板反應(yīng)素(TSP)、金屬蛋白酶-2組織抑制因子(TIMP-2)蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果:六味地黃丸醇提物能呈劑量依賴性地抑制BEL-7402細(xì)胞活性,選擇100 mg/ml用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。與正常對(duì)照組比較,各用藥組細(xì)胞抑制率均明顯升高;細(xì)胞胞質(zhì)回縮,漂浮的死細(xì)胞增多;胞核偏于一側(cè),染色質(zhì)濃染,呈馬蹄形或月牙狀的典型凋亡特征;細(xì)胞內(nèi)VEGF、Ang-2蛋白表達(dá)明顯降低,而TSP、TIMP-2蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05或P0.01)。與順鉑1 mg/ml組和六味地黃醇提物100 mg/kg組比較,順鉑1 mg/ml+六味地黃醇提物100 mg/ml組更能明顯抑制BEL-7402細(xì)胞增殖;細(xì)胞內(nèi)VEGF、Ang-2蛋白表達(dá)明顯降低,而TSP、TIMP-2蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05或P0.01)。結(jié)論:六味地黃醇提物及其聯(lián)合順鉑能誘導(dǎo)BEL-7402細(xì)胞凋亡,并可能通過(guò)下調(diào)細(xì)胞內(nèi)腫瘤血管相關(guān)VEGF、Ang-2蛋白表達(dá)、上調(diào)TSP、TIMP-2蛋白表達(dá)增強(qiáng)對(duì)BEL-7402細(xì)胞的抑制作用。
【部分圖文】：

細(xì)胞形態(tài)學(xué)用細(xì)胞形態(tài)陽(yáng)性率表示,細(xì)胞形態(tài)陽(yáng)性率=正常細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%。與正常對(duì)照組(陽(yáng)性率為100%)比較,六味地黃醇提物組陽(yáng)性率為(51.06±3.06)%、順鉑組陽(yáng)性率為(40.31±2.87)%、聯(lián)合用藥組陽(yáng)性率為(29.43±3.54)%。細(xì)胞胞質(zhì)回縮,細(xì)胞變成圓球形或不規(guī)則形,典型的正常形態(tài)細(xì)胞減少,細(xì)胞折光性降低,漂浮的死細(xì)胞增多。結(jié)果詳見(jiàn)圖1。2.3 六味地黃醇提物及聯(lián)合順鉑對(duì)BEL-7402細(xì)胞抑制率的影響

細(xì)胞凋亡程度用細(xì)胞凋亡率表示,細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100 %。Hoechst染色結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較(凋亡率為0 %),六味地黃醇提物組凋亡率為(25.36±3.65)%、順鉑組凋亡率為(34.68±2.74)%、聯(lián)合用藥組凋亡率為(63.15±1.97)%,凋亡的細(xì)胞顯著增多(P<0.05),凋亡細(xì)胞核偏于一側(cè),染色質(zhì)濃染,呈馬蹄形或月牙狀的典型凋亡特征,提示六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑具誘導(dǎo)BEL-7402細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果詳見(jiàn)圖2。2.5 六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對(duì)VEGF、Ang-2、TSP、TIMP2蛋白表達(dá)水平的影響

表3 六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對(duì)VEGF、Ang-2、TSP、TIMP2蛋白表達(dá)水平的影響 ( x ˉ ±s,n=3) 組別 濃度/(mg/ml) D/OD VEGF Ang-2 TSP TIMP2 正常對(duì)照 2873±140 3546±255 1564±99 1121±63 順鉑 1 1669±102*△ 2605±165*△ 2172±122*△ 2565±143*△ 六味地黃醇提物 100 2126±134*△ 2827±150*△ 1961±138*△ 2354±132*△ 六味地黃醇提物+順鉑 100+1 1332±84* 1944±74* 2728±173* 3347±200*圖4 六味地黃醇提物聯(lián)合順鉑對(duì)BEL-7402細(xì)胞Ang-2蛋白表達(dá)的影響(免疫熒光,×200)
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